段 赟，夏小軍，馬 駿，李雪松，開金龍，姚金華

(1.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730020；3.慶陽市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅 慶陽 745000)

·實(shí)驗(yàn)研究·

復(fù)方銀菊合劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍愈合及體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究*

段 赟1，夏小軍1，馬 駿2，李雪松1，開金龍3，姚金華3

(1.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730020；3.慶陽市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅 慶陽 745000)

目的：復(fù)方銀菊合劑藥效學(xué)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。方法：觀察復(fù)方銀菊合劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍的影響；對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌的體外抑菌作用；多次給藥對大鼠口腔黏膜刺激性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：復(fù)方銀菊合劑12.5，4.2μL/g體質(zhì)量2個劑量能明顯促進(jìn)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍愈合；復(fù)方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用；復(fù)方銀菊合劑12.5μL/g體質(zhì)量連續(xù)給藥7d，對大鼠口腔黏膜無刺激性反應(yīng)。結(jié)論：復(fù)方銀菊合劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍有明顯治療作用，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用，多次給藥對大鼠口腔黏膜無刺激性反應(yīng)。

復(fù)方銀菊合劑/藥效學(xué); 復(fù)方銀菊合劑/毒理學(xué) ;口腔潰瘍；實(shí)驗(yàn)動物；大鼠

復(fù)方銀菊合劑是甘肅省慶陽市中醫(yī)醫(yī)院研制的防治白血病化療后口腔潰瘍的純中藥制劑(甘藥制字號：Z04101016)，由金銀花、野菊花、天花粉、生甘草4味中藥材組成，具有清熱解毒、滋陰降火、祛腐生肌之功效，經(jīng)10余年的臨床運(yùn)用,療效顯著?，F(xiàn)將復(fù)方銀菊合劑藥效學(xué)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告如下。

1 材 料

1.1 動 物

Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量180～220g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK(甘)20090004，合格證號為0000262。

1.2 菌 株

金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)和白色念珠菌(ATCC10231)，均由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所提供。

1.3 藥 品

復(fù)方銀菊合劑，每瓶100mL,由慶陽市中醫(yī)醫(yī)院提供，批號081203；冰硼含片，白云山湯陰東泰藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號080601；鹽酸環(huán)丙沙星片，山西津華暉星制藥有限公司產(chǎn)品，批號080513；酮康唑片，西安楊森制藥有限公司產(chǎn)品，批號081006。以上各藥臨用前以生理鹽水配成所需質(zhì)量分?jǐn)?shù)溶液，調(diào)pH值為7.4，高壓滅菌。

2 方法與結(jié)果

2.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.2 實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍愈合實(shí)驗(yàn)

觀察復(fù)方銀菊合劑對口腔潰瘍的治療作用。實(shí)驗(yàn)按照參考文獻(xiàn)[1,2]方法進(jìn)行。

將40只大鼠隨機(jī)分為模型對照組、冰硼含片組、復(fù)方銀菊合劑大劑量組、復(fù)方銀菊合劑小劑量組4組，每組10只。各組大鼠分別用乙醚麻醉，仰臥固定于鼠板。取一根直徑為4mm的玻璃管；將一個小棉球置于其一端，使之與管口平齊；將玻璃管的棉球端浸在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為900g/L的 苯酚溶液中，使藥液浸透棉球；將其置于大鼠一側(cè)頰黏膜上灼燒約60s。移去玻璃管即可見該區(qū)域有直徑4～6mm的白色損害；次日肉眼可見大鼠口唇邊潮濕，流口水，頰黏膜處紅腫，即造模成功。復(fù)方銀菊合劑大劑量組：給復(fù)方銀菊合劑12.5μL/g體質(zhì)量(相當(dāng)于臨床人日用量的15倍)，平均分5次滴入大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔2h。復(fù)方銀菊合劑小劑量組：給復(fù)方銀菊合劑4.2μL/g體質(zhì)量(相當(dāng)于臨床人日用量的5倍)，平均分2次滴入大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔4h。冰硼含片組給冰硼含片粉末1.5mg/g(相當(dāng)于臨床人日用量的15倍)，平均分5次置于大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔2h。模型對照組不給藥。每次用藥后禁食、禁水30min，連續(xù)給藥6d。

每日給藥前觀察大鼠口腔潰瘍愈合情況，記錄給藥6d后口腔潰瘍面直徑的大小(以mm表示)及大鼠口腔潰瘍愈合的時間和數(shù)量。愈合標(biāo)準(zhǔn)：潰瘍直徑<1mm為愈合，潰瘍直徑≥1mm為未愈合。

結(jié)果見表1、表2。與模型對照組對比，連續(xù)給藥6d，復(fù)方銀菊合劑大、小劑量組大鼠口腔潰瘍面直徑減小，口腔潰瘍愈合大鼠數(shù)量增加，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。結(jié)果表明：復(fù)方銀菊合劑能明顯促進(jìn)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍的愈合。

