滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118）

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能和抗氧化性能的影響

滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰*

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118）

本試驗(yàn)采用胚蛋注射技術(shù)研究孵化后期補(bǔ)充外源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)蛋氨酸（Met）對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能和抗氧化性能的影響。選取300枚種蛋隨機(jī)分為2組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50枚種蛋。在孵化第24天進(jìn)行Met注射，對(duì)照組不做任何處理，處理組注射Met營(yíng)養(yǎng)液（Met 5 mg/mL，NaCl 7.5 mg/mL）1.5 mL。出雛后，每個(gè)重復(fù)選取體重均勻、健康的雛鵝20只進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，飼養(yǎng)28 d。結(jié)果表明：處理組對(duì)孵化率無(wú)顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝初生重（P＜0.05），顯著提高了0～7日齡平均日增重并顯著降低了飼料增重比（P＜0.05）；處理組降低了血清和肝臟中氧化型谷胱甘肽（ GSSG）和丙二醛（MDA）含量（P＜0.05）；提高了還原型谷胱甘肽（GSH）的含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（ GSH-Px）酶活性以及GSH和 GSSG的比值（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果顯示，孵化后期給養(yǎng)Met可顯著提高朗德鵝初生重，提高機(jī)體的抗氧化能力，促進(jìn)了機(jī)體生長(zhǎng)。

胚蛋給養(yǎng)；鵝；蛋氨酸；生長(zhǎng)性能；抗氧化性能

蛋氨酸在家禽生產(chǎn)上具有重要作用，不僅參與機(jī)體蛋白質(zhì)的合成，而且能提高機(jī)體的免疫機(jī)能和抗氧化性能等。蛋氨酸的相關(guān)代謝產(chǎn)物及硫化物，如半胱氨酸、?；撬岬?，對(duì)機(jī)體的氧化還原平衡狀態(tài)具有重要作用，其中半胱氨酸在細(xì)胞中可以合成谷胱甘肽，并且可以提高機(jī)體的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性。研究表明，提高日糧的蛋氨酸水平可以提高低孵化重肉雞中的超氧化物歧化酶（SOD）的活力，降低肝臟中丙二醛的含量以及改善肝臟還原型谷胱甘肽（ GSH）系統(tǒng)的氧化還原狀態(tài)來(lái)提高其生長(zhǎng)性能[1]。朗德鵝是世界著名的肥肝專用品種。研究表明，蛋氨酸的中間產(chǎn)物--?；撬峥梢云鸬奖Ｗo(hù)肝臟的作用，可以抵抗肝臟的脂質(zhì)過(guò)氧化和肝臟的纖維化[2]。本試驗(yàn)利用胚蛋注射技術(shù)來(lái)探索蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能和抗氧化性能的影響，為蛋氨酸在鵝生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用種蛋購(gòu)自吉林省梅河口市德坤禽類食品有限公司，種蛋保存時(shí)間均在7 d以內(nèi)。DL-蛋氨酸購(gòu)自諾偉司飼料添加劑（上海）有限公司，其純度≥99%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組 本試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)。選擇母鵝產(chǎn)蛋史、產(chǎn)次和營(yíng)養(yǎng)攝入相近的朗德鵝種鵝種蛋300枚，依據(jù)種蛋的儲(chǔ)存時(shí)間（7 d內(nèi)）、種蛋重及蛋形指數(shù)將其分為3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50枚種蛋。在種蛋孵化期的第24天進(jìn)行胚蛋給養(yǎng)，對(duì)照組不進(jìn)行任何處理，處理組每枚種蛋注射1.5 mL的蛋氨酸營(yíng)養(yǎng)液，濃度為Met 5 mg/mL、NaCl 7.5 mg/mL。孵化至出雛后，每個(gè)重復(fù)挑選20只健康且體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的雛鵝進(jìn)行飼養(yǎng)，試驗(yàn)周期為28 d。

