董曉亞++雷勇勝+　傅琳　楊忠峰

[摘 要] 目的：采用分析儀器對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定，驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性及可行性。方法：通過元素分析儀分析伊曲康唑的元素組成，利用紫外（UV）、紅外（FTIR）、質(zhì)譜（MS）、核磁共振碳譜（13C-NMR）、核磁共振氫譜（1H-NMR）、氫氫相關(guān)譜（1H-1HCOSY）、碳?xì)湎嚓P(guān)譜（HMQC）、碳?xì)溥h(yuǎn)程相關(guān)譜（HMBC）等對(duì)伊曲康唑進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，并結(jié)合熱重-差熱分析（TGA/DSC）和X射線粉末衍射進(jìn)行晶型鑒定。結(jié)果：通過紫外、紅外、質(zhì)譜和核磁等實(shí)驗(yàn)證實(shí)了伊曲康唑的結(jié)構(gòu)，并通過熔點(diǎn)、X射線粉末衍射和DSC等實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了伊曲康唑的晶型。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可行，可對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定，可為生產(chǎn)過程控制提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 伊曲康唑；結(jié)構(gòu)確證；晶型鑒定；特性鑒定

中圖分類號(hào)：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-5200（2016）06-087-04

DOI：10.11876/mimt201606033

伊曲康唑（itraconazole）由美國強(qiáng)生公司研制，主要通過抑制細(xì)胞色素P450氧化酶介導(dǎo)的麥角甾醇的合成，從而對(duì)抗深部真菌和淺表真菌[1]。伊曲康唑是一個(gè)由兩對(duì)對(duì)映異構(gòu)體組成的外消旋混合物，分子式為C35H38Cl2N8O4，分子量為705.64，結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 伊曲康唑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

關(guān)于伊曲康唑的新劑型制備和藥理作用方面的研究文獻(xiàn)較多[2-3]，而關(guān)于其結(jié)構(gòu)確證方面的文獻(xiàn)資料尚不夠完整[4-5]。該研究通過對(duì)伊曲康唑進(jìn)行元素分析、紫外吸收光譜（UV）、紅外吸收光譜（FTIR）、高分辨質(zhì)譜（HR-MS）、核磁共振碳譜（13C-NMR）、核磁共振氫譜（1H-NMR）、核磁共振DEPT135°試驗(yàn)、氫氫相關(guān)譜（1H-1HCOSY）、碳?xì)湎嚓P(guān)譜（HMQC）、碳?xì)溥h(yuǎn)程相關(guān)譜（HMBC）、熱重-差熱分析（TGA/DSC）和X射線粉末衍射分析，綜合各分析結(jié)果對(duì)伊曲康唑進(jìn)行特性鑒定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

德國elementar vario EL元素分析儀、HP 8453紫外分光光度計(jì)、美國Nicolet公司ThermoNicolet is5紅外光譜儀、Agilent Technologies6520型 Accurate-Mass-Q-TOF LC/MS質(zhì)譜儀、BRUKER AV-400超導(dǎo)核磁共振儀、D/max-2500 X射線粉末衍射儀、METTLER LOLEDO TGA-DSCI分析儀。

1.2 試藥

所有核磁共振實(shí)驗(yàn)均以CDCl3為溶劑，TMS（四甲基硅烷）為內(nèi)標(biāo)。所有試劑均為分析純。

1.3 樣品

伊曲康唑樣品[6]為某制藥企業(yè)提供，批號(hào)Y1012026，經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定，符合結(jié)構(gòu)確證所需純度要求。對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所（含量為99.93%），批號(hào)10631-200401。

2 測(cè)定方法與結(jié)果分析

2.1 理化性質(zhì)

2.1.1 伊曲康唑?yàn)榈S色粉末，按照中國藥典第二部附錄溶解度測(cè)定法測(cè)得，伊曲康唑不溶于水，在乙醇中微溶，二氯甲烷中易溶。

2.1.2 旋光度測(cè)定 取伊曲康唑供試品和對(duì)照品適量，加二氯甲烷溶解并定容量稀釋成每1mL含0.1g的溶液，測(cè)得旋光度均為0.1°。

2.1.3 熔點(diǎn)測(cè)定 取伊曲康唑供試品和對(duì)照品適量，分別按照中國藥典第二部附錄VI C熔點(diǎn)測(cè)定方法第一法對(duì)伊曲康唑的熔點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明伊曲康唑Y1012026樣品和伊曲康唑?qū)φ掌返娜埸c(diǎn)均為166℃。

