杜鍇

實時熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA的價值分析與研究

杜鍇

目的探討選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒DNA實施檢測的臨床價值。方法250例乙型肝炎患者作為此次實驗對象,臨床選擇血清學標志物的方法實施疾病檢測后最終有效確診。對所有乙型肝炎患者臨床均選擇實時熒光定量PCR法實施疾病檢測,對最終檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果乙型肝炎患者分別選擇熒光PCR法以及血清學標志物方法實施疾病檢測,最終獲得的檢測結(jié)果基本表現(xiàn)一致。臨床選擇實時熒光定量PCR法完成疾病檢測后,最終獲得的病毒DNA數(shù)據(jù)更為準確。實時熒光定量PCR法對大三陽臨床最終檢測陽性率達到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。對于大三陽患者以及小三陽患者的血清PCR檢測結(jié)果進行觀察發(fā)現(xiàn),均表現(xiàn)出較高的拷貝數(shù)。結(jié)論乙型肝炎患者臨床選擇實時熒光定量PCR法實施疾病檢測,針對乙肝病毒以及相關(guān)數(shù)據(jù)完成檢測后可以獲得準確結(jié)果,從而證明對乙型肝炎患者在實施疾病檢測的過程中,選擇實時熒光定量PCR法以及乙肝病毒DNA方法均可以獲得較為理想的效果,臨床均可以廣泛普及應(yīng)用。

實時熒光定量PCR法；乙肝病毒；臨床價值

乙型肝為被歸屬為感染性疾病的一種,主要因為患者出現(xiàn)了乙肝病毒感染的情況后,對患者的肝臟出現(xiàn)炎性病變的情況,最終表現(xiàn)出的一種綜合性疾病。此種疾病傳播較為廣泛,對患者會造成極為嚴重的危害,較易表現(xiàn)出持續(xù)性帶病毒狀態(tài)的情況,最終出現(xiàn)慢性感染的現(xiàn)象［1］。少數(shù)患者會表現(xiàn)出原發(fā)性肝細胞癌以及出現(xiàn)肝硬化的情況。以往臨床在對乙型肝炎病毒攜帶者進行疾病檢測的過程中,主要選擇血清學標志法實施疾病檢測,其主要通過對患者的血液實施檢測,最終有效完成檢測［2］。但是在實施血清學檢測的過程中,如果操作方式出現(xiàn)了失誤,最終較易導致工作人員出現(xiàn)感染的情況。為確保乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA可以獲得準確檢測結(jié)果,本次研究主要將本院收治的乙型肝炎患者作為主要對象,臨床分別選擇實時熒光定量PCR法以及血清學標志物方法展開乙肝病毒DNA檢測,具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年3月～2016年5月收治的乙型肝炎患者250例作為此次實驗對象；患者年齡16～53歲,平均年齡(36.39±5.71)歲。

1.2 方法 所有乙型肝炎患者臨床分別實施實時熒光定量PCR法檢測以及血清學標志法針對乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)實施檢測。之后針對兩種方法的檢測結(jié)果進行對比。主要選擇廣州達安PCR熒光分析儀對所有乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)展開實時熒光定量PCR檢測。臨床需要做好一次性真空采血管的準備工作,清晨抽取患者5 ml靜脈血,對血清實施離心分離,于-20℃的環(huán)境中進行凍存?zhèn)溆?；之后對所有乙型肝炎患者實施集中檢測。臨床主要選擇分辨熒光免疫分析技術(shù)完成乙肝標志物檢測；臨床選擇實時熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA(HBV-DNA)檢測［3］。

1.3 療效判斷標準［4］顯效：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學標志法檢驗結(jié)果進行對比,檢測結(jié)果較為一致,并且選擇實時熒光定量PCR法完成檢測后,能夠獲得更為準確的乙肝病毒檢測數(shù)據(jù),大三陽者［乙型肝炎表面抗原(HbsAg)(+)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)(+)及乙型肝炎核心抗體(HbcAb)(+)］以及小三陽者［HbsAg(+)、HbcAb(+)及乙型肝炎肝炎E抗體(HbeAb)(+)］表現(xiàn)出更高的拷貝數(shù)；效果不明顯：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學標志法檢驗結(jié)果進行對比,表現(xiàn)出少許的差別,并且實時熒光定量PCR法完成檢測后,在最終獲得的準確度以及其他方面無突出表現(xiàn)。無效：臨床選擇實時熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學標志法檢驗結(jié)果進行對比,表現(xiàn)出的差別較大,并且選擇實時熒光定量PCR法完成檢測后的數(shù)據(jù)更為準確。