1.3 種蛋的孵化 選擇德州科裕孵化設(shè)備有限公司制造的科裕CFZ微電腦全自動(dòng)孵化機(jī)進(jìn)行孵化。根據(jù)鵝的胚胎發(fā)育規(guī)律孵化分為前期1～14 d、中期為15～28 d、后期在29～30 d 3個(gè)階段。孵化期采用全進(jìn)全出制變溫孵化。3個(gè)階段的濕度和溫度各不相同，分別控制在70%和37.8℃、65%和37.5℃以及72%和36.5℃。由于鵝蛋蛋殼相對(duì)較厚，蛋殼的表面積相對(duì)小，孵化后期產(chǎn)熱增加，影響胚蛋內(nèi)羊水和卵黃囊營(yíng)養(yǎng)吸收，導(dǎo)致胚胎提前出殼或者死胚。所以，從孵化的第18 天開(kāi)始至第24 天，每天中午涼蛋1次，第25～28天，每天涼蛋3次。在孵化的29 d將胚蛋轉(zhuǎn)入出雛機(jī)內(nèi)繼續(xù)孵化直至出殼。其他孵化管理按常規(guī)孵化程序進(jìn)行。

1.4 胚蛋給養(yǎng) 胚蛋給養(yǎng)參照Tako等[3]方法，并進(jìn)行了修改，具體步驟：首先通過(guò)照蛋，確定注射部位羊膜腔的位置，然后用75%的酒精棉球?qū)︹g端注射部位進(jìn)行消毒，在消毒過(guò)的區(qū)域鉆適宜大小的孔，用5 mL注射器垂直進(jìn)針（深度為2 cm左右），將營(yíng)養(yǎng)液注射到羊膜腔中（1.5 mL/枚），為避免感染，每枚胚蛋用1枚針頭。注射完畢后經(jīng)再次消毒后，用滅菌的石蠟迅速封口，然后按照正常的孵化程序繼續(xù)孵化直至出殼。

1.5 飼養(yǎng)管理 參照NRC（1994）推薦的鵝營(yíng)養(yǎng)需要來(lái)配制飼糧[4]（表1），出殼后雛鵝分為3個(gè)重復(fù)進(jìn)行飼養(yǎng)，在出殼后12 h內(nèi)開(kāi)水，24 h內(nèi)開(kāi)食，并嚴(yán)格控制飼養(yǎng)環(huán)境條件。雛鵝的飼養(yǎng)管理和免疫按照正常的程序進(jìn)行。

1.6 樣品采集 在出殼當(dāng)天（出殼2 h以內(nèi)，0 d）、第7天（7 d）、和第28天（28 d）從每組選取6羽（每個(gè)重復(fù)2羽）鵝胚/雛鵝進(jìn)行組織樣品采集。在雛鵝第7、28天頸靜脈取血液樣品5 mL于離心管中，3 000×g離心15 min，將上清液分裝于0.5 mL的EP管中，置于-80℃低溫冰箱中保存待測(cè)。試驗(yàn)雛鵝采血完畢，頸部放血致死，將肝臟樣品完整取出，用預(yù)冷的生理鹽水小心沖洗并去除其上附屬的其他組織，然后將其分成3份，迅速放入準(zhǔn)備好的液氮中冷凍，置于-80℃超低溫冰箱中保存用于抗氧化性能的測(cè)定。

1.7 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.7.1 孵化率測(cè)定 雛鵝完全出雛后，按重復(fù)來(lái)計(jì)算孵化率，其中胚蛋注射前（孵化第23天）通過(guò)照蛋檢測(cè)到的死胚不統(tǒng)計(jì)在內(nèi)。

1.7.2 生長(zhǎng)性能測(cè)定 每天記錄采食量，分別于出殼后第0、7、28天按重復(fù)數(shù)記錄體重，計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和飼料增重比（F/ G）。

1.7.3 血清與肝臟抗氧化指標(biāo)測(cè)定 氧化型谷胱甘肽（ GSSG）、還原型谷胱甘肽（ GSH）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（ GSH-Px）和丙二醛（MDA）等指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010進(jìn)行整理歸納后，用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用t-text進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05為顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.05≤P＜0.10為有趨勢(shì)判斷標(biāo)準(zhǔn)。所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果分析

