郭巧技，謝耀軒，羅 婧，蘇 暢，王淑紅，王鐵杰

(深圳市藥品檢驗(yàn)研究院，深圳嶺南藥材資源開發(fā)與應(yīng)用工程實(shí)驗(yàn)室，深圳 518057)

藥品質(zhì)量與檢驗(yàn)

不同采收階段益母草的質(zhì)量評(píng)價(jià)

郭巧技，謝耀軒，羅 婧，蘇 暢，王淑紅，王鐵杰

(深圳市藥品檢驗(yàn)研究院，深圳嶺南藥材資源開發(fā)與應(yīng)用工程實(shí)驗(yàn)室，深圳 518057)

目的：通過對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收階段的益母草進(jìn)行測(cè)定，評(píng)價(jià)市場(chǎng)上益母草的質(zhì)量情況。方法：通過外觀性狀判斷益母草的采收階段，采用薄層色譜法對(duì)益母草中黃酮類成分進(jìn)行鑒別；采用HPLC法對(duì)益母草進(jìn)行特征圖譜鑒別；采用HPLC法測(cè)定鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿的含量。結(jié)果：益母草中總黃酮類成分、鹽酸水蘇堿及鹽酸益母草堿隨著采收時(shí)間的不同而呈現(xiàn)明顯差異。結(jié)論：營養(yǎng)期的益母草質(zhì)量最好，其次是童子期，花期及果期質(zhì)量最差。

益母草，鹽酸水蘇堿，鹽酸益母草堿，采收期，質(zhì)量評(píng)價(jià)

益母草為唇形科植物益母草LeonurusjaponicusHoutt的新鮮或干燥地上部分。鮮品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季莖葉茂盛、花未開或初開時(shí)采割，曬干。益母草具活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒之功效，用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)閉經(jīng)、惡露不盡、水腫尿少、瘡瘍腫毒[1]。益母草的主要化學(xué)成分為生物堿類、二萜類、甾醇、黃酮類、有機(jī)酸、多種微量元素及脂肪等[2]?！吨袊幍洹?015年版益母草標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)生物堿類的成分進(jìn)行了鑒別和含量測(cè)定，為全面、有效控制質(zhì)量，在原生物堿鑒別的基礎(chǔ)上，增加了以益母草對(duì)照藥材為對(duì)照，對(duì)其黃酮類成分進(jìn)行薄層色譜鑒別。為評(píng)價(jià)益母草的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)，也為醫(yī)院合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-20AD高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器；梅特勒-托利多XS205電子天平。

1.2 試藥 鹽酸水蘇堿對(duì)照品(批號(hào)110754-200421)、鹽酸益母草堿對(duì)照品(批號(hào)110704-200420)、益母草對(duì)照藥材(批號(hào)110703-200424)均由中國藥品生物制品檢定所提供；硅膠G預(yù)制板為MACHERKEY-NAGEL生產(chǎn)；分別通過廠家提供、藥店及藥材市場(chǎng)購買等渠道共收集22批益母草。水為超純水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 外觀性狀檢驗(yàn)結(jié)果 分別從9個(gè)省通過廠家提供、藥店及藥材市場(chǎng)購買等渠道共收集了22批益母草藥材。《中國藥典》2015年版一部“益母草”項(xiàng)下規(guī)定：益母草應(yīng)在莖葉茂盛、花未開或初開時(shí)采割，符合采收期的有9批，其余13批為果初期或果熟期，未在規(guī)定的采收期進(jìn)行采收。見圖1和圖2。

圖1 藥材收集地統(tǒng)計(jì)

圖2 藥材采收期統(tǒng)計(jì)

2.2 黃酮類成分的薄層色譜鑒別

2.2.1 供試品溶液制備 取益母草粉末約1 g，加水50 ml，煮沸，保持微沸1 h，離心10 min(3 000 r/min)，取上清液通過聚酰胺柱(80～100目，3 g，濕法裝柱)，用水50 ml洗脫，棄去洗脫液，再以20%乙醇溶液30 ml洗脫，棄去洗脫液，最后以70%乙醇溶液50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，取上清液，作為供試品溶液[3]。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液制備 取益母草對(duì)照藥材1 g，加水50 ml，煮沸，保持微沸1 h，離心10 min(3 000 r/min)，取上清液，同法制備對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 測(cè)定 吸取供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各4 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(7∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，2%三氯化鋁乙醇溶液，105 ℃加熱8～10 min，置紫外光燈(365 nm)下觀察。見圖3。

