李利華，盧濱，吳紅科，張浩，姚菲菲

（河南省鄭州人民醫(yī)院呼吸科，河南鄭州450003）

論著

干擾TRPM7對人肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

李利華，盧濱，吳紅科，張浩，姚菲菲

（河南省鄭州人民醫(yī)院呼吸科，河南鄭州450003）

目的研究干擾瞬時受體電位通道7（TRPM7）對人肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。方法用轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）刺激人胚肺成纖維細(xì)胞WI-38和MRC-5，Western blot檢測細(xì)胞平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和膠原Ⅰ的表達(dá)，來評價細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。用實時聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）和Western blot檢測細(xì)胞中TRPM7的表達(dá)。將特異性的TRPM7 siRNA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，并將細(xì)胞分為對照組、模型組、TRPM7 siRNA組、轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組（Scramble組）。檢測轉(zhuǎn)化過程中相關(guān)蛋白α-SMA、膠原Ⅰ、Smad3、p-Smad3及Smad7的表達(dá)。結(jié)果TGF-β1（15μg/L）作用24h后，成功誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞。與對照組比較，模型組細(xì)胞中TRPM7 mRNA和蛋白高表達(dá)，且細(xì)胞中α-SMA、膠原Ⅰ、Smad3及p-Smad3的蛋白表達(dá)增多，Smad7表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，TRPM7 siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞TRPM7 mRNA和蛋白低表達(dá)，且α-SMA、膠原Ⅰ、Smad3及p-Smad3的表達(dá)下降，Smad7的表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論下調(diào)TRPM7可在一定程度上干預(yù)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，該作用可能與TGF-β1/Smads信號通路有關(guān)。

瞬時受體電位通道7；肺纖維化；肺成纖維細(xì)胞；TGF-β1/Smads信號通路

特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種嚴(yán)重的彌漫性肺間質(zhì)疾病，病因不明、發(fā)病機(jī)制不清[1]，且全球發(fā)病率、死亡率不斷上升[2]。IPF是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎最常見最致命的形式[3]，最終可導(dǎo)致呼吸衰竭，且預(yù)后極差[4]。盡管目前對于該病有諸多治療方法，但是療效仍不理想。因此，研究并闡明其發(fā)病機(jī)制，尋找新的治療靶點，對攻克該病至關(guān)重要。

瞬時受體電位通道7（transient receptor potential channel 7，TRPM7）是細(xì)胞膜上的一類重要的陽離子瞬時受體電位通道（transient receptor potential channels，TRP）家族成員之一，TRPM7包含TRP離子通道與蛋白激酶域融合區(qū)域的雙功能膜蛋白[5]，可使自身或底物磷酸化，也被稱為通道酶[6]。TRPM7廣泛存在于機(jī)體中，參與細(xì)胞的生長、增殖、遷移、凋亡等多種生理過程[7]。TRPM7在纖維化疾病的發(fā)病過程中扮演著重要角色[8-9]，但其在肺纖維化中的作用至今鮮見報道。本實驗用人胚肺成纖維細(xì)胞系MRC-5和WI-38為研究對象，探討干擾TRPM7對轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

人胚肺成纖維細(xì)胞系WI-38和MRC-5購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，達(dá)爾伯克必需基本培養(yǎng)基（dulbecco's minimum essential medium，DMEM）培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司，胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）購自美國Gibco公司，重組人的TGF-β1購自以色列Pro Spec公司（批號：810TGFB131），兔抗人平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗體（貨號：ab5694）、兔抗人TRPM7抗體（貨號：ab109438）、小鼠抗人膠原Ⅰ抗體（貨號：ab6308）、兔抗人Smad3抗體（貨號：ab40854）、兔抗人p-Smad3抗體（貨號：ab52903）購自美國Abcam公司，小鼠抗人Smad7抗體（貨號：sc-365846）和小鼠抗人甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體（貨號：sc-47778）購自美國Santa Cruz公司，辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的兔抗小鼠IgG（貨號：SN133）和HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（貨號：SN134）購自南京生興生物技術(shù)有限公司，LipofetamineTM2000、TRIzol試劑盒與逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Invitrogen公司，無線電免疫沉淀（radio-immunoprecipitation assay，RIPA）蛋白裂解液來自美國Sigma-Aldrich公司，TRPM7 siRNA片段由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

