董海秋，董梅，任法新

冠心病研究

血小板—中性粒細(xì)胞聚集體在急性ST段抬高型心肌梗死患者中表達(dá)的研究

董海秋，董梅，任法新

目的：本文探討血小板—中性粒細(xì)胞聚集體（PNA） 在急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者中的表達(dá)。

心肌梗死；血小板聚集；血小板—中性粒細(xì)胞聚集體

(Chinese Circulation Journal, 2017, 32:145.)

急性心肌梗死的主要發(fā)病機(jī)制是由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂繼發(fā)血栓形成，突然阻塞冠狀動(dòng)脈管腔，導(dǎo)致心肌缺血壞死引起。在這個(gè)過(guò)程中，活化的血小板和白細(xì)胞發(fā)揮了重要作用。大量白細(xì)胞和血小板在急性缺血心肌組織中活化[1]，活化后的血小板ɑ顆粒表達(dá)釋放大量的P-選擇素，一方面促進(jìn)炎癥性血小板介質(zhì)在內(nèi)皮細(xì)胞表面沉積，增強(qiáng)對(duì)單核細(xì)胞的趨化作用[2]；另一方面與白細(xì)胞P-選擇素糖蛋白配基-1（PSGL-1）結(jié)合形成血小板—白細(xì)胞聚集體（PLA）。PLA形成后，通過(guò)血小板的橋接作用，促進(jìn)白細(xì)胞在局部損傷內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、滾動(dòng)和滲出，進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞下，促進(jìn)附壁血栓的形成[3]。因此，PLA是反映體內(nèi)血栓負(fù)荷及炎癥反應(yīng)的敏感指標(biāo)[4]。新近有研究發(fā)現(xiàn)，高水平PLA與急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，是預(yù)測(cè)急性冠狀動(dòng)脈綜合征的重要指標(biāo)之一[5]。也有研究表明，高水平的PLA是急性非ST段抬高型心肌梗死預(yù)后不良的標(biāo)志物[6]。本研究主要探討血小板—中性粒細(xì)胞聚集體（PNA）在STEMI患者中的表達(dá)。

1 資料與方法

研究對(duì)象：選擇2015-10至2016-04在我院心內(nèi)科住院的急性ST段抬高型心肌枉死（STEMI）患者40例為STEMI組，平均年齡（70.0±5.4）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：持續(xù)性胸痛（>30 min），且對(duì)硝酸甘油反應(yīng)差；12導(dǎo)聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)心電圖示兩個(gè)或兩個(gè)以上相鄰導(dǎo)聯(lián)ST段抬高≥0.2 mV；肌酸激酶、肌酸激酶同工酶或相對(duì)指數(shù)≥正常值上限2倍；發(fā)病12 h以內(nèi)。另選擇同期體檢中心健康查體者30例作為對(duì)照組，均不伴冠心病，平均年齡（68.4±1.6）歲。所有入院患者無(wú)陳舊性心肌梗死、風(fēng)濕性心臟病、原發(fā)性心肌病、甲狀腺疾病、結(jié)核病、惡性腫瘤、急性感染、自身免疫病等疾病。

PLA測(cè)定方法：納入患者均在抗血栓治療前，肘靜脈采血3 ml并放入含檸檬酸鈉抗凝血試管中，采血時(shí)不能壓迫壓脈帶，并棄去開(kāi)始2 ml，血標(biāo)本2 h內(nèi)應(yīng)用流式細(xì)胞儀（BD FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀）分析檢測(cè)。根據(jù)CD45熒光、CD45-FS(直向散射光)及CD45-SS(側(cè)向散射光)設(shè)門，將外周血白細(xì)胞分為中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞三群細(xì)胞。每群細(xì)胞分為CD41a陽(yáng)性（與血小板結(jié)合）和CD41a陰性（無(wú)血小板結(jié)合）2組亞群，計(jì)算相應(yīng)細(xì)胞群中血小板—白細(xì)胞數(shù)量百分比，分別記錄PNA、血小板—單核細(xì)胞聚集體（PMA）、血小板—淋巴細(xì)胞聚集體（PlyA）值。通過(guò)流式細(xì)胞儀分析血

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理: 采用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。清中PNA、PMA、PlyA濃度。心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)采用心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)卡，肌酸激酶同工酶測(cè)定采用酶法。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料

兩組患者一般臨床資料比較（表1）。兩組在年齡、性別、冠心病危險(xiǎn)因素（如體重指數(shù)、吸煙、高血壓、糖尿病及高血脂）等方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）。STEMI組PNA明顯高于對(duì)照組（P<0.05），STEMI組肌酸激酶同工酶與肌鈣蛋白I水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組患者一般臨床資料比較（）

