孫光野，趙 陽，鄒 穎，張洪友

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

豬白肌病的診斷與防治

孫光野，趙 陽，鄒 穎，張洪友

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

2016年9月13日，黑龍江寶泉嶺管局某豬場送檢2頭60日齡病死豬。首先通過流行病學(xué)調(diào)查得知，該豬場規(guī)模214頭，發(fā)病豬46頭，死亡8頭，發(fā)病率達(dá)到21.50%，死亡率達(dá)到3.7%。發(fā)病的豬精神沉郁，呼吸困難，跛行，厭食，喜臥不動(dòng)，排黃色稀便。病理剖檢可見淋巴結(jié)水腫、出血，肺水腫，肌肉顏色淡，肉中還有白色斑點(diǎn)，肌肉組織干燥、混濁，切面粗糙不平，夾有點(diǎn)狀或條狀出血。初步懷疑是豬水腫和豬白肌病，還需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷確診。通過提取小腸，十二指腸分離純化后的細(xì)菌DNA經(jīng)PCR檢測未見致豬水腫病陽性條帶，肺臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種未見病原菌。對豬的血液進(jìn)行了硒含量的測定，發(fā)現(xiàn)每毫升血液當(dāng)中硒的含量0.018 mg，楊玉蘭［1］認(rèn)為，血硒含量低于0.03 mg/kg體重仔豬屬于缺硒。然后選擇有代表性的病變部位若干個(gè)組織塊做病理切片對其進(jìn)行組織學(xué)觀察，肌肉可見明顯的病變，最終確診為豬白肌病。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:寶泉嶺管局某豬場送檢黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院的2頭60日齡的病豬。

1.2 試劑及儀器 Marker，購自寶生物工程(大連)有限公司;細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒，購自廣州東盛生物科技有限公司;石蠟、甲醛、飽和碳酸鋰、伊紅、蘇木素、松節(jié)油、中性樹膠由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院基礎(chǔ)教研室保存;麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，購自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司;鮮血瓊脂培養(yǎng)基由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備;PCR儀，購自寶生物工程(大連)有限公司;光學(xué)顯微鏡，購自上海點(diǎn)應(yīng)光學(xué)儀器有限公司;切片機(jī)，購自沈陽譽(yù)得電子儀器有限公司;烤片機(jī)，購自上海艾測電子科技有限公司;恒溫箱，購自上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 豬場調(diào)查 首先采用流行病學(xué)的方法對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行了調(diào)查。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷 無菌采取小腸、十二指腸黏膜液接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基中。取仔豬的肺臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種，37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，然后按照細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采血置于含肝素鈉的離心管，3 000 r/min離心15 min，收集血漿，把待測的血漿樣品送到黑龍江省大慶市東風(fēng)醫(yī)院去檢測血漿當(dāng)中硒的含量，其余的－20℃保存待測。

1.3.3 切片、染色、鏡檢 選擇有代表性的病變部位若干個(gè)組織塊，混合固定液固定，常規(guī)石蠟切片，H．E．染色光學(xué)顯微鏡檢查。

1.3.4 病理組織切片的制作 (1)固定:病變組織塊置于混合固定液溶液中12 h過夜;(2)水洗:取修好的組織塊用流水沖洗0.5 h;(3)脫水:70%乙醇1 h→75%乙醇1 h→80%乙醇1 h→85%乙醇1 h→90%乙醇1 h→95%乙醇1 h→無水乙醇(Ⅰ)45 min→無水乙醇(Ⅱ)40 min;(4)脫酒精:混合液(無水乙醇∶松節(jié)油=1∶1)30 min;(5)透明松節(jié)油(1)30 min、松節(jié)油(II)30 min;(6)浸蠟:52℃ ～54℃ 60 min ，54℃ ～56℃ 60 min，56℃ ～58℃ 30 min;(7)包埋;(8)切塊:修塊，粘塊;(9)切片:烤片。

1.3.5 H.E.染色 (1)脫蠟至水:松節(jié)油(Ⅰ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅱ)1～2 min→無水乙醇1～2 min→90%乙醇1～2 min→80%乙醇1～2 min→70%乙醇1～2 min;(2)染色:Harris蘇木素染液15 min→自來水沖洗10 min→1%鹽酸乙醇分化30 s→自來水洗數(shù)秒→飽和碳酸鋰30 s→蒸餾水水洗數(shù)秒→伊紅15 min;(3)脫水、透明和封固:75%乙醇1～2 min→80%乙醇1～2 min→90%乙醇1～2 min→無水乙醇(Ⅰ)1～2 min→無水乙醇(Ⅱ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅰ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅱ)1～2 min→中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 豬場調(diào)查 對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行了調(diào)查，飼養(yǎng)管理無不當(dāng)之處，環(huán)境衛(wèi)生合格，了解到近半個(gè)月內(nèi)換用了一批飼料。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷 仔豬的心臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種，37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，未見病原菌。提取十二指腸，小腸分離純化后的細(xì)菌DNA經(jīng)PCR檢測未見致豬水腫病的陽性條帶。對豬的血液進(jìn)行了硒含量的測定，每毫升血液當(dāng)中硒的含量0.018 mg。