分別將MRC-5細(xì)胞和WI-38細(xì)胞置于10％ FBS的DMEM培養(yǎng)基、37℃、5％二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至80％融合后，更換無血清培養(yǎng)基，待用。

1.3 肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化模型的復(fù)制

分別用0、5、10、15和20μg/L TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5和WI-38細(xì)胞24 h。用Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)，篩選細(xì)胞模型。

1.4 TRPM7 siRNA序列的設(shè)計及轉(zhuǎn)染

將人胚肺成纖維細(xì)胞WI-38和MRC-5接種于6孔板（2.0×105個/孔），待細(xì)胞生長至70％～80％時，更換無血清培養(yǎng)基，按照LipofetamineTM2000說明書進(jìn)行操作，分別將TRPM7 siRNA或非特異性siRNA（Scramble）轉(zhuǎn)染細(xì)胞48 h。

HPLC法需要的試劑較多，需要接觸OTA的標(biāo)準(zhǔn)品，使用的免疫親和柱也需要冷藏保存，需要避免移動色譜儀，便攜性不強(qiáng)，實驗耗時較長。但是該方法的重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，因此國家標(biāo)準(zhǔn)中推薦使用此方法[16-20]。

1.5 實驗分組

將細(xì)胞分為對照組、模型組、Scramble組和TRPM7 siRNA組。對照組細(xì)胞正常培養(yǎng)，模型組細(xì)胞用篩選出濃度的TGF-β1刺激24 h，Scramble組和TRPM7 siRNA組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染非特異性siRNA或TRPM7 siRNA后同模型組進(jìn)行相同處理。

1.6 實時聚合酶鏈反應(yīng)檢測TRPM7 mRNA的表達(dá)

分別提取MRC-5和WI-38細(xì)胞總RNA，測定RNA濃度和純度后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，并轉(zhuǎn)錄為DNA，聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）產(chǎn)物用1％瓊脂糖凝膠電泳。TRPM7正向引物：5'-GCAA ATGACTCCACTCTC-3'，反向引物：5'-GATTCTCTCT TCACTCCCAG-3'；內(nèi)參GAPDH正向引物：5'-ACAG CAACAGGGTGGTGGAC-3'，反向引物：5'-TTTGAGG GTGCAGCGAACTT-3'。根據(jù)2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達(dá)量，實驗重復(fù)3次。PCR引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.7 Western blot檢測α-SMA、膠原Ⅰ、TRPM7、Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白的表達(dá)

用0.05％胰蛋白酶消化細(xì)胞，磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline，PBS）洗滌3次，加入細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，提取蛋白并測定其濃度，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）電泳分離后，將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，用含5％脫脂奶粉、2％牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA）、0.2％Tween-20的PBS液的封閉液室溫下封閉2 h，4℃下過夜孵育一抗，包括小鼠抗人TRPM7抗體（1∶1 000）、兔抗人α-SMA抗體（1∶100）、小鼠抗人膠原Ⅰ抗體（1∶500）、小鼠抗人Smad3抗體（1∶1 000）、兔抗人p-Smad3抗體（1∶2 000）、兔抗人Smad7抗體（1∶500）和兔抗人GADPH抗體（1∶1 000），洗膜后，加入二抗（1∶4 000），用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯色反應(yīng)。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 Western blot檢測不同濃度TGF-β1對WI-38和MRC-5細(xì)胞中α-SMA和膠原Ⅰ表達(dá)的影響

2 結(jié)果

分別用0、5、10、15和20μg/L TGF-β1刺激WI-38和MRC-5細(xì)胞24 h，各組α-SMA和膠原Ⅰ的相對表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞：F=51.126和59.181，P=0.000；MRC-5細(xì)胞：F=59.690和49.163，P=0.000），均呈遞增趨勢（見圖1）。5μg/L TGF-β1組α-SMA和膠原Ⅰ的表達(dá)量與對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞：t=1.802和3.339，P=0.165和0.198；MRC-5細(xì)胞：t=2.328和3.157，P=0.091和0.172）。10、15和20μg/L TGF-β1組α-SMA和膠原Ⅰ的表達(dá)量與對照組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞10μg/L TGF-β1組：t=4.189和2.681，P=0.019和0.024；WI-38細(xì)胞15μg/L TGF-β1組：t=9.675和10.653，P=0.000；WI-38細(xì)胞20μg/L TGF-β1組：t=14.516和15.482，P=0.000；MRC-5細(xì)胞10μg/LTGF-β1組：t=2.816和3.462，P=0.039和0.015；MRC-5細(xì)胞15μg/L TGF-β1組：t=10.817和7.522，P=0.000；MRC-5細(xì)胞20μg/L TGF-β1組：t=16.295和19.745，P=0.000），15和20μg/L TGF-β1組α-SMA和膠原Ⅰ的表達(dá)＞0μg/L，表明15μg/L TGF-β1作用24 h后，肺成纖維細(xì)胞成功轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞。