表1 兩組患者一般臨床資料比較（）

注：STEMI：急性ST段抬高型心肌梗死；PNA：血小板—中性粒細(xì)胞聚集體；PMA：血小板—單核細(xì)胞聚集體； PlyA：血小板—淋巴細(xì)胞聚集體

項(xiàng)目 對(duì)照組 (n=30) STEMI組 (n=40) P值年齡 (歲) 68.4±1.6 70.0±5.4 0.218男性[例 (%)] 18 (60.0) 26 (65.0) 0.362體重指數(shù) (kg/m2) 24.0±1.9 24.8±1.8 0.972吸煙[例 (%)] 15 (50.0) 23 (57.5) 0.459高血壓[例 (%)] 19 (63.3) 23 (71.9) 0.472糖尿病[例 (%)] 10 (33.3) 15 (37.3) 0.851空腹血糖 (mmol/L) 5.1±2.0 5.2±1.5 0.751尿酸 (μmol/L) 326.3±15.6 324.2±15.7 0.918總膽固醇 (mmol/L) 5.5±1.1 5.7±1.2 0.428高密度脂蛋白膽固醇 (mmol/L) 1.1±0.1 1.0±0.4 0.458低密度脂蛋白膽固醇 (mmol/L) 3.4±0.7 3.3±0.7 0.644甘油三酯 (mmol/L) 1.5±0.2 1.5±0.2 0.733血小板計(jì)數(shù) (×109/L) 254±47 233±55 0.136白細(xì)胞計(jì)數(shù) (×109/L) 7.4±3.2 12.1±2.5 0.089 PNA (%) 20.1±18.9 30.6±9.3 <0.05 PMA (%) 77.3±6.2 81.1±11.9 0.312 PlyA (%) 7.7±4.3 8.2±3.7 0.254肌酸激酶同工酶峰值 (ng/ml) 3.6±14.2 187.0±129.0 <0.01肌鈣蛋白I (μg/L) 0.3±0.1 15.9±2.4 <0.01

2.2 外周血各型白細(xì)胞的流式細(xì)胞分析圖譜比較

流式細(xì)胞分析圖譜顯示：與對(duì)照組相比，入院時(shí)STEMI組PlyA水平（P=0.245）和PMA水平（P=0.312）升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而PNA水平（P<0.05)明顯高于對(duì)照組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 相關(guān)性分析

PLA水平與肌酸激酶同工酶和肌鈣蛋白I相關(guān)性的比較（圖1、圖2）：分析表明，PLA水平與肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌鈣蛋白I（r=0.4365，P<0.01） 呈正相關(guān)。

圖1 血小板—白細(xì)胞聚集體水平與肌酸激酶同工酶的相關(guān)性

圖2 血小板—白細(xì)胞聚集體水平與肌鈣蛋白I的相關(guān)性

3 討論

相關(guān)報(bào)道表明，臨床上約有25%的STEMI患者早期發(fā)病癥狀不典型[7]。盡早對(duì)該類患者進(jìn)行診斷并確定治療方法對(duì)改善不典型癥狀STEMI患者預(yù)后具有重要的意義。本研究表明，在STEMI患者中PNA水平明顯增高，提示高水平的PNA可以作為急性心肌梗死的新指標(biāo)，對(duì)診斷STEMI具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。

PLA從廣義上講包括PNA、PMA和PlyA。在腦梗死和糖尿病患者中，PLA水平明顯升高，而且在一定程度上能夠反映斑塊穩(wěn)定性[8,9]。有報(bào)道已證實(shí)與非急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者相比，急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者中PNA、PMA、PlyA水平明顯升高，具有顯著差異[10-12]。另外，對(duì)于非STEMI患者，高水平的PLA提示患者臨床預(yù)后不佳[6,13]。最近研究表明，在STEMI患者中，增加的白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)提示臨床預(yù)后不佳[14]。其原因可能是中性粒細(xì)胞在心肌缺血—再灌注過(guò)程中分泌多種激素（如血栓素-B2、白三烯-B4），不僅導(dǎo)致血管收縮，同時(shí)產(chǎn)生PNA[15]?；罨腜NA誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)的釋放[16,17]，而中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)通過(guò)調(diào)節(jié)血栓形成過(guò)程中的中介產(chǎn)物，參與血栓的形成，導(dǎo)致微血管的堵塞[18,19]。

