高 博,李 欽，楊麗霞，陳方圓,范 強(qiáng)

(1.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000)

·綜 述·

鐮形棘豆的研究現(xiàn)狀與分析*

高 博1,李 欽1，楊麗霞2，陳方圓1,范 強(qiáng)3

(1.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000)

鐮形棘豆是我國傳統(tǒng)藏藥材，具有較高的藥用價(jià)值。綜述了近年來鐮形棘豆的化學(xué)成分、質(zhì)量控制、臨床應(yīng)用、藥理作用等研究情況，并對(duì)目前研究存在的問題進(jìn)行分析，為進(jìn)一步開發(fā)和利用鐮形棘豆提供參考。

鐮形棘豆；化學(xué)成分；質(zhì)量控制；臨床應(yīng)用；藥理作用

鐮形棘豆為豆科棘豆屬植物鐮形棘豆OxytropisfalcateBunge的干燥全草，每年5-7月份花期旺盛時(shí)采挖，洗去泥土，除去枯葉及根須，略用棒砸，以紙遮蔽，曬干即可。藏藥稱之為“莪大夏”“達(dá)夏”“大夏”，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥(第一冊(cè))[1]。鐮形棘豆主要分布于我國西部地區(qū)海拔 2 700～4 300 m 的溝谷、河灘、沙地和草甸[2]，是青藏高原常用的民間草藥，因其藥效廣泛，有“草藥之王”之稱。該藥性寒、味辛，歸肺、脾經(jīng)，有小毒，具有解毒生肌、止血通便等功效。內(nèi)服用于流行性感冒、扁桃體炎、氣管炎、便秘、高燒、出血等癥，外敷用于創(chuàng)傷、腫痛、骨折，民間多用于刀傷[3-6]。鐮形棘豆是多種復(fù)方藏藥制劑的主要組成藥物，為更好地開發(fā)、利用鐮形棘豆，本文就近年來鐮形棘豆的化學(xué)成分、質(zhì)量控制、制劑及其臨床應(yīng)用、藥理作用等研究情況進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)成分

迄今為止，從鐮形棘豆中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分主要有黃酮類、生物堿類、揮發(fā)性成分和微量元素等。

1.1 黃酮類

現(xiàn)代研究表明：黃酮類化合物是鐮形棘豆的主要化學(xué)成分，在該植物中所占比例較高。已發(fā)現(xiàn)的黃酮類成分主要為黃酮苷、黃酮及二氫黃酮、二氫查耳酮、黃酮醇、查耳酮、異黃烷及黃烷酮等。見表1。

表1 鐮形棘豆黃酮類化合物類別與主要成分

1.2 生物堿類

生物堿類是鐮形棘豆中抗腫瘤的主要活性成分，主要集中于正丁醇萃取部分[13]，按其基本結(jié)構(gòu)可以分為喹喏里西啶類、吲哚里西啶類、有機(jī)酰胺類和嗎啡烷類等。見表2。

表2 鐮形棘豆生物堿類化合物類別與主要成分

1.3 微量元素

楊光明等[14]運(yùn)用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-AES)來測定鐮形棘豆及其炭品水煎液中砷、鋅、鉛、鈷、鎘、鐵、錳、鉻、鎂、銅、鈣11種微量元素的含量，并進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果顯示：鐮形棘豆制炭后鈣元素的含量顯著提高，而其他10種微量元素的含量均有不同程度的降低。

1.4 揮發(fā)性成分

王棟等[15]通過水蒸氣蒸餾、超臨界CO2萃取和頂空萃取3種方法，并利用氣相色譜(GC)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)技術(shù)來分析藏藥鐮形棘豆中的揮發(fā)性成分，共鑒定出58個(gè)化合物，其中烷烴類和醛類化合物為主要揮發(fā)性成分，分別占71.0%和84.5%。鄭尚珍等[16]采用GC-MS聯(lián)用方法對(duì)鐮形棘豆的精油化學(xué)成分進(jìn)行了研究，共鑒定出57個(gè)成分，精油總量達(dá)3.8%。