2.2 有機(jī)元素分析

取伊曲康唑樣品進(jìn)行C、H、N元素分析，與理論基本計(jì)算值相符，見表1。

2.3 紫外吸收光譜

伊曲康唑樣品在甲醇中的紫外吸收光譜顯示，在262nm處有最大吸收（K帶），236nm處有最小吸收。與中性溶液相比，伊曲康唑在0.1 mol/L的鹽酸甲醇溶液中的最大吸收峰為259nm，最小吸收峰為238nm，并出現(xiàn)222nm的吸收峰；在0.1 mol/L的氫氧化鈉甲醇溶液中的最大吸收峰為262nm，最小吸收峰為239nm。

2.4 紅外光譜

按照中國藥典2010年二部對(duì)儀器進(jìn)行校正，符合規(guī)定。采取KBr壓片制樣。

伊曲康唑的紅外光譜表明，化合物含有苯環(huán)、甲基、亞甲基、芳香酮、醚鍵和苯環(huán)的間位、對(duì)位取代，具體的紅外數(shù)據(jù)與歸屬見表2。

2.5 高分辨質(zhì)譜

采用高分辨質(zhì)譜（ESI源）進(jìn)行分析。伊曲康唑質(zhì)譜的m/z為分子離子峰[M+H]+，m/z為705.2462，與分子量705.2465一致。伊曲康唑的ESI-MS質(zhì)譜圖見圖2。

2.6 核磁共振譜

1H-NMR觀測(cè)頻率為400.13M Hz，1H90°脈沖寬度為13.6μs；13C-NMR觀測(cè)頻率為100.62M Hz，13C90°脈沖寬度為6.5μs。

2.6.1 1H核磁共振譜 伊曲康唑樣品的具體1H-NMR數(shù)據(jù)見表3，1H-NMR圖譜見圖3。結(jié)合1H-1HCOSY圖譜、HSQC圖譜和HMBC圖譜，對(duì)1H核磁共振譜進(jìn)行歸屬。

伊曲康唑樣品的1H譜顯示有38個(gè)質(zhì)子，共有22組氫，從高場(chǎng)到低場(chǎng)各氫的積分比為3：3：1：1：4：4：1：2：1：1：1：2：2：2：2：1：2：1：1：1：1：1，與伊曲康唑結(jié)構(gòu)相符，且與對(duì)照品一致。

2.6.2 13C核磁共振譜 伊曲康唑樣品的具體13C-NMR數(shù)據(jù)見表4，核磁共振碳譜DEPT θ=135°見圖4，13C-NMR譜見圖5。

伊曲康唑13C圖譜圖譜上除溶劑峰（δ 76.68-77.31ppm）外共有29個(gè)峰，其中6個(gè)碳信號(hào)重合，實(shí)際有35個(gè)碳；由DEPT135°譜可知，分子中有8個(gè)仲碳和9個(gè)季碳，與伊曲康唑結(jié)構(gòu)式相符。

2.7 X-射線粉末衍射及熱分析

通過對(duì)伊曲康唑進(jìn)行X-射線粉末衍射分析和熱分析，伊曲康唑樣品與對(duì)照品的衍射圖中各衍射峰和強(qiáng)度一致。DSC分析結(jié)果顯示，伊曲康唑的DSC曲線有一個(gè)吸收峰，樣品與對(duì)照品的吸熱峰峰頂溫度均為167.86℃。TGA曲線中，在室溫到150℃范圍內(nèi)，未見熱失重峰，表明本品不含吸附水或結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑。X-射線粉末衍射測(cè)定結(jié)果如表5。

2.8 晶型分析

根據(jù)伊曲康唑樣品與對(duì)照品的熔點(diǎn)測(cè)定， X射線粉末衍射結(jié)果和DSC曲線，伊曲康唑樣品Y1012026與對(duì)照品晶型一致。伊曲康唑樣品Y1012026的X-粉末衍射結(jié)果中，其特征峰的衍射角2θ值為14.42°，17.4°，17.9°，20.36°，23.44°和25.3°；DSC曲線有一個(gè)吸收峰，吸熱峰峰頂溫度均為167.86℃。伊曲康唑樣品的X射線粉末衍射圖譜和DSC曲線對(duì)比結(jié)果如圖6、7。