2.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能的影響由表2可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)孵化率無(wú)顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝的初生重（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)0 ～7 d的ADFI無(wú)顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了0～7 d朗德鵝的ADG（P＜0.05）并顯著降低了0～7 d朗德鵝的F/G（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)7 ～28 d和0 ～ 28 d的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著性的影響（P＞0.10）。

2.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸有降低7 d血清中 GSSG含量的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10）；顯著提高了7 d血清中的 GSH含量（P＜0.05）和GSH/ GSSG（P＜0.05），但在28 d時(shí)對(duì)其均無(wú)顯著性影響（P＞0.10）。

表2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能的影響

表3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清氧化型和還原型GSH的影響

由表4可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了7 d血清中的MDA含量（P＜0.05），但對(duì)28 d血清的MDA含量無(wú)顯著影響（P＞0.10）。對(duì)7 d和28 d血清中的 GSH-Px活性均無(wú)顯著性影響（P＞0.10）。

2.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟抗氧化指標(biāo)的影響 由表5可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了0 d和7 d肝臟的GSSG含量（P＜0.05），顯著提高了0 d肝臟的 GSH含量（P＜0.05），對(duì)7 d和28 d 肝臟 GSH含量有提高趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），對(duì)28 d肝臟的 GSSG含量無(wú)顯著性影響（P＞0.10），但試驗(yàn)全程提高了 GSH / GSSG （P＜0.05）。

表4 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝血清GSH-PxHE 和MDA的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比處理組顯著的提高了0 d和7 d肝臟的 GSH-Px活性（P＜0.05），顯著性降低了0 d肝臟的MDA含量（P＜0.05），對(duì)28 d肝臟的 GSH-Px活性和7 d和28 d肝臟的MDA含量無(wú)顯著性影響（P＞0.10）。

表5 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟氧化型和還原型GSH的影響

表6 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝肝臟GSH-PxHE 和MDA的影響

3 討 論

3.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝孵化率的影響 孵化率是影響家禽養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的一個(gè)關(guān)鍵因素，故孵化率是胚蛋給養(yǎng)是否成功的一個(gè)重要考察指標(biāo)。胚蛋給養(yǎng)的時(shí)間、胚蛋的種類、注射液的滲透壓、注射體積等諸多因素都對(duì)孵化率有不同程度的影響[5]。研究表明，在胚胎后期給胚胎補(bǔ)充外源性的碳水化合物可以提高鴿的孵化率，而在鴨上孵化率是降低的[6-7]。Zhai等[8]研究表明胚蛋注射左旋肉堿對(duì)孵化率沒(méi)有影響，李德生[9]研究表明胚蛋注射蛋氨酸對(duì)吉林白鵝的孵化率無(wú)顯著影響，本試驗(yàn)研究的研究結(jié)果與其一致。這表明本試驗(yàn)給養(yǎng)蛋氨酸的處理是成功的，可用于后續(xù)進(jìn)一步的研究。

3.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝生長(zhǎng)性能的影響 家禽孵化后期由于胚胎機(jī)體活動(dòng)加強(qiáng)如開(kāi)始轉(zhuǎn)身、破殼等，而此時(shí)胚蛋內(nèi)的碳水化合物不足，機(jī)體會(huì)通過(guò)糖異生作用動(dòng)員胸肌中的蛋白質(zhì)來(lái)維持代謝需要，這直接影響了胚胎的胸肌發(fā)育，各組織器官發(fā)育也受到了影響，進(jìn)而可能會(huì)影響禽類的初生重。日糧中添加蛋氨酸提高了胸肌Myf5和MEF2B的相對(duì)表達(dá)量并降低了MSTN的表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)了肉雞的胸肌發(fā)育[10]。Coskun等[11]研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了雞的出殼重。李世召等[12]研究表明，胚蛋內(nèi)給養(yǎng)3 mg維生素C顯著提高了肉仔雞的初生重，并顯著降低了1～42 d的F/G。本試驗(yàn)研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了初生重和0～7 d的ADG，顯著降低了0～7 d的F/G，同上述研究結(jié)果相似，這可能是由于胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提供了腸道發(fā)育所需的氨基酸，促進(jìn)了肌肉發(fā)育。陳偉[6]和李德生等[9]在鴨和吉林白鵝上的研究指出，胚蛋給養(yǎng)二糖和蛋氨酸促進(jìn)了腸道和胸肌發(fā)育，這進(jìn)一步說(shuō)明了本試驗(yàn)的結(jié)果。