1.5 其他類

除上述化合物外，鐮形棘豆中還含有很多其他化合物，如甾族類化合物，包括β-谷甾醇、胡蘿卜苷、豆甾醇[3-5, 9,17]。

2 質(zhì)量控制

2.1 總黃酮和總酚含量的檢測

鐮形棘豆黃酮類成分和多酚類成分具有較好的抗炎和抗氧化作用?？傸S酮的測定一般采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法，但文獻(xiàn)報(bào)道此反應(yīng)對(duì)以鼠李檸檬素為代表的黃酮類化合物會(huì)顯假陰性[18]。李茂星等[19]建立了以蘆丁為對(duì)照品，30 g/L 二氯氧鋯為顯色劑，樣品經(jīng)2.5 mol/L鹽酸甲醇溶液在90 ℃ 水解30 min后于波長453 nm處測定鐮形棘豆總黃酮的方法，測得水提取物中總黃酮含量為5.79%。目前對(duì)鐮形棘豆所含的酚類化合物報(bào)道較少。楊光明等[20]以沒食子酸為對(duì)照品，采用福林-酚比色法測定西藏安多、班戈和青海共和縣3個(gè)產(chǎn)地鐮形棘豆中總酚的含量，結(jié)果分別為0.530%、0.657%和0.493%。李茂星等人的方法簡便易行、靈敏準(zhǔn)確、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性強(qiáng)，可為鐮形棘豆總黃酮和總酚的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供參考。

2.2 總生物堿含量的檢測

鐮形棘豆總生物堿具有明顯的抗腫瘤活性，因此建立總生物堿的含量測定方法對(duì)鐮形棘豆和其制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)、藥理作用研究顯得尤為重要。由于所含生物堿無紫外吸收，檢測難度大，相關(guān)報(bào)道很少。楊光明等[21]采用溴麝香草酚藍(lán)酸性染料比色法，以野決明堿為對(duì)照品，于最大吸收波長413 nm處測定青海、西藏、甘肅3個(gè)不同產(chǎn)地和不同批號(hào)的鐮形棘豆總生物堿含量，其中青海藥材總生物堿含量最高，約為 0.1 mg/g。

2.3 黃酮單體成分檢測

高效液相色譜法具有分析速度快、檢測靈敏度高的特點(diǎn)，已被廣泛用于鐮形棘豆黃酮類單體成分的定量檢測。樓成華等[22]采用HPLC法測得3批鐮形棘豆藥材中2′，4′-二羥基查耳酮的平均含量為 0.64%；姜華等[23]采用HPLC法測出5批鐮形棘豆藥材中鼠李檸檬素的平均含量為0.39%；朱建明等[24]采用HPLC法同時(shí)測定6批鐮形棘豆中2′，4′-二羥基查耳酮和鼠李檸檬素的含量，結(jié)果兩者含量分別為0.63 mg/g、3.65 mg/g；另外，侯豐灝[25]等采用RP-HPLC測定出鐮形棘豆中球松素的含量為0.16%。上述成分的定量分析研究為制訂鐮形棘豆質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠依據(jù)。

2.4 指紋圖譜分析

由于指紋圖譜能全面反映藥物內(nèi)在化學(xué)成分的種類與數(shù)量，在評(píng)價(jià)藥物真實(shí)性、穩(wěn)定性和有效性方面具有很大優(yōu)勢。為全面控制鐮形棘豆質(zhì)量，燕珂等[26]對(duì)10批鐮形棘豆藥材進(jìn)行了高效液相分析，建立了其高效液相色譜指紋圖譜，經(jīng)相似度評(píng)價(jià)共得到8個(gè)特征峰，特征峰的相對(duì)峰面積積分比值差別較大，基本反映了鐮形棘豆藥材的內(nèi)在化學(xué)特征，但8個(gè)特征峰所對(duì)應(yīng)的具體化學(xué)成分有待進(jìn)一步研究。

3 提取純化工藝研究

提取純化工藝研究可進(jìn)一步提高活性成分得率、降低生產(chǎn)成本，更好地服務(wù)于有效部位相關(guān)制劑的開發(fā)，是現(xiàn)代藥物制劑研究中的重要工藝內(nèi)容。尖木措等[27]以鐮形棘豆多糖的提取效率及含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選出多糖的最佳提取條件為粉碎度20目、料液比1∶16，80 ℃回流2 h，此工藝條件下多糖的平均提取量為2.4%。郭敏等[28]以鐮形棘豆總黃酮得率和純度為指標(biāo)，采用硝酸鈉-硝酸鋁比色法測定，比較了水提醇沉酸解、水提、堿提酸沉和水提酸解4種不同工藝對(duì)總黃酮提取的影響，結(jié)果水提酸解為最佳提取工藝，提取物中總黃酮提取率為1.6%，純度為11.26%。劉延彤等[29]通過優(yōu)化D-101大孔吸附樹脂富集純化總黃酮的工藝參數(shù)，使得富集后總黃酮苷含量達(dá)到26%。詹珺雁等[30]研究得出總生物堿的最佳制備工藝為：以含5 mL/L乙酸的體積分?jǐn)?shù) 40 mL/L 乙醇為溶劑，料液比1∶20，60 ℃超聲2 次，732陽離子交換樹脂吸附，再用10 mL/L氨水的體積分?jǐn)?shù)60 mL/L 乙醇從樹脂中超聲提取生物堿。此法為進(jìn)一步制備鐮形棘豆總生物堿并進(jìn)行相關(guān)藥理學(xué)研究和新藥物的研發(fā)提供了科學(xué)的依據(jù)。

