董曉亞++雷勇勝+ 傅琳 楊忠峰
[摘 要] 目的:采用分析儀器對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定,驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性及可行性。方法:通過元素分析儀分析伊曲康唑的元素組成,利用紫外(UV)、紅外(FTIR)、質(zhì)譜(MS)、核磁共振碳譜(13C-NMR)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、氫氫相關(guān)譜(1H-1HCOSY)、碳?xì)湎嚓P(guān)譜(HMQC)、碳?xì)溥h(yuǎn)程相關(guān)譜(HMBC)等對(duì)伊曲康唑進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,并結(jié)合熱重-差熱分析(TGA/DSC)和X射線粉末衍射進(jìn)行晶型鑒定。結(jié)果:通過紫外、紅外、質(zhì)譜和核磁等實(shí)驗(yàn)證實(shí)了伊曲康唑的結(jié)構(gòu),并通過熔點(diǎn)、X射線粉末衍射和DSC等實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了伊曲康唑的晶型。結(jié)論:該方法準(zhǔn)確可行,可對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定,可為生產(chǎn)過程控制提供理論依據(jù)。
[關(guān)鍵詞] 伊曲康唑;結(jié)構(gòu)確證;晶型鑒定;特性鑒定
中圖分類號(hào):O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):2095-5200(2016)06-087-04
DOI:10.11876/mimt201606033
伊曲康唑(itraconazole)由美國強(qiáng)生公司研制,主要通過抑制細(xì)胞色素P450氧化酶介導(dǎo)的麥角甾醇的合成,從而對(duì)抗深部真菌和淺表真菌[1]。伊曲康唑是一個(gè)由兩對(duì)對(duì)映異構(gòu)體組成的外消旋混合物,分子式為C35H38Cl2N8O4,分子量為705.64,結(jié)構(gòu)式見圖1。
圖1 伊曲康唑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
關(guān)于伊曲康唑的新劑型制備和藥理作用方面的研究文獻(xiàn)較多[2-3],而關(guān)于其結(jié)構(gòu)確證方面的文獻(xiàn)資料尚不夠完整[4-5]。該研究通過對(duì)伊曲康唑進(jìn)行元素分析、紫外吸收光譜(UV)、紅外吸收光譜(FTIR)、高分辨質(zhì)譜(HR-MS)、核磁共振碳譜(13C-NMR)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、核磁共振DEPT135°試驗(yàn)、氫氫相關(guān)譜(1H-1HCOSY)、碳?xì)湎嚓P(guān)譜(HMQC)、碳?xì)溥h(yuǎn)程相關(guān)譜(HMBC)、熱重-差熱分析(TGA/DSC)和X射線粉末衍射分析,綜合各分析結(jié)果對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
德國elementar vario EL元素分析儀、HP 8453紫外分光光度計(jì)、美國Nicolet公司ThermoNicolet is5紅外光譜儀、Agilent Technologies6520型 Accurate-Mass-Q-TOF LC/MS質(zhì)譜儀、BRUKER AV-400超導(dǎo)核磁共振儀、D/max-2500 X射線粉末衍射儀、METTLER LOLEDO TGA-DSCI分析儀。
1.2 試藥
所有核磁共振實(shí)驗(yàn)均以CDCl3為溶劑,TMS(四甲基硅烷)為內(nèi)標(biāo)。所有試劑均為分析純。
1.3 樣品
伊曲康唑樣品[6]為某制藥企業(yè)提供,批號(hào)Y1012026,經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定,符合結(jié)構(gòu)確證所需純度要求。對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所(含量為99.93%),批號(hào)10631-200401。
2 測(cè)定方法與結(jié)果分析
2.1 理化性質(zhì)
2.1.1 伊曲康唑?yàn)榈S色粉末,按照中國藥典第二部附錄溶解度測(cè)定法測(cè)得,伊曲康唑不溶于水,在乙醇中微溶,二氯甲烷中易溶。
2.1.2 旋光度測(cè)定 取伊曲康唑供試品和對(duì)照品適量,加二氯甲烷溶解并定容量稀釋成每1mL含0.1g的溶液,測(cè)得旋光度均為0.1°。
2.1.3 熔點(diǎn)測(cè)定 取伊曲康唑供試品和對(duì)照品適量,分別按照中國藥典第二部附錄VI C熔點(diǎn)測(cè)定方法第一法對(duì)伊曲康唑的熔點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明伊曲康唑Y1012026樣品和伊曲康唑?qū)φ掌返娜埸c(diǎn)均為166℃。
2.2 有機(jī)元素分析
取伊曲康唑樣品進(jìn)行C、H、N元素分析,與理論基本計(jì)算值相符,見表1。
2.3 紫外吸收光譜