2.2 TRPM7在TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化模型中高表達(dá)

用15μg/LTGF-β1分別刺激WI-38和MRC-5細(xì)胞24h，誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，實時聚合酶鏈反應(yīng)（real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR）和Western blot檢測結(jié)果表明，WI-38和MRC-5細(xì)胞的模型組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞TRPM7 mRNA：t=13.825，P=0.000；WI-38細(xì)胞TRPM7蛋白：t=27.500，P= 0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7 mRNA：t=24.316，P= 0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7蛋白：t=24.084，P=0.000），模型組中TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)量高于對照組（見圖2）。

圖2 Real-time PCR和Western blot檢測TRPM7在WI-38和MRC-5細(xì)胞中的表達(dá)

圖3 qPCR和Western blot檢測TRPM7 siRNA對WI-38和MRC-5細(xì)胞TRPM7表達(dá)的影響

2.3 TRPM7 siRNA抑制WI-38和MRC-5細(xì)胞中TRPM7的表達(dá)

轉(zhuǎn)染TRPM7 siRNA 48h后，用15μg/L TGF-β1刺激WI-38和MRC-5細(xì)胞24 h，TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)見圖3。模型組和對照組TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞TRPM7 mRNA：t=33.918，P=0.000；WI-38細(xì)胞TRPM7蛋白：t=26.774，P=0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7 mRNA：t=23.729，P=0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7蛋白：t= 26.855，P=0.001），模型組TRPM7表達(dá)高于對照組。模型組、Scramble組及TRPM7 siRNA組的TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)量，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞TRPM7 mRNA：F=264.277，P=0.000；WI-38細(xì)胞TRPM7蛋白：F=205.178，P=0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7 mRNA：F=184.192，P=0.000；MRC-5細(xì)胞TRPM7蛋白：F=248.786，P=0.000），其中siRNA轉(zhuǎn)染組TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)量與模型組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞：t= 17.870和19.314，P=0.000；MRC-5細(xì)胞：t=17.275和23.016，P=0.000），siRNA轉(zhuǎn)染組TRPM7 mRNA和蛋白表達(dá)量低于模型組。

2.4 TRPM7 siRNA對TGF-β1/Smad信號通路相關(guān)基因表達(dá)的影響

WI-38和MRC-5細(xì)胞模型組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞Smad3：t=6.604，P=0.003；WI-38細(xì)胞p-Smad3：t=8.486，P=0.001；WI-38細(xì)胞Smad7：t=7.977，P=0.001；MRC-5細(xì)胞Smad3：t= 6.154，P=0.004；MRC-5細(xì)胞p-Smad3：t=5.317，P= 0.006；MRC-5細(xì)胞Smad7：t=8.341，P=0.001），模型組Smad3和p-Smad3的蛋白表達(dá)高于對照組，Smad7蛋白表達(dá)低于對照組。模型組、Srcamble組及TRPM7 siRNA組的Smad3、p-Smad3和Smad7蛋白表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞Smad3：F=42.020，P=0.000；WI-38細(xì)胞p-Smad3：F=31.000，P=0.000；WI-38細(xì)胞Smad7：F=40.327，P= 0.000；MRC-5細(xì)胞Smad3：F=22.373，P=0.002；MRC-5細(xì)胞p-Smad3：F=60.928，P=0.000；MRC-5細(xì)胞Smad7：F=50.683，P=0.000）。TRPM7 siRNA可下調(diào)肺成纖維細(xì)胞中Smad3和p-Smad3的蛋白表達(dá)，上調(diào)Smad7蛋白表達(dá)（WI-38細(xì)胞：t=7.949、8.141和8.283，P=0.000；MRC-5細(xì)胞：t=8.283、9.354和9.125，P=0.000）。見圖4。