4 制劑及其臨床應(yīng)用

鐮形棘豆在臨床上主要與其他藥物配伍應(yīng)用，文獻(xiàn)中很少報(bào)道其單味藥制劑，目前含鐮形棘豆的制劑及其臨床作用見表3。

表3 鐮形棘豆主要制劑及臨床應(yīng)用

5 藥理作用研究

近年來，鐮形棘豆的藥理作用研究逐年增加，主要集中在總黃酮及其單體的抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、糖尿病等方面，以及生物堿抗腫瘤等方面的研究。

5.1 抗炎、鎮(zhèn)痛、祛痰作用

鐮形棘豆對(duì)急性和慢性炎癥都有較好的作用，其抗炎藥理作用已經(jīng)得到了認(rèn)可。研究發(fā)現(xiàn)，鐮形棘豆總黃酮苷元可通過促進(jìn)大鼠腎上腺皮質(zhì)激素分泌而起到抗炎、祛痰的作用[37]?？寡着c鎮(zhèn)痛作用往往是相互聯(lián)系的，鐮形棘豆醇提物和水提物能明顯抑制小鼠二甲苯引起的耳腫脹，能抑制雞蛋清引起的大鼠足腫脹，顯著減少醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)[38]；鐮形棘豆鼠李檸檬素也具有同樣的抗炎作用[39]。另外，在熱刺激模型(熱板法)和化學(xué)刺激模型(醋酸扭體法和福爾馬林法)中[40]，鐮形棘豆對(duì)熱板實(shí)驗(yàn)中的小鼠舔足或跳離時(shí)間影響不大，對(duì)化學(xué)刺激引起的疼痛具有顯著效果。這些研究都表明鐮形棘豆對(duì)炎癥和疼痛的抑制作用。此外，有研究報(bào)道鐮形棘豆具有一定的平喘作用[3]，在離體豚鼠空腸上具有抗乙酰膽堿的作用[41]，在離體豚鼠氣管上總黃酮苷元具有抗組胺的作用。

5.2 抗氧化作用

鐮形棘豆屬于高原植物，對(duì)強(qiáng)紫外線具有較強(qiáng)的耐受作用，具有較好的抗氧化作用。以鐮形棘豆總黃酮為物質(zhì)基礎(chǔ)的霜?jiǎng)?duì)急性紫外線損傷大鼠的皮膚組織具有較好的修復(fù)作用[5]。體外研究表明：鐮形棘豆總黃酮具有羥自由基清除能力、DPPH自由基清除作用，以及還原能力，且有一定的劑量依賴性[42]。有研究報(bào)道：在D-半乳糖致亞急性衰老小鼠抗氧化實(shí)驗(yàn)中，以鐮形棘豆總黃酮提取物連續(xù)灌胃70 d后，小鼠血漿、心臟和肝臟中的丙二醛含量顯著降低，超氧化物歧化酶和谷胱甘含量顯著升高，表明鐮形棘豆總黃酮在抗氧化、抗衰老方面具有顯著作用[43]。

5.3 對(duì)循環(huán)系統(tǒng)的作用

研究發(fā)現(xiàn)：鐮形棘豆對(duì)循環(huán)系統(tǒng)具有較好的藥理作用。在離體心臟冠脈灌流實(shí)驗(yàn)中，鐮形棘豆總黃酮苷元能夠抑制心臟收縮力，增加灌流量；對(duì)在體心臟可產(chǎn)生心臟收縮短暫加強(qiáng)或抑制減弱的作用[41]。在小鼠止血實(shí)驗(yàn)中[44]，鐮形棘豆總提取物能夠明顯縮短小鼠出、凝血時(shí)間。此外，鐮形棘豆藥效篩選實(shí)驗(yàn)顯示：對(duì)凝血酶原時(shí)間和血漿復(fù)鈣時(shí)間具有明顯縮短的藥效部位是正丁醇部位和水溶液部位。此外，文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，《如意寶樹》載有“鐮形棘豆粉末撒瘡生新肌，去骨結(jié)，內(nèi)服澀脈止血，為止血要藥”。以上研究說明，鐮形棘豆對(duì)循環(huán)系統(tǒng)具有一定的藥理作用。