本研究結(jié)果證實(shí)在STEMI患者中PNA、PMA、PlyA水平明顯升高，這與既往研究結(jié)果一致。在STEMI患者中大量血小板和白細(xì)胞被激活，PLA水平顯著升高，且PLA水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[20,21]。在急性心肌梗死患者中，PLA水平升高是炎癥和血栓機(jī)制相互作用的結(jié)果，炎癥可導(dǎo)致局部血栓形成，而血栓形成又可加劇炎癥反應(yīng)，形成惡性循環(huán)。本研究從炎癥—血栓機(jī)制角度探討PLA與急性心肌梗死的關(guān)系，證實(shí)PLA對(duì)預(yù)測(cè)STEMI的發(fā)生具有一定價(jià)值。更重要的是，本研究發(fā)現(xiàn)PLA水平與肌酸激酶同工酶和肌鈣蛋白I呈正相關(guān)，這可能與PNA促進(jìn)梗死區(qū)域處炎癥反應(yīng)有關(guān)。

總之，本研究表明，在STEMI患者中，PLA包括PNA、PMA、PlyA水平均較對(duì)照組升高，尤以PNA更顯著，提示高水平的PLA尤其是PNA可以作為急性心肌梗死的一個(gè)新指標(biāo)，但有關(guān)其是否可作為預(yù)測(cè)急性心肌梗死發(fā)生的指標(biāo)，仍需進(jìn)一步研究。

[1] Denkta AE, Anderson HV, McCarthy J, et al. Total ischemic time: the correct focus of attention for optimal ST-segment elevation myocardial infarction care. JACC Cardiovasc Interv, 2011, 4: 599-604.

[2] 蔡瑋婷, 彭瑜, 張鉦. 血小板及其趨化因子在動(dòng)脈粥樣硬化中作用的研究進(jìn)展. 中國(guó)循環(huán)雜志, 2016, 8: 816-818.

[3] 楊文波, 黃廣勇. 中性粒細(xì)胞與心肌梗死灌注關(guān)系的研究進(jìn)展. 心血管病學(xué)進(jìn)展, 2013, 6: 839-843.

[4] Sch?chinger V, Britten MB, Zeiher AM. Prognostic impact of coronary vasodilator dysfunction on adverse long-term outcome of coronary heart disease. Circulation, 2000, 101: 1899-1906.

[5] Yang DH, Tan N, He PC, et al. Increased platelet-leukocyte aggregates in patients with acute coronary syndrome. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi, 2012, 40: 482-486.

[6] 李曉明, 王舒瑩, 劉震岳, 等. 基線血小板-白細(xì)胞聚集體水平對(duì)NSTE-ACS患者近期預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 6: 38-42.

[7] 孫慎杰, 吳小鵬, 宋恒良, 等. 血漿和肽素對(duì)ST段抬高型急性心肌梗死患者住院期間發(fā)生主要不良心臟事件的評(píng)估價(jià)值. 中國(guó)循環(huán)雜志, 2015, 1: 13-16.

[8] 胡小紅, 陳衍貴, 陳銀娟, 等. 急性腦梗死患者血小板白細(xì)胞聚集體與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系. 中華老年心腦血管病雜志, 2016, 3: 291-294.

[9] 賈安奎, 劉彥軒, 仲華, 等. 2型糖尿病患者血小板-白細(xì)胞聚集體與微血管病變部位及區(qū)域數(shù)量的關(guān)系. 中國(guó)糖尿病雜志, 2014, 4: 347-349.

[10] Brambilla M, Camera M, Colnago D, et al. Tissue factor in patients with acute coronary syndromes: expression in platelets, leukocytes, and platelet-leukocyte aggregates. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2008, 28: 947-953.

[11] Lu HY, Chen D, Gu J, et al. Tissue factor expression of platelets and leukocytes in patients with acute coronary syndromes. Zhongguo Shi Yan Xue Za Zhi, 2013, 21: 678-683.

[12] Di Serafino L, Sarma J, Dierickx K, et al. Monocyte- platelets aggregates as cellular biomarker of endothelium-dependent coronary vasomotor dysfunction in patients with coronary artery disease. J Cardiovasc Transl Res, 2014, 7: 1-8.

[13] Cerletti C, Tamburrelli C, Lzzi B, et al. Platelet-leukocyte interaction in thrombosis. Thromb Res, 2012, 129: 263-266.

[14] Yalcinkaya E, Yuksel UC, Celik M, et al. Relationship between neutrophil-to-lymphocyte ratio and electrocardiographic ischemia grade in STEMI. Arq Bras Cardio, 2015, 104: 112-119.