圖4 Western blot檢測TRPM7 siRNA對Smad3、p-Smad3及Smad7表達(dá)的影響

2.5 TRPM7 siRNA降低α-SMA和膠原Ⅰ的表達(dá)

Western blot檢測結(jié)果顯示，WI-38和MRC-5細(xì)胞模型組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞α-SMA：t=13.152，P=0.000；WI-38細(xì)胞膠原Ⅰ：t=11.631，P=0.000；MRC-5細(xì)胞α-SMA：t=11.913，P=0.000；MRC-5細(xì)胞膠原Ⅰ：t=12.129，P=0.000），模型組α-SMA和膠原Ⅰ蛋白表達(dá)量高于對照組；模型組、Srcamble組及TRPM7 siRNA組α-SMA和膠原Ⅰ蛋白表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞α-SMA：F=106.364，P=0.000；WI-38細(xì)胞膠原Ⅰ：F=107.823，P=0.000；MRC-5細(xì)胞α-SMA：F=135.850，P=0.000，MRC-5細(xì)胞F膠原Ⅰ：F=118.595，P=0.000）；其中模型組和Srcamble組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞α-SMA：t=0.868，P=0.257；WI-38細(xì)胞膠原Ⅰ：t=1.348，P=0.708；MRC-5細(xì)胞α-SMA：t=0.926，P= 0.327；MRC-5細(xì)胞膠原Ⅰ蛋白：t=0.158，P=0.847）。TRPM7 siRNA組WI-38和MRC-5細(xì)胞中α-SMA和膠原Ⅰ蛋白表達(dá)量與模型組比較，經(jīng)LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（WI-38細(xì)胞：t=14.185和 12.396，P=0.000；MRC-5細(xì)胞：t=10.339和8.969，P=0.000），表明TRPM7 siRNA組WI-38和MRC-5細(xì)胞中α-SMA和膠原Ⅰ蛋白表達(dá)量低于模型組。見圖5。

圖5 Western blot檢測TRPM7 siRNA對α-SMA表達(dá)和膠原Ⅰ表達(dá)的影響

3 討論

IPF病理表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)蛋白大量沉積及肺成纖維細(xì)胞聚集與活化，其發(fā)病機(jī)制迄今不明。通常被認(rèn)為是肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌纖維細(xì)胞并聚集在肺間質(zhì)，細(xì)胞外基質(zhì)合成增多降解減少，致纖維化的細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào)等多因素作用的結(jié)果。成纖維細(xì)胞在肺纖維化形成過程中扮演著極為重要的角色，其活化是肺纖維化形成的關(guān)鍵步驟和核心環(huán)節(jié)[10]。在肺纖維化發(fā)展過程中，活化的肺泡巨噬細(xì)胞或其他細(xì)胞分泌的TGF-β1使肺成纖維細(xì)胞表型發(fā)生轉(zhuǎn)化，為可表達(dá)α-SMA、合成大量膠原的肌成纖維細(xì)胞[11-12]，而肺間質(zhì)中的膠原纖維主要由肌成纖維細(xì)胞產(chǎn)生。肌成纖維細(xì)胞還可造成細(xì)胞外基質(zhì)異常沉積，誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡，在肺纖維化疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[13]。本實驗中，經(jīng)15μg/L TGF-β1誘導(dǎo)24 h，α-SMA和膠原Ⅰ蛋白合成顯著增高，表明肺成纖維細(xì)胞成功向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