3.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)朗德鵝抗氧化性能的影響動(dòng)物機(jī)體在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，其過(guò)度積累會(huì)對(duì)機(jī)體造成氧化應(yīng)激，機(jī)體通過(guò)自身的抗氧化系統(tǒng)來(lái)清除過(guò)多的自由基。含硫氨基酸通過(guò)自身的抗氧化作用或者生成能夠起到抗氧化作用的代謝產(chǎn)物來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化作用[14]。

GSH在細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷防御中發(fā)揮著重要作用，其含量及相關(guān)酶活性可作為反映機(jī)體抗氧化狀態(tài)的標(biāo)志。其原因是， GSH是 GSH-Px的底物，在清除細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化氫（H2O2）及脂類過(guò)氧化物上發(fā)揮作用；此外， GSH也能夠單獨(dú)地與烷自由基、過(guò)氧自由基、半醌自由基等眾多自由基發(fā)生作用[15]。蛋氨酸能夠參與體內(nèi)甲基基團(tuán)代謝以及參與半胱氨酸合成，而半胱氨酸又是組織中合成GSH和?；撬岬那绑w物質(zhì)。

GSH-Px能夠通過(guò)催化 GSH與過(guò)氧化氫反應(yīng)生成 GSSG來(lái)清除過(guò)氧化氫。 GSSG可在 GSSG還原酶的催化下形成 GSH或者直接清除出細(xì)胞。在細(xì)胞內(nèi) GSH/ GSSG的和 GSH的含量能反映出硫醇的氧化還原狀態(tài)。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸增加了 GSH的含量以及降低了 GSSG的含量，而且提高了雛鵝血清和肝臟的 GSH-Px活性。這同李豪[16]在仔豬上的研究結(jié)果較為相似。蛋氨酸在轉(zhuǎn)甲基和轉(zhuǎn)硫的作用下能夠生成半胱氨酸，而半胱氨酸又是谷胱甘肽合成的限速氨基酸，因此，胚蛋給養(yǎng)Met增加了機(jī)體的 GSH含量。

MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其在組織中的含量反映了機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化自由基的存在和細(xì)胞的被氧化程度，所以其含量的高低不僅反映了機(jī)體脂質(zhì)的氧化程度，并且間接反映了細(xì)胞的受損程度[15]。葉慧等[13]研究表明，隨著日糧中蛋氨酸水平的提高，獅頭鵝血清中MDA的含量也隨著降低。本試驗(yàn)研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸降低了血清和肝臟中的MDA含量，同葉慧等[13]的研究結(jié)果相似，這進(jìn)一步說(shuō)明胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機(jī)體的抗氧化能力。

4 結(jié) 論

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對(duì)孵化率無(wú)顯著性影響，但顯著提高了朗德鵝的初生重，提高了0～7日齡的平均日增重并降低了飼料增重比，促進(jìn)了生長(zhǎng)。

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機(jī)體血清和肝臟的 GSH和 GSH-Px含量，降低了 GSSG和MDA含量，在一定程度上提高了朗德鵝的抗氧化能力。

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S835.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-01-066

2016-06-13；

2016-07-16

國(guó)家自然科學(xué)基金（31372331）

滕戰(zhàn)偉（1988-），男，河南鄢陵人，碩士研究生，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè),E-mail: tengwei416@126.com

*通訊作者：婁玉杰，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: lyjjlau@ 163.com