2.3 病理變化

2.3.1 剖檢病理變化 肌肉顏色淡，肉中還有白色斑點(diǎn)，肌肉組織干燥、混濁，切面粗糙、不平，夾有點(diǎn)狀或條狀出血(見封三彩版圖1、2)。

2.3.2 鏡檢病理變化 肌肉結(jié)構(gòu)紊亂(見封三彩版圖3);肌纖維間脂肪組織增多，脂肪浸潤(見封三彩版圖4);肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞內(nèi)有空泡，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(見封三彩版圖5);血管內(nèi)有炎性細(xì)胞(見封三彩版圖6);肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂(見封三彩版圖7、圖8)。

本病例肌肉的病理學(xué)特點(diǎn)是肌肉結(jié)構(gòu)紊亂，有變性、壞死，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤。結(jié)合豬場調(diào)查分析和沒有病原菌的情況和血液當(dāng)中硒的含量，本病例診斷為白肌病。

3 討論

通過對寶泉嶺管局某豬場送檢2頭60日齡的病豬進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、臨床檢查和病理剖檢，初步懷疑是豬白肌病和豬水腫。但病理剖檢情況復(fù)雜，無法確診。然后通過實(shí)驗(yàn)室診斷確診為豬白肌病。白肌病發(fā)病日齡多發(fā)1～4月齡仔豬多發(fā)，最早可發(fā)生于胚胎時(shí)期，造成母豬早產(chǎn)，死產(chǎn)及流產(chǎn)。在胎兒發(fā)育過程中，尤其后期胎兒發(fā)育迅速，由于營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，導(dǎo)致營養(yǎng)失調(diào)而發(fā)生本病。

豬白肌病是嚴(yán)重缺硒和維生素E引起的營養(yǎng)代謝性疾病［2］，這是由于當(dāng)機(jī)體缺乏硒和維生素E，硒能催化過氧化物的損害，維生素E可抑制過氧化脂質(zhì)的生成。當(dāng)兩者中任一個(gè)減少，使細(xì)胞受過氧化物的損害，破壞了細(xì)胞的完整性［3］，引發(fā)白肌病。豬水腫病是由產(chǎn)志賀毒素引起的一種腸毒血癥［4］，以腦部、腸系膜及胃壁漿液性水腫為主要特征。本病呈世界性分布，又名腸毒血癥，是一種烈性傳染病，病死率高，多發(fā)于斷奶仔豬。二者在臨床上很相似，主要在斷奶后體格強(qiáng)碩，且仔豬處于生長快速的發(fā)育階段;病豬具有正常體溫，但是眼瞼發(fā)生水腫，且四肢出現(xiàn)癱瘓現(xiàn)象或跋行現(xiàn)象。區(qū)別是豬水腫病主要在4～10周齡的斷奶仔豬容易發(fā)生，四肢麻痹，呈游泳劃動(dòng)癥狀，同時(shí)出現(xiàn)空嚼現(xiàn)象和白色泡沫從口中流出現(xiàn)象，初期排尿減少，便秘。個(gè)別會(huì)發(fā)生腹瀉，而后期往往頭部發(fā)生水腫，但白肌病的患豬則沒有出現(xiàn)上述癥狀。通過剖檢發(fā)現(xiàn)，二者都會(huì)使病豬的胃部及腸系膜發(fā)生水腫，主要是在螺形結(jié)腸系膜、胃的賁門腺區(qū)及盲腸出現(xiàn)明顯的水腫，呈膠胨狀，同時(shí)在空腸和回腸內(nèi)有黑紅色糞便。而白肌病主要在胃的各處發(fā)生水腫，其中最為明顯的是大腸［5］。

我們對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行了調(diào)查，得知該豬場飼養(yǎng)管理不當(dāng)，環(huán)境衛(wèi)生不合格，導(dǎo)致豬患白肌病。本病主要以硒制劑以及維生素E進(jìn)行治療［5］，根據(jù)仔豬體重大小，每天注射1～3 mL亞硒酸鈉、維生素E，每天2次，連用3 d;為防止繼發(fā)感染，可肌肉注射慶大霉素或磺胺類藥物，對心力衰竭的可注射安鈉咖等強(qiáng)心劑;有神經(jīng)癥狀的可注射硫酸鎂等鎮(zhèn)靜藥物。預(yù)防本病，對妊娠后期母豬，應(yīng)補(bǔ)充維生素豐富的飼料。仔豬出生后7 d內(nèi)、斷奶時(shí)、斷奶后1個(gè)月各注射亞硒酸鈉1～2 mL，內(nèi)服維生素E 3～8 mL。

［1］ 楊玉蘭．豬礦物質(zhì)缺乏癥診斷與防治技術(shù)［J］．農(nóng)技服務(wù)，2008，12:84-86．

［2］ 胡喜斌，楊玉平，羅守冬，等．犢牛白肌病的診斷與防治［J］．中國乳業(yè)，2013(2):39-40．

［3］ 李海英．王百川．丁偉言．一起非典型性豬心臟型白肌病的診斷與防治［J］，中國動(dòng)物檢疫，2012，29(5):58-59．

［4］ 胡汐柔．黃芩注射液對豬水腫病的治療作用研究［D］．吉林:吉林大學(xué)，2014．

［5］ 韓良彩．豬白肌病的防治［J］．山西農(nóng)業(yè)，2002(2):44

［6］ 王魁成，馬希波，杜輝．豬白肌病的防治［J］，中國畜禽種業(yè)，2012(2):9．

S858．28

B

0529-6005(2017)06-0070-02

2016-11-10

孫光野(1992-)，男，碩士生，研究方向?yàn)閯?dòng)物營養(yǎng)代謝病，E-mail:940495242@qq．com

張洪友，E-mail:zhy_478@163．com