TGF-β1/Smad信號通路在肺纖維化過程中起重要作用[14-16]。TGF-β1是TGF-β1/Smad信號通路中一個重要的調(diào)控因子，也是促肺纖維化的關(guān)鍵因子[11]，可促進(jìn)成纖維細(xì)胞過度增殖、分化，向成肌纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化[17]，繼而導(dǎo)致肺間質(zhì)和肺泡間α-SMA與膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的過度沉積，最終導(dǎo)致肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展。本實驗結(jié)果顯示，與模型組相比，TRPM7 siRNA可降低肺成纖維細(xì)胞中α-SMA和膠原Ⅰ蛋白的表達(dá)，表明TRPM7 siRNA通過抑制TGF-β1發(fā)揮抗纖維化作用。TGF-β1主要通過Smads信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)其下游因子表達(dá)而發(fā)揮致纖維化作用[18]。Smad蛋白既可促進(jìn)又可抑制TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，其中Smad3為TGF-β1/Smads信號通路中主要的活化蛋白，其正常表達(dá)是肺纖維化形成所必須的[19]，抑制Smad3或p-Smad3可抵抗TGF-β1誘導(dǎo)的纖維化[20]。而Smad7是TGF-β1/ Smad信號通路中的負(fù)調(diào)節(jié)蛋白，可阻滯Smad3磷酸化。此外Smad7活化可抑制TGF-β1的活性，從而抑制肺纖維化[21-22]。本實驗發(fā)現(xiàn)，TRPM7 siRNA可通過抑制TGF-β1/Smad信號途徑，下調(diào)Smad3及p-Smad3表達(dá)，上調(diào)Smad7表達(dá)，而減少肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為α-SMA表達(dá)和膠原Ⅰ蛋白合成減少。

TRPM7有陽離子通道和蛋白激酶雙重結(jié)構(gòu)，其通過影響細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)參與細(xì)胞多種生理過程[23]，在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)離子平衡、促進(jìn)細(xì)胞生長、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放及維持細(xì)胞功能等方面具有重要作用[24-25]。TRPM7被認(rèn)為是纖維化疾病的一個潛在的治療靶點[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，TRPM7在TGF-β1誘導(dǎo)的WI-38和MRC-5細(xì)胞中高表達(dá)。為進(jìn)一步確定TRPM7在肺纖維化中的作用，用TRPM7 siRNA抑制TRPM7的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TGF-β1/Smad信號通路受到抑制，WI-38和MRC-5細(xì)胞α-SMA和膠原Ⅰ蛋白表達(dá)均降低，表明TRPM7 siRNA在抑制肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

綜上，本研究證實，TRPM7 siRNA可在一定程度上抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，且該作用與TGF-β1/Smads信號通路有關(guān)。干擾TRPM7有望成為防治肺纖維化新的靶點。

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（童穎丹 編輯）

Inhibitive effect of TRPM7 on transformation of human lung fibroblasts to myofibroblasts

Li-hua Li,Bin Lu,Hong-ke Wu,Hao Zhang,Fei-fei Yao
(Department of Respirology,the People's Hospital of Zhengzhou, Zhengzhou,Henan 450003,China)

ObjectiveTo investigate the effects of siRNA-induced transient receptor potential channel 7 (TRPM7)on differentiation of human fetal lung fibroblasts to myofibroblasts induced by TGF-β1,providing a new target for the prevention and treatment of pulmonary fibrosis.MethodsWI-38 and MRC-5 cells were cultured and stimulated with TGF-β1.The expressions of smooth muscle actin(α-SMA)and collagenⅠwere detected by Western blot for evaluation of differentiation of fetal lung fibroblasts to myofibroblasts.The mRNA and protein expressions of TRPM7 in the cells were detected by real-time PCR and Western blot.The cells were divided into control group,model group,nonspecific transfected group and TRPM7 siRNA group. Western blot was performed to detect the expressions of α-SMA,collagenⅠ,Smad3,p-Smad3 and Smad7, respectively.ResultsWI-38 and MRC-5 cells were successfully transformed into muscle fibroblasts in the presence of TGF-β1(15 μg/L)for 24 h.Compared with the control group,the up-regulation of TRPM7,α-SMA,collagenⅠ,Smad3 and p-Smad3,and the down-regulation of Smad7 were observed in the model group(P＜0.05).Furthermore,the expressions of TRPM7,α-SMA,collagenⅠ,Smad3 and p-Smad3 were remarkably down-regulated in the TRPM7 siRNA group compared with the model group(P＜0.05),while TRPM7 siRNA significantly increased Smad7 level compared with the model group(P＜0.05).ConclusionsTRPM7 siRNA could restrain differentiation of fetal lung fibroblasts to myofibroblasts to some extent,which may be related to the activation of TGF-β1/Smads signal pathway.

transient receptor potential channel 7;pulmonary fibrosis;lung fibroblast;TGF-β1/Smads signaling

R563

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.01.007

1005-8982（2017）01-0035-07

2016-01-14