[15] Gazi E, Bayram B, Gazi S, et al. Prognostic value of the neutrophillymphocyte ratio in patients with ST-elevated acute myocardial infarction. Clin Appl Thromb Hemost, 2015, 21: 155-159.

[16] Caudrillier A, Kessenbrock K, Gilliss BM, et al. Platelets induce neutrophil extracellular traps in transfusion-related acute lung injury. J Clin Invest, 2012, 122: 2661-2671.

[17] Clark SR, Ma AC, Tavener SA, et al. Platelet TLR4 activates neutrophil extracellular traps to ensnare bacteria in septic blood. Nat Med, 2007, 13: 463-469.

[18] Lee GK, Lee LC, Chong E, et al. The long-term predictive value of the neutrophil-to-lymphocyte ratio in Type 2 diabetic patients presenting with acute myocardial infarction. Qjm, 2012, 105: 1075-1082.

[19] Massberg S, Grahl L, von Bruehl ML, et al. Reciprocal coupling of coagulation and innate immunity via neutrophil serine proteases. Nat Med, 2010, 16: 887-896.

[20] Botto N, Sbrana S, Trianni G, et al. An increased platelet-leukocytes interaction at the culprit site of coronary artery occlusion in acute myocardial infarction: a pathogenic role for “no-reflow” phenomenon?. Int J Cardiol, 2007, 117: 123-130.

[21] Palmerini T, Brener SJ, Mehran R, et al. Leukocyte count is a modulating factor for the mortality benefit of bivalirudin in ST-segment-elevation acute myocardial infarction: the HORIZONS-AMI trial. Circ Cardiovasc Interv, 2013, 6: 518-526.

Expression of Platelet-neutrophil Aggregates in Patients With ST-segment Elevation Myocardial Infarction

DONG Hai-qiu, DONG Mei, REN Fa-xin.
Department of Cardiology,Yantai Yuhuangding Hospital Affiliated to Qingdao University Medical College,Yantai (264000), Shandong, China

REN Fa-xin, Email:drren@163.com

Objective: This work studied platelet-neutrophil aggregates (PNA) expression in patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI).Methods: Our research included in 2 groups: STEMI group, n=40 patients admitted in our hospital and Control group, n=30 normal subjects. Blood levels of PNA, platelet-monocyte aggregates (PMA) and platelet-lymphocyte aggregates (PlyA) were measured by flow cytometry at admission and the results were compared between 2 groups.Results: Compared with Control group, STEMI group had similar blood levels of PlyA and PMA, P=0.245 and P=0.312; while increased blood level of PNA, P<0.05. Correlation analysis showed that platelet-leukocyte aggregates (PLA) level was positively related to CK-MB (r=0.4992, P<0.01) and cTnI (r=0.4365, P<0.01).Conclusion: Blood level of PLA, especially PNA was significantly higher in STEMI patients which suggested that increased PNA might be sued as a new index for AMI diagnosis in clinical practice.

Myocardial infarction; Platelet aggregation; Platelet-neutrophil aggregates

2016-06-08）

（編輯：漆利萍）

山東省自然科學(xué)基金聯(lián)合專項(xiàng)（ZR2015HL004）；煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃（ 2015WS031）

264000 山東省煙臺(tái)市，青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院 心血管內(nèi)科

董海秋 碩士研究生 研究方向?yàn)?急性心肌梗死 Email:943118755@qq.com 通訊作者：任法新 Email:drren@163.com

R542.22

A

1000-3614（2017）02-0145-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.008

方法：共計(jì)納入于我院心內(nèi)科住院的STEMI患者40例為STEMI組，同期收集健康查體者30例為對(duì)照組。于入院即刻抽取靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)PNA、血小板—單核細(xì)胞聚集體（PMA）和血小板—淋巴細(xì)胞聚集體（PlyA）表達(dá)水平。比較兩組PNA、PMA和PlyA表達(dá)水平的差異。

結(jié)果：與對(duì)照組相比，STEMI組PlyA（P=0.245）和PMA（P=0.312）水平升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。STEMI組PNA水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析表明，血小板-白細(xì)胞聚集體（PLA） 水平與肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌鈣蛋白I（r=0.4365，P<0.01）呈正相關(guān)。

結(jié)論：本研究表明，在STEMI患者中PLA尤其是PNA水平明顯增高，提示高水平的PNA可以作為急性心肌梗死的一個(gè)新指標(biāo)。