石 云，金 華

(1.天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司紅橋分公司，天津 300090； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

婦痛寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

石 云1，金 華2*

(1.天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司紅橋分公司，天津 300090； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

目的：建立婦痛寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對方中赤芍、丹參、肉桂進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對丹酚酸B進(jìn)行含量測定。色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18(100 mm×4.6 mm，3.5 μm)，流動相為甲醇-甲酸-水-乙腈(28∶1∶61∶10)，流速為1.0 ml/min；柱溫為25 ℃。 結(jié)果：薄層色譜中的特征斑點明顯，重現(xiàn)性好，無干擾；丹酚酸B在0.258 4～155.04 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為99.43%， RSD為1.25%。 結(jié)論：本法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速，可用于婦痛寧顆粒的質(zhì)量控制。

婦痛寧顆粒，丹酚酸B，高效液相色譜法，薄層色譜法

婦痛寧顆粒由丹參、肉桂、赤芍、皂角刺、川楝子、三棱等中藥精制而成，具有活血化瘀、溫經(jīng)止痛之效，臨床用于子宮內(nèi)膜異位癥、痛經(jīng)、子宮肌瘤、附件炎等癥，療效突出。方中丹參為君藥，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰之功[1]。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用薄層色譜法對方中赤芍、丹參、肉桂進(jìn)行了鑒別，采用高壓液相色譜法對丹酚酸B進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 JYO2G型凝膠成像儀(北爾君意東方電泳設(shè)備有限公司)；硅膠G薄層板；硅膠GF254薄層板(均青島海洋化工廠出品)；Agilent Technologies 1260 Infinity 高效液相色譜儀；XP205型十萬分之一天平(METTLER TOLEDO公司)；JD400-3型萬分之一天平(沈陽龍騰電子有限公司)。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(批號110736-201337，中國食品藥品檢定研究院)；丹酚酸B對照品(批號120923-201113，中國食品藥品檢定研究院)；桂皮醛對照品(批號121363-201102，中國食品藥品檢定研究院)；婦痛寧顆粒(批號1411014、1402004、1309011，某醫(yī)院制劑室)；乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、乙醚、無水乙醇、正己烷、冰醋酸、香草醛硫酸、鹽酸均為分析純；甲醇、甲酸、乙腈均為色譜純(天津康科德科技有限公司)。超純水自制。

2 薄層色譜鑒別方法與結(jié)果

2.1 赤芍鑒別 取本品20 g，加乙醇70 ml，超聲10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成1 ml含2 mg的溶液，作為對照品溶液。根據(jù)處方比例，稱取除赤芍外的其余藥材，按顆粒劑的制備工藝制成陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制成無赤芍的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各4 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖1。

1.陰性對照 2.芍藥苷對照品 3～5.供試品

2.2 丹參鑒別 取本品20 g，加乙醇50 ml，超聲處理50 min，離心，取上清液作為供試品溶液。另取丹酚酸B對照品溶液。根據(jù)處方比例，稱取除丹參外的其余藥材，按顆粒劑的制備工藝制成陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制成無丹參的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各6 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸-甲醇(1.5∶2∶1∶10.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。結(jié)果見圖2。

1～3.供試品 4.陰性對照 5.丹酚酸對照品

2.3 肉桂鑒別 取本品20 g，加乙醇30 ml，冷浸30 min，時時振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成1 ml含1 μg的對照品溶液。根據(jù)處方比例，稱取除肉桂外的其余藥材，按顆粒劑的制備工藝制成陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制成無肉桂的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗，吸取供試品溶液10 μl，對照品溶液4 μl分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙醚-冰醋酸(5∶5∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖3。

1.陰性對照 2.桂皮醛對照品 3～5.供試品

3 丹酚酸B含量測定

3.1 色譜條件 C18(100 mm×4.6 mm，3.5 μm)色譜柱；流速1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。流動相：甲醇-甲酸-水-乙腈(28∶1∶61∶10)；檢測波長：286 nm。

3.2 溶液制備

3.2.1 對照品溶液制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，用75%甲醇溶解，制成濃度為0.129 2 mg/ml的丹酚酸B對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液制備 取婦痛寧顆粒(批號1411014)約2 g，經(jīng)精密稱定后置于50 ml量瓶中，加入75%甲醇適量，超聲30 min，取出放冷，加75%甲醇定容至刻度，搖勻，以微孔濾膜過濾，得供試品溶液。

3.2.3 陰性對照溶液制備 按處方配比例與制備供試品相同方法制得陰性對照品(缺丹參)。再按供試品溶液制備方法，制得陰性對照溶液。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗 精取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖4。陰性對照在丹酚酸B對照品對應(yīng)處無干擾。理論塔板數(shù)按丹參酚酸B計算為8 201，符合規(guī)定。丹酚酸B的分離度為R1=3.71，R2=2.47，均大于1.5。所以選擇性良好。