伊曲康唑樣品在甲醇中的紫外吸收光譜顯示,在262nm處有最大吸收(K帶),236nm處有最小吸收。與中性溶液相比,伊曲康唑在0.1 mol/L的鹽酸甲醇溶液中的最大吸收峰為259nm,最小吸收峰為238nm,并出現(xiàn)222nm的吸收峰;在0.1 mol/L的氫氧化鈉甲醇溶液中的最大吸收峰為262nm,最小吸收峰為239nm。
2.4 紅外光譜
按照中國藥典2010年二部對(duì)儀器進(jìn)行校正,符合規(guī)定。采取KBr壓片制樣。
伊曲康唑的紅外光譜表明,化合物含有苯環(huán)、甲基、亞甲基、芳香酮、醚鍵和苯環(huán)的間位、對(duì)位取代,具體的紅外數(shù)據(jù)與歸屬見表2。
2.5 高分辨質(zhì)譜
采用高分辨質(zhì)譜(ESI源)進(jìn)行分析。伊曲康唑質(zhì)譜的m/z為分子離子峰[M+H]+,m/z為705.2462,與分子量705.2465一致。伊曲康唑的ESI-MS質(zhì)譜圖見圖2。
2.6 核磁共振譜
1H-NMR觀測(cè)頻率為400.13M Hz,1H90°脈沖寬度為13.6μs;13C-NMR觀測(cè)頻率為100.62M Hz,13C90°脈沖寬度為6.5μs。
2.6.1 1H核磁共振譜 伊曲康唑樣品的具體1H-NMR數(shù)據(jù)見表3,1H-NMR圖譜見圖3。結(jié)合1H-1HCOSY圖譜、HSQC圖譜和HMBC圖譜,對(duì)1H核磁共振譜進(jìn)行歸屬。
伊曲康唑樣品的1H譜顯示有38個(gè)質(zhì)子,共有22組氫,從高場(chǎng)到低場(chǎng)各氫的積分比為3:3:1:1:4:4:1:2:1:1:1:2:2:2:2:1:2:1:1:1:1:1,與伊曲康唑結(jié)構(gòu)相符,且與對(duì)照品一致。
2.6.2 13C核磁共振譜 伊曲康唑樣品的具體13C-NMR數(shù)據(jù)見表4,核磁共振碳譜DEPT θ=135°見圖4,13C-NMR譜見圖5。
伊曲康唑13C圖譜圖譜上除溶劑峰(δ 76.68-77.31ppm)外共有29個(gè)峰,其中6個(gè)碳信號(hào)重合,實(shí)際有35個(gè)碳;由DEPT135°譜可知,分子中有8個(gè)仲碳和9個(gè)季碳,與伊曲康唑結(jié)構(gòu)式相符。
2.7 X-射線粉末衍射及熱分析
通過對(duì)伊曲康唑進(jìn)行X-射線粉末衍射分析和熱分析,伊曲康唑樣品與對(duì)照品的衍射圖中各衍射峰和強(qiáng)度一致。DSC分析結(jié)果顯示,伊曲康唑的DSC曲線有一個(gè)吸收峰,樣品與對(duì)照品的吸熱峰峰頂溫度均為167.86℃。TGA曲線中,在室溫到150℃范圍內(nèi),未見熱失重峰,表明本品不含吸附水或結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑。X-射線粉末衍射測(cè)定結(jié)果如表5。
2.8 晶型分析
根據(jù)伊曲康唑樣品與對(duì)照品的熔點(diǎn)測(cè)定, X射線粉末衍射結(jié)果和DSC曲線,伊曲康唑樣品Y1012026與對(duì)照品晶型一致。伊曲康唑樣品Y1012026的X-粉末衍射結(jié)果中,其特征峰的衍射角2θ值為14.42°,17.4°,17.9°,20.36°,23.44°和25.3°;DSC曲線有一個(gè)吸收峰,吸熱峰峰頂溫度均為167.86℃。伊曲康唑樣品的X射線粉末衍射圖譜和DSC曲線對(duì)比結(jié)果如圖6、7。
2.9 綜合解析
經(jīng)過對(duì)伊曲康唑的核磁共振一維、二維圖譜的測(cè)定,可進(jìn)一步確定目標(biāo)化合物與伊曲康唑的分子結(jié)構(gòu)式一致[7-8],并通過對(duì)其進(jìn)行紫外、紅外光譜測(cè)定,質(zhì)譜測(cè)定,確定目標(biāo)化合物與伊曲康唑的結(jié)構(gòu)式一致,旋光度為0.1°,表明為消旋體,其結(jié)構(gòu)為(士)-1-仲丁基-4-[4-[4-[4-[[(2R* , 4 S * )2-(2,4-二氯苯基)-2-(lH-l,2,4-三氮唑基-1-甲基)-1,3-二氧環(huán)戊-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-△2 –l,2,4-三氮唑-5-酮。再通過對(duì)其進(jìn)行X-射線粉末衍射和DSC的測(cè)定,確定其晶型與對(duì)照品一致,進(jìn)一步為伊曲康唑的合成和質(zhì)量控制提供了重要的參考依據(jù)。
3 討論
3.1 伊曲康唑化合物中H15是受鄰位H16、H18影響,氫譜峰應(yīng)裂分為三重峰,但δ 4.318處為一組包含1個(gè)質(zhì)子的多重峰,與δ 3.479,δ 3.793和δ 3.890處質(zhì)子相關(guān),且與δ 74.60處的叔碳相關(guān),推斷可能原因是由于C15為手性碳,影響H15的裂分,關(guān)于伊曲康唑化合物手性碳的研究還需進(jìn)一步深入。
3.2 通過對(duì)比紅外,DSC曲線和X-射線粉末衍射,伊曲康唑原料藥的晶型與對(duì)照品一致。與Shankar等[9]對(duì)伊曲康唑原料藥的晶型的研究相比,其DSC曲線、IR和X-射線粉末衍射結(jié)果一致,表明該伊曲康唑Y1012026樣品晶型與對(duì)照品及文獻(xiàn)資料一致。
3.3 試驗(yàn)證實(shí)該方法準(zhǔn)確可行,可作為伊曲康唑的特性鑒定方法,為以后伊曲康唑的生產(chǎn)過程控制提供理論依據(jù)。
參 考 文 獻(xiàn)
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