1～5.供試品溶液 6.益母草對(duì)照藥材溶液 7～12.供試品溶液

2.3 鹽酸水蘇堿含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80∶20)為流動(dòng)相，流速：1.0 ml/min；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器[1,4]。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取益母草粉末(過三號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液5和10 μl，供試品溶液10～20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。見圖4和表1。

2.4 鹽酸益母草堿含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液(24∶76)為流動(dòng)相，流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長277 nm[1,5]。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸益母草堿對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 ml含30 μg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液作為供試品溶液。

2.4.4 測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。見表1和圖5。

1. 鹽酸水蘇堿

序號(hào)來源采收期總黃酮類鑒別斑點(diǎn)強(qiáng)弱鹽酸水蘇堿含量(%)鹽酸益母草堿含量(%)1吉林童子期強(qiáng)0．850．3422河南童子期強(qiáng)0．610．0803湖北童子期強(qiáng)0．530．0774廣西營養(yǎng)期弱0．510．9835安徽營養(yǎng)期強(qiáng)0．340．3656山東營養(yǎng)期強(qiáng)0．520．6137山東營養(yǎng)期強(qiáng)0．510．5218安徽營養(yǎng)期強(qiáng)0．500．3119湖北花初期弱0．100．14510北京果初期弱0．060．20311四川果初期弱0．170．02612四川果初期弱0．160．09413安徽果熟期弱0．160．01314安徽果熟期弱0．130．14515山東果熟期弱0．040．09016山東果熟期弱0．130．03417河南果熟期弱0．130．01318四川果熟期弱0．020．01419四川果熟期弱0．020．00720四川果熟期弱0．070．01021廣東果熟期弱0．040．04722廣東果熟期弱0．220．029

1. 鹽酸益母草堿

圖5 對(duì)照品(A)供試品(B)HPLC色譜圖

3 討論

《中國藥典》2015年版一部“益母草”藥材項(xiàng)下收載了鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿的含量測(cè)定方法，并給出了含量限度，即含鹽酸益母草堿不得少于0.050%，含鹽酸水蘇堿不得少于0.50%。22批益母草藥材按照上述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了含量測(cè)定，其中13批的鹽酸益母草堿含量合格，合格率為59.1%；7批的鹽酸水蘇堿含量合格，合格率為31.8%；7批的鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿兩項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)合格，合格率為31.8%；按規(guī)定采收期進(jìn)行采收的9批益母草中鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿合格率分別為100%及77.8%。

從總黃酮類成分測(cè)定結(jié)果可見，22批益母草藥材均檢出總黃酮類成分，其中童子期及營養(yǎng)期的益母草

檢出的斑點(diǎn)均較強(qiáng)，說明測(cè)定成分的含量較高。

益母草營養(yǎng)器官葉片中含的鹽酸水蘇堿最高，其次是花，莖作為輸導(dǎo)組織，其內(nèi)所含的有效成分最少。童子期及營養(yǎng)期的益母草有大量的葉，果熟期的益母草以莖為主，因此建議以《中國藥典》2015年版一部規(guī)定的采收期采收的益母草進(jìn)行投料。本次研究還收集到了8批益母草偽品，經(jīng)外觀性狀鑒別為7批夏至草，1批未知偽品。使用上述方法對(duì)該8批樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿含量測(cè)定結(jié)果：7批夏至草的鹽酸益母草堿及鹽酸水蘇堿均不合格；未知偽品鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿均很高，但暫未確定其來源。②總黃酮類成分測(cè)定結(jié)果：7批夏至草顯示的斑點(diǎn)均很弱，部分斑點(diǎn)缺失；未知偽品的總黃酮成分薄層色譜無斑點(diǎn)。由此可見：黃酮類成分的薄層色譜鑒別使用益母草對(duì)照藥材作為對(duì)照，可有效鑒別益母草及其偽品。部分成藥的益母草鑒別也可參考該方法，以保證其投料的真實(shí)性。

1 中國藥典[S]．一部.2015：290-291

2 樓之芩，秦波．常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究(北方協(xié)作組)[M]．福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1994：527-573

3 余丹妮，徐德生，馮怡，等．柱層析-分光光度法測(cè)定益母草中總黃酮含量[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007， 18(5)：46-48

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5 張曉萍，丁永輝，楊錫，等．前列泰丸的質(zhì)量分析研究[J]．中成藥，2012，34(2)：367-371

2016-02-16

深圳市醫(yī)院中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)提升技術(shù)研發(fā)項(xiàng)目(No.JSGG20130918143735546)

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