組 別動物數(shù)/只潰瘍面直徑/mm模型對照組101.88±0.69冰硼含片組100.85±0.35**復(fù)方銀菊合劑大劑量組100.72±0.22**復(fù)方銀菊合劑小劑量組101.16±0.63*

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01。

表2 給藥期間各組大鼠口腔潰瘍愈合數(shù)量對比

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 體外抑菌試驗(yàn)

觀察復(fù)方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌的體外抑菌作用。采用平皿打孔灌藥法，按照參考文獻(xiàn)[3,4]方法進(jìn)行。

取滅菌試管7支，編號后排列于試管架上，按照無菌操作法，第1管加入100 0 g/L復(fù)方銀菊合劑3 mL，第2～4管各加無 菌生理鹽水3 mL，然后吸1 000 g/L 復(fù)方銀菊合劑3 mL加到第2管混勻后，吸出3 mL加到第3管混勻，第3管吸出3 mL加到第4管，混勻。第5管加2 mg/mL的諾氟沙星片水溶液，第6管加1 mg/mL的酮康唑片水溶液，第 7管加無菌生理鹽水。取標(biāo)號滅菌平皿加熔化后冷卻到40 ℃的牛肉膏湯瓊脂培養(yǎng)基(白色念珠菌用沙氏培養(yǎng)基)20 mL搖勻，待凝固后，用直徑6 mm的無菌打孔器在培養(yǎng)基上均勻打孔(3～4孔/皿)，各孔分別加入以上配好的不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的藥液和生理鹽水(0.2 mL/孔)，再將培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌分別均勻接種各洞口四周，37 ℃孵育24 h，觀察并測出抑菌圈直徑。

結(jié)果見表3。復(fù)方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用,且作用隨劑量增加而增強(qiáng)。結(jié)果表明：復(fù)方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用。

表3 復(fù)方銀菊合劑對體外抑菌圈直徑的影響 mm

2.4 大鼠口腔黏膜刺激性實(shí)驗(yàn)

觀察復(fù)方銀菊合劑多次給藥對大鼠口腔黏膜的刺激性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)按照參考文獻(xiàn)[2,5,6]方法進(jìn)行。將20只大鼠隨機(jī)分為復(fù)方銀菊合劑組和正常對照組2組，每組10只。復(fù)方銀菊合劑組給復(fù)方銀菊合劑12.5μL/g 體質(zhì)量(相當(dāng)于臨床人日用量的15倍)，在4 h內(nèi)平均分5次滴入大鼠兩側(cè)頰黏膜處。正常對照組不做任何處理。給藥24 h后，觀察記錄給藥部位充血和水腫情況，并進(jìn)行評分；觀察動物有無全身不良反應(yīng)。每日給藥并觀察，共7 d；停藥后繼續(xù)觀察7 d。黏膜充血、水腫評分標(biāo)準(zhǔn)見表4、表5。

結(jié)果見表6。給藥后24 h、給藥7 d期間及停藥后7 d，復(fù)方銀菊合劑組鼠口腔黏膜均未出現(xiàn)充血和水腫癥狀，刺激反應(yīng)平均分值為0，未見全身不良反應(yīng)，與正常對照組對比，無異常。結(jié)果表明：復(fù)方銀菊合劑12.5 μL/g體質(zhì)量連續(xù)給藥7 d，對大鼠口腔黏膜無刺激性反應(yīng)。

表4 黏膜刺激性反應(yīng)及評分標(biāo)準(zhǔn)

表5 黏膜刺激強(qiáng)度評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

表6 各組多次給藥后口腔黏膜刺激反應(yīng)平均分值

n=10

3 討 論

復(fù)方銀菊合劑是在課題組反復(fù)臨床實(shí)踐的基礎(chǔ)上，對白血病化療后口腔潰瘍病因病機(jī)進(jìn)行深入探討與研究，針對病程中虛火與毒火兩大關(guān)鍵病理因素，以清熱解毒、滋陰降火、祛腐生肌為治療原則研制而成。先期的臨床研究[7]表明：復(fù)方銀菊合劑含漱對白血病化療后口腔潰瘍有很好的防治作用。本研究結(jié)果顯示：復(fù)方銀菊合劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍有明顯治療作用，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用，多次給藥對大鼠口腔黏膜無刺激性反應(yīng)。此證實(shí)了復(fù)方銀菊合劑含漱對白血病化療后口腔潰瘍的有效性與安全性，也為進(jìn)一步擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍提供了藥理學(xué)依據(jù)。

[1]朱萱萱,徐軒,施榮山.愈潰寧治療大鼠口腔潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床,2001，17(5):35-36.

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)01-0070-03

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.32

段赟(1978—)，男(漢族)，甘肅寧縣人，副主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合血液病臨床研究工作。

馬駿，教授，碩士研究生導(dǎo)師，binbinduan@126.com

慶陽市科技局2008年科技計(jì)劃項(xiàng)目(0802NKCM058)

2016-05-05；

2016-11-08