2 結(jié)果

選擇熒光PCR方法對乙型肝炎患者的病毒DNA數(shù)據(jù)實施檢測,同選擇普通方法血清學標志法實施檢測的乙型肝炎病毒DNA數(shù)據(jù)結(jié)果進行比較,較為一致,但是選擇實時熒光定量PCR法獲得的檢測結(jié)果準確性更高。對大三陽臨床最終檢測陽性率達到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。從而證明在實施乙肝病毒DNA檢測的過程中,實時熒光定量PCR法的應(yīng)用可以獲得更為顯著的效果。

3 討論

乙型肝炎屬于消化內(nèi)科較為普遍的一種疾病。其主要于患者的肝臟位置出現(xiàn),此種疾病的出現(xiàn)對人們會造成嚴重的影響。作為一種嚴重的傳染病,在眾多傳播途徑中血液傳播屬于較為常見的一種,對此需要禁止同患者的血液進行接觸；此外還能夠通過母嬰傳播,所有乙型肝炎患者禁止生育,避免新生兒為乙肝病毒攜帶者。此外皮膚黏膜破損傳播以及性傳播均會導致乙型肝炎患者出現(xiàn)乙肝傳染的情況。依據(jù)疾病病程的長短,主要將乙肝疾病分為急性乙型肝炎疾病以及慢性乙型肝炎疾病。于字面意思進行解釋發(fā)現(xiàn),同慢性乙型肝炎進行比較,急性乙型肝炎對患者造成的影響更為嚴重,甚至會對患者的生命安全產(chǎn)生較為嚴重的影響。依據(jù)患者疾病的嚴重程度,主要分為乙肝攜帶者、活動性乙型肝炎患者、重型肝炎患者以及肝炎肝硬化患者［5-9］。

當前在對血清HBV-DNA實施檢測的過程中,選擇實時熒光定量PCR法實施檢測可以獲得顯著效果,表現(xiàn)出較優(yōu)的檢測重復性,其針對抗病毒藥物療效在實施觀察過程中的相關(guān)問題可以加以有效解決。此種方法臨床應(yīng)用檢測原理為：對于PCR反應(yīng)體系,除了包括普通PCR需要的引物、還包括熒光染料以及熒光基團,對于此類熒光物質(zhì)存在特定波長,可以有效作為臨床檢測過程中的熒光探針［10-15］。對于儀器能夠有效自動檢出,通過將熒光信號進行積累,針對PCR進程可以做到實時監(jiān)測。在PCR循環(huán)過程中對測量的信號可以作為實驗熒光閾值的坐標。選擇實時熒光定量PCR檢測的方法,即使患者表現(xiàn)出微量HBV-DNA的情況,則也可以獲得準確的檢測結(jié)果［16］。

綜上所述,對于乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA選擇實時熒光定量PCR的方法實施檢測,同選擇血清學標志法檢測結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn),可以獲得更為顯著的測定結(jié)果,并且獲得的綜合內(nèi)容更為全面,進而為乙型肝炎疾病患者臨床治療方案的研究提供可靠依據(jù),從而證明對乙型肝炎患者臨床選擇實時熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA檢測,最終可以為檢測結(jié)果的準確性做出有效保證。

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Analysis and research of value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA

DU Kai.Department of Nuclear Medicine,Henan Nanyang City First People’s Hospital,Nanyang 473000,China

ObjectiveTo investigate clinical value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA.MethodsThere were 250 patients with hepatitis B as study subjects.All patients received real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection,and their final detection outcomes were analyzed.ResultsThe hepatitis B patients received real-time fluorescence quantification PCR method and serologic markers for disease detection,with basically the same outcomes.Clinical implement of real-time fluorescence quantification PCR method showed more accurate data on virus DNA.Realtime fluorescence quantification PCR method had final positive detection rate of big three positive as 96% and 69% of small three positive,while its final positive detection rate was 2.21% of HbsAg(-),hepatitis B surface antibody(HbsAb)(-),HbeAb(-) and hepatitis B e antigen(HbeAg)(-).Serum PCR detection in patients with big three positive and small three positive all showed high copy number.ConclusionClinical selection of real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection in hepatitis B patients can provide accurate outcome after complete detection of hepatitis B virus and related data.Therefore,implement of real-time fluorescence quantification PCR method and hepatitis B virus DNA for disease detection in hepatitis B patients can both show ideal effect,and they are worth widely clinical promotion and application.

Real-time fluorescence quantification PCR method; Hepatitis B virus; Clinical value

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.01.022

2016-12-06］

473000 河南省南陽市第一人民醫(yī)院核醫(yī)學科