3.4 線性關(guān)系考查 將對照品溶液分別稀釋成濃度為0.025 84、0.051 68、0.077 52、0.103 36、0.129 2和0.155 04 mg/ml,分別進(jìn)樣10 μl，得峰面積。以濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=969.56X+7.163 7(r=0.999 9)，結(jié)果表明進(jìn)樣量在25.84～155.04 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，結(jié)果RSD為0.7%，說明儀器精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗 稱取同一批樣品(批號1411014)制備5份供試品溶液，進(jìn)樣，測定峰面積，RSD為0.9%，表明重復(fù)性良好。

1.丹酚酸B

3.7 穩(wěn)定性試驗 精取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、20和24 h進(jìn)樣，測定峰面積，RSD為0.47%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 加樣回收試驗 精密稱取已知丹酚酸B含量的婦痛寧顆粒(批號1411014，含丹酚酸B 0.33%)6份，放置50 ml量瓶中，分別加入已知濃度的對照品2.5 ml，加入75%甲醇，超聲30 min。進(jìn)樣，測定峰面積，計算加樣回收率、RSD。結(jié)果平均回收率為99.43%,RSD為1.25%，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果表

3.9 樣品含量測定 精密稱取樣品，按上述條件制成供試品溶液，測定峰面積，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果表(n=3)

4 討論

4.1 定性鑒別 丹參、赤芍、肉桂為本方中主藥，故對此3種藥進(jìn)行定性鑒別，在鑒別方法制定時，從供試品溶液制備、展開劑組成及比例的選擇、點樣量、控制拖尾等方面，參考了《中國藥典》方法及相關(guān)文獻(xiàn)報道[2-6]，進(jìn)行了摸索優(yōu)化，確定了最佳條件，方法簡單、可靠。但薄層色譜圖也顯示實驗還需更精進(jìn)，赤芍圖供試品點樣量稍大，丹參圖的陰性對照品點樣量偏少，肉桂圖有拖尾；供試品的批次還可增加。方中其他藥的薄層鑒別尚需完善。

4.2 含量測定條件的確定

4.2.1 處理方法的選擇 本試驗在處理方法選擇時，對加熱回流和超聲處理兩種方法進(jìn)行比較，由于丹參酸類成分對熱不穩(wěn)定，高溫會破壞其有效成分[7]，結(jié)果顯示超聲法的提取效果要優(yōu)于加熱回流法。試驗中還對超聲溶劑甲醇的用量(25、50 ml)以及超聲時間(10、20、30 min)及甲醇濃度(100%、75%)的提取效果進(jìn)行考查：75%甲醇50 ml，超聲提取30 min，效果最好。

4.2.2 流動相的選擇 丹酚酸B檢測方法參照《中國藥典》，流動相為甲醇-甲酸-水-乙腈(30∶1∶59∶10)。在此基礎(chǔ)上，按高效液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[8]調(diào)整比例進(jìn)樣，根據(jù)峰形、分離度、保留時間及理論塔板數(shù)參數(shù)，最終定為甲醇-甲酸-水-乙腈(28∶1∶61∶10)。

1 中國藥典[S].一部.2015:77

2 許勇,諸艷蓉,王柯,等.復(fù)方丹參膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2012,43(12)：1020-1023

3 王志萍,韋慧鮮,申文慧,等.腦血栓片中芍藥苷的定性定量測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(5):1161-1162

4 劉元昆,張立賢,劉英.芪參清幽膠囊的薄層鑒別研究[J]. 中國執(zhí)業(yè)藥師,2014,11(11):23-25

5 武曉林,李敏,劉哲.牡丹皮和白芍的生藥學(xué)鑒別[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(31):10914-10915

6 汪祺,孫磊,鄭笑為,等.冠脈寧片(膠囊)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中丹參薄層鑒別比較研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2014,25(11):2667-2669

7 周長新,羅厚蔚,丹羽正武.丹參水溶性化學(xué)成分的研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,1999,30(6):411-416

8 中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010:81-86

Establishment of quality standard for futongning granules

Shi Yun1,Jin Hua2

(1.Tianjin Zhong Xin Pharmaceutical Group Corporation Limited Hongqiao branch,Tianjin 300090;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193)

Objective：To establish a quality standard for futongning granules.Methods：Paeonia lactiflora，Salvia miltiorrhiza，Cinnamomum cassia were identificated by TLC and salvianolic acid B was determinated by HPLC.Parameters: Agilent Eclipse Plus - C18(4.6 mm× 100 mm,3.5 μm) was used stationary phase at a temperature of 25 ℃ and methanol-formic acid-water-acetonitrile (28∶1∶61∶10) as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min; detection wavelength was set at 286 nm. Results：The components were completely identified and no interference spot was found on the plate by TLC. The concentration of salvianolic acid B showed a good linearity with peak areas over 25.84～155.04 μg/ml, The average recovery was 99.43% with RSD of 1.25%. Conclusion：The TLC and HPLC methods established here are simple,reliable and stable, being suitable for the quality control of futongning granules.

futongning granules，salvianolic acid B，HPLC，TLC

2016-06-27

*通訊作者：金華，E-mail：zyxyjin@163.com。

R917

A

1006-5687(2016)04-0007-03