□ 唐文靖 品升商品檢測(cè)(上海)有限公司

PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用探討

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食品微生物檢測(cè)是一項(xiàng)重要的工作，食品微生物檢測(cè)中經(jīng)常采用PCR技術(shù)，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性很高。PCR技術(shù)具有靈敏度高的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，其可檢測(cè)食品中的微生物成分。本文主要探討PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的實(shí)踐應(yīng)用。

PCR技術(shù)；食品；微生物；檢測(cè)

食品微生物檢測(cè)中的PCR技術(shù)是指聚合酶類反應(yīng)，此類方法能夠提高食品微生物的檢測(cè)效率，鑒別微生物的同 時(shí)準(zhǔn)確篩選食品中的微生物。近幾年，食品安全成為社會(huì)關(guān)注的問題，在食品微生物檢測(cè)中引進(jìn)PCR技術(shù)，更提高微生物的檢測(cè)效率和質(zhì)量。

1 PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)

PCR技術(shù)在食品微生物中的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)：①PCR技術(shù)的操作方法簡(jiǎn)單，不會(huì)影響食品的質(zhì)量，因此，可以提高食品微生物檢測(cè)的操作效率，PCR技術(shù)使用的設(shè)備非常少，即使在較為簡(jiǎn)單的環(huán)境中，也能完成食品微生物的檢測(cè)工作；②食品微生物檢測(cè)中的PCR技術(shù)準(zhǔn)確率高，可以在快速的狀態(tài)下鑒定食品中是否含有微生物，PCR檢測(cè)自動(dòng)化程度高，消除了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的弊端；③PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中具有一定的發(fā)展空間，研究設(shè)計(jì)人員以常規(guī)的PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)出多樣化的檢測(cè)方法，目的是高效、快捷、準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中的微生物，提高PCR技術(shù)的檢測(cè)水平，保障市場(chǎng)中食品的質(zhì)量，規(guī)避潛在的微生物問題。

2 PCR技術(shù)在食品微生物中的應(yīng)用分析

食品微生物檢測(cè)中的PCR技術(shù)主要分為4類，筆者結(jié)合食品微生物檢測(cè)探討PCR技術(shù)的具體應(yīng)用。

2.1 常規(guī)PCR技術(shù)

常規(guī)PCR技術(shù)是最基礎(chǔ)的檢測(cè)技術(shù)，在食品微生物檢測(cè)中利用常規(guī)PCR技術(shù)，把聚合酶適量加入到食品微生物的DNA模板與引物的混合物中，催化的條件下DNA會(huì)出現(xiàn)片段擴(kuò)增的情況，而且片段擴(kuò)增在DNA模板上完成，不同的擴(kuò)增周期DNA的表現(xiàn)不同[1]。常規(guī)PCR技術(shù)的每個(gè)周期中，DNA都會(huì)擴(kuò)增對(duì)應(yīng)的片段，DNA模板可以循環(huán)使用，促使常規(guī)PCR中的聚合酶類反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行并逐漸增加產(chǎn)物量。常規(guī)PCR技術(shù)可以檢測(cè)食品中的多種菌類，檢出效率高達(dá)99%，食品微生物檢測(cè)中積極推行常規(guī)PCR技術(shù)的應(yīng)用，致力于提高食品的安全性，避免出現(xiàn)微生物污染的問題。

2.2 多重PCR技術(shù)

食品微生物檢測(cè)中的多重PCR技術(shù)具有綜合性的特征，以常規(guī)PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，在PCR的反應(yīng)體系中加入多重引物[2]。多重PCR技術(shù)中混合了大量引物，很多引物之間會(huì)出現(xiàn)互補(bǔ)的情況，此時(shí)就要增加反應(yīng)體系中DNA片段的數(shù)量。多重PCR技術(shù)的檢出效率非常高，其在食品微生物檢測(cè)中仍舊沿用了常規(guī)PCR的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，快速得出食品微生物的檢測(cè)效果。多重PCR技術(shù)使用的過程中，一次性可以檢查多重微生物的DNA。多重PCR技術(shù)在食品微生物的檢測(cè)中具有非常高的檢測(cè)效率，實(shí)際也存在著缺陷，也就是多重PCR的敏感度低，應(yīng)該注意多重PCR技術(shù)的敏感度控制，優(yōu)化多重PCR技術(shù)的應(yīng)用，進(jìn)而滿足食品微生物的檢測(cè)需求。

2.3 Rt-PCR技術(shù)

Rt-PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中是指聚合酶鏈反應(yīng)，提取微生物的RNA并作為模板獲取cDNA，再把cDNA作為模板進(jìn)行PCR的擴(kuò)增處理，表達(dá)食品微生物的DNA片段[3]。Rt-PCR技術(shù)的檢出效率非常高，具有靈敏度高的優(yōu)勢(shì)，在食品微生物檢測(cè)期間，此類技術(shù)可以提高好幾個(gè)數(shù)量級(jí)，精準(zhǔn)鑒別食品樣品中的微生物。Rt-PCR技術(shù)很容易區(qū)分微生物特征，有利于提升微生物檢測(cè)的準(zhǔn)確性，避免出現(xiàn)檢測(cè)不到位的情況，而且檢測(cè)效率也很高。

2.4 免疫PCR技術(shù)

免疫PCR技術(shù)把食品微生物的DNA分為當(dāng)作標(biāo)記物，免疫操作的過程中擴(kuò)增PCR[4]。免疫PCR技術(shù)結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)與PCR擴(kuò)增，提升微生物檢測(cè)的靈敏性。食品微生物的免疫PCR技術(shù)檢測(cè)中，可以隨意選擇DNA分析，固定好DNA分子后合成一對(duì)引物，所有檢測(cè)對(duì)象采用一對(duì)引物即可。免疫PCR技術(shù)的連接分子是多用生物素，生物素具有獨(dú)立的特征，兩個(gè)獨(dú)立生物素的結(jié)合點(diǎn)，分別連接DNA分子和親和素，形成了連續(xù)性的復(fù)合物，PCR擴(kuò)增復(fù)合物標(biāo)記出微生物的DNA。

3 PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用案例

PCR技術(shù)可以靈活檢測(cè)食品微生物中的腸出血性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等，本文以沙門氏菌為例分析PCR技術(shù)的應(yīng)用。

食品加工時(shí)存有破壞沙門氏菌的條件，在食品中沙門氏菌的含量非常少，增加了PCR技術(shù)檢測(cè)的準(zhǔn)確度。采用多重PCR技術(shù)檢測(cè)食品中的沙門氏菌微生物時(shí)，多重PCR技術(shù)不僅可以鑒定出食品中的沙門氏菌，還可以檢測(cè)到沙門氏菌是否存在突變問題。用多重PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，采用invA、invB、hns引物擴(kuò)增PCR，判斷食品中的沙門氏菌血清狀態(tài)。

4 結(jié)語

PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中具有很大的優(yōu)勢(shì)，PCR技術(shù)直接關(guān)系到食品的安全應(yīng)用。在食品微生物檢測(cè)中有效應(yīng)用PCR技術(shù)，可以滿足食品安全檢測(cè)的需求。

[1]王華,劉斌.PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].生物技術(shù)通報(bào),2010(2):63-67.

[2]陳諾,唐善虎,岑璐伽,等.多重PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī),2010(10):72-75.

[3]胡博.PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代食品,2017(2):36-37.

[4]孫巖琳.PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用探究[J].黑龍江科技信息,2016(11):121.