5.4 免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤作用

以鐮形棘豆煎液灌服小鼠后，油鏡下觀察腹腔滲液瑞氏染片，計(jì)數(shù)已吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其能夠明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能[45]。同時(shí)，2，4-二硝基氯苯皮膚試驗(yàn)和植物血凝素皮膚試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，鐮形棘豆煎液對(duì)細(xì)胞免疫具有抑制作用。在抗腫瘤研究方面，發(fā)現(xiàn)鐮形棘豆黃酮類化合物對(duì)人癌細(xì)胞株SMMC-7721、HeLa、A549、MGC-803、MDA-MB-231、LOVO的增殖具有不同程度的抑制[46]。此外，在采用鐮形棘豆總生物堿進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，通過觀察S180荷瘤小鼠模型體質(zhì)量、抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，發(fā)現(xiàn)小鼠沒有出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)，體質(zhì)量未降低，顯示其有明顯的抗腫瘤作用[47]。

5.5 毒副作用

鐮形棘豆“味苦寒，有小毒”[1]。國內(nèi)外研究主要證實(shí)鐮形棘豆的毒性來源主要是生物堿類。如霍星華[13]等證明鐮形棘豆中含苦馬豆素及其類似生物堿，而苦馬豆素被國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為是棘豆屬植物的主要毒性成分，提示鐮形棘豆的毒性可能來自苦馬豆素及其類似物。在總黃酮苷元急性毒性實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)小鼠最大耐受量為 300 g總黃酮苷元/kg體質(zhì)量，灌胃7 d后沒有發(fā)現(xiàn)毒副作用反應(yīng)[48]。張曉晶等[49]首次將鐮形棘豆全草分為地上和地下水溶、地上和地下脂溶4種不同提取物，并同時(shí)對(duì)其進(jìn)行亞急性毒性研究。結(jié)果：以鐮形棘豆最大劑量灌胃小鼠時(shí)未引起小鼠死亡，但進(jìn)一步的臟器系數(shù)和血液生化指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)其地上和地下脂溶性提取物對(duì)小鼠肝臟的代謝和排泄功能有輕中度損傷，地上和地下水溶性提取物和地下脂溶性提取物對(duì)雄性小鼠腎臟功能有輕度損傷。

5.6 其他作用

近年來，基于鐮形棘豆抗炎作用基礎(chǔ)，本課題組已開展了一些鐮形棘豆提取物對(duì)腎間質(zhì)纖維化影響的研究，并取得了初步成果。比如：發(fā)現(xiàn)鐮形棘豆總黃酮對(duì)腎間質(zhì)纖維化具有一定的抑制作用，在體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其具有抑制細(xì)胞增殖，阻抑纖維化因子結(jié)締組織生長因子(CTGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9))、纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)等mRNA表達(dá)的作用[50-51]。同時(shí)，課題組在疾病與炎癥的發(fā)病機(jī)制研究中，開展了鐮形棘豆干預(yù)炎癥介導(dǎo)的胰島素抵抗的作用研究[52-53]。

6 小 結(jié)

近年來，人們對(duì)鐮形棘豆的化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用等方面都做了大量的研究工作，為科學(xué)地開發(fā)鐮形棘豆資源奠定了良好的基礎(chǔ)，但仍有較多科學(xué)問題值得我們深入研究：首先，藏藥鐮形棘豆質(zhì)量受氣候、生態(tài)環(huán)境、產(chǎn)地、采收期和加工炮制方法等多種因素的影響，雖有較多文獻(xiàn)報(bào)道不同產(chǎn)地或批次鐮形棘豆的質(zhì)量存在較大差別，但均未深入研究該差別的形成原因。因此，需要積極探求鐮形棘豆的質(zhì)量和生態(tài)環(huán)境的相關(guān)性，尋找其道地性的形成規(guī)律和優(yōu)質(zhì)品種，并建立一種能夠快速鑒別該藥材真?zhèn)魏唾|(zhì)量優(yōu)劣的檢測方法，從而推進(jìn)藏藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。其次，鐮形棘豆的現(xiàn)行藥材標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥(第一冊(cè))[1],僅對(duì)鐮形棘豆的基源、性狀等做了描述，無理化鑒別和含量測定項(xiàng)，對(duì)藥材質(zhì)量的可控性較差，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需進(jìn)一步修訂完善。最后，目前已有學(xué)者證實(shí)鐮形棘豆中含有毒成分苦馬豆素及其類似物，故其量效-量毒關(guān)系、中毒機(jī)制、配伍減毒、苦馬豆素類似物結(jié)構(gòu)鑒定等諸多問題都是今后研究的熱點(diǎn)。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)01-0075-06

R282.71

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.34

楊麗霞，副主任醫(yī)師，yanglixia-415@163.com

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81202971，81560764)；甘肅省中醫(yī)藥管理局科研課題(GZK-2016-70)

2016-02-08；

2016-12-16