2.9 綜合解析

經(jīng)過對(duì)伊曲康唑的核磁共振一維、二維圖譜的測(cè)定，可進(jìn)一步確定目標(biāo)化合物與伊曲康唑的分子結(jié)構(gòu)式一致[7-8]，并通過對(duì)其進(jìn)行紫外、紅外光譜測(cè)定，質(zhì)譜測(cè)定，確定目標(biāo)化合物與伊曲康唑的結(jié)構(gòu)式一致，旋光度為0.1°，表明為消旋體，其結(jié)構(gòu)為（士）-1-仲丁基-4-[4-[4-[4-[[（2R* ， 4 S * ）2-（2，4-二氯苯基）-2-（lH-l，2，4-三氮唑基-1-甲基）-1，3-二氧環(huán)戊-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-△2 –l，2，4-三氮唑-5-酮。再通過對(duì)其進(jìn)行X-射線粉末衍射和DSC的測(cè)定，確定其晶型與對(duì)照品一致，進(jìn)一步為伊曲康唑的合成和質(zhì)量控制提供了重要的參考依據(jù)。

3 討論

3.1 伊曲康唑化合物中H15是受鄰位H16、H18影響，氫譜峰應(yīng)裂分為三重峰，但δ 4.318處為一組包含1個(gè)質(zhì)子的多重峰，與δ 3.479，δ 3.793和δ 3.890處質(zhì)子相關(guān)，且與δ 74.60處的叔碳相關(guān)，推斷可能原因是由于C15為手性碳，影響H15的裂分，關(guān)于伊曲康唑化合物手性碳的研究還需進(jìn)一步深入。

3.2 通過對(duì)比紅外，DSC曲線和X-射線粉末衍射，伊曲康唑原料藥的晶型與對(duì)照品一致。與Shankar等[9]對(duì)伊曲康唑原料藥的晶型的研究相比，其DSC曲線、IR和X-射線粉末衍射結(jié)果一致，表明該伊曲康唑Y1012026樣品晶型與對(duì)照品及文獻(xiàn)資料一致。

3.3 試驗(yàn)證實(shí)該方法準(zhǔn)確可行，可作為伊曲康唑的特性鑒定方法，為以后伊曲康唑的生產(chǎn)過程控制提供理論依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 陳江飛，苗彩云，朱素燕.抗真菌藥伊曲康唑的臨床藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2009，25（2）：153-156.

[2] OGAWA T， MATSUMOTO K， TSUJIMOTO K， et al. Chronic invasive sinus and intracerebral aspergillosis controlled by combination therapy with micafungin and a daily dose of 400 mg itraconazole oral solution[J]. J Infect Chemother， 2015， 21（2）： 134-137.

[3] GILANI K， DAMAN Z， MOAZENI E， et al. Preparation and characterization of various solid dispersion formulations of itraconazole to enhance the drug dissolution profile[J]. Drug Deliv Sci Tech， 2014， 24（6）： 659-664.

[4] INKMANN E， HOLZGRABE U. 1H and 13C nuclear magnetic resonance studies of the sites of protonation in itraconazole and fluconazole[J]. J Pharm Biomed Anal， 1999， 20（1-2）： 297-307.

[5] Shevchenko A， Miroshnyk I， Pietil? L O， et al. Diversity in Itraconazole Cocrystals with Aliphatic Dicarboxylic Acids of Varying Chain Length[J]. Crystal Growth & Design， 2013， 13（11）：4877-4884.

[6] KANDA N， KANO R， ISHIKAWA T， et al. The antimycotic drugs itraconazole and terbinafine hydrochloride induce the production of human β-defensin-3 in human keratinocytes[J]. Immunobiology， 2011， 216（4）： 497-504.

[7] 朱淮武.有機(jī)分子結(jié)構(gòu)波譜解析[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：91.

[8] 陳合兵.核磁共振技術(shù)在藥物定量分析和混合物結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用[D].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2010.

[9] SWAMINATHAN S， SANGWAI M， WAWDHANE S， et al. Soluble itraconazole in tablet form using disordered drug delivery approach： critical scale-up considerations and bio-equivalence studies[J]. AAPS PharmSciTech， 2013， 14（1）： 360-374.