周燕燕+韓永超+尹桂麗

摘 要：為了更好的了解和研究中藥藥品葛根的成分及含量，為葛根入藥時提供更精準(zhǔn)的藥理依據(jù)。本文對葛根中的黃豆苷元進(jìn)行了分析探究。本文主要是采用紫外分光光度法對黃豆苷元固體脂質(zhì)納米粒中黃豆苷元的含量進(jìn)行考察，并對理化性質(zhì)進(jìn)行分析，為后續(xù)的黃豆苷元制劑研究提供參考。

關(guān)鍵詞：黃豆苷元；含量測定；理化性質(zhì)考察；分析

黃豆苷元屬于中藥的一種，是葛根的提取物，屬于異黃酮化合物。我國對于葛根中異黃酮化合物的提取方法主要有純現(xiàn)代中藥提取和中藥分離技術(shù)方法，這種提取物可以對高血壓和心腦血管類疾病進(jìn)行有效治療，服用后病情控制效果顯著，并且無副作用和不良反應(yīng)，也不會在體內(nèi)沉積，目前只有我國對于黃豆苷元有技術(shù)性的研究，此項目在國外沒有意向，而我國現(xiàn)在對于黃豆苷元的還處于口服藥品階段，但口服藥品需要一定的快速溶解性，這樣才可以讓藥物在胃中短時間內(nèi)吸收對病情起到作用，但黃豆苷元較為難溶于水，它在人體的吸收情況并不理想，如果遇見病人的腸胃功能較差，更會影響黃豆苷元的吸收，降低了其臨床的應(yīng)用作用。所以制藥方面考慮黃豆苷元制成固體脂質(zhì)納米粒，固體脂質(zhì)納米粒與普通的制劑相比較，具有更高的載藥量和包封率、毒性低和生物利用率較高等優(yōu)點。

1 黃豆苷元體外分析方法的建立

1.1 制備黃豆苷元SLN

在黃豆苷元SLN準(zhǔn)備過程中，首先要將單硬脂酸甘油酯進(jìn)行加熱，溫度要達(dá)到70℃使其溶化，再加入主體藥物黃豆苷元，充分?jǐn)嚢枳屗幬锞鶆虻姆稚⒅羻斡仓岣视王ブ?，而后加入同樣溫度的其中含有豆磷脂的水溶液，再進(jìn)一步進(jìn)行機械攪拌，一直到初乳的形成方可停止，然后將其在500W的功率下進(jìn)行超聲分散5min，從0.45μm的為微孔中過濾，在原有量的基礎(chǔ)上附加注射用水，將其體積補充到處方量，放置室內(nèi)進(jìn)行冷卻，溫度與室內(nèi)相同后就可以得到黃豆苷元SLN。

1.2 選擇波長檢測

提取黃豆苷元對照片適量，將其和無水乙醇一起溶解，進(jìn)行定量稀釋，成為適當(dāng)濃度的溶液，與此同時，用同樣的方法在進(jìn)行空白脂質(zhì)納米粒的乙醇溶液的配置，無水乙醇溶液為空白，按照分光光度法，將其放置紫外掃描，紫外掃描的波長范圍在200～400之間，在檢測中發(fā)現(xiàn)黃豆苷元對紫外掃描的最大吸收波長為249nm，因為同樣濃度的空白納米粒在這樣的波長范圍內(nèi)沒有被干擾的，所以就可以確定黃豆苷元的檢測波長為249nm。

1.3 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

取黃豆苷元對照品進(jìn)行精密量需10mg，將取出的黃豆苷元對照品放進(jìn)100mL的量瓶中，用無水乙醇進(jìn)行溶解并稀釋至刻度，精密量取上述5mL置50mL的量瓶中，在此加入無水乙醇進(jìn)行稀釋到刻度作為儲存液。對儲存液進(jìn)行精密量取，分別取出1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL置10mL量瓶中，之后用無水乙醇進(jìn)行定容，用分光光度法，在249nm的波長處測定其吸收度，線性回歸以吸收度A對濃度C方式進(jìn)行，得出的回歸方程為Y= 0. 1146X-0.018，R2=0.9995。得出結(jié)果表明在1.0～6.0μg/mL范圍黃豆苷元內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.4 精密度試驗

取黃豆苷元適量精密稱定，將其分為兩份，兩份分別使用無水乙醇制成1.0，3.0，6.0μg/mL濃度的溶液，使用0.45μm濾膜進(jìn)行過濾，對其分別在日內(nèi)和日間進(jìn)行重復(fù)測定，對其精密度進(jìn)行考察，結(jié)果表明其精密度考察結(jié)果符合方法學(xué)的要求。

1.5 回收率試驗

首先從黃豆苷元的對照品中取精密稱取10mg，放進(jìn)100mL的量瓶中，使用無水乙醇將其溶解，然后進(jìn)行稀釋到一定刻度。取溶解稀釋后的溶液5mL放至準(zhǔn)備好的空的50mL量瓶中，然后再使用無水乙醇對其進(jìn)行定容。制備好這種溶液后，留做對照品的儲備液。然后，再取空白SLN混懸液5mL，置3個25mL棕色容量瓶中，依次加入對照品儲備液2.5，7.5，15.0mL，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為1.0、3.0、6.0μg/mL的樣品溶液，分別測定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計算回收率。結(jié)果表明，該分析方法的回收率符合方法學(xué)要求。

1.6 樣品含量的測定

精密量取適量SLN混懸液3mL，置25mL量瓶中，加適量無水乙醇，超聲約5min，加無水乙醇稀釋至刻度。搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置25mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。以無水乙醇為空白，于249nm波長處測定吸收度A樣，另取已知濃度黃豆苷元對照品溶液同法測定吸收度A對，按照公式計算供試液濃度C樣：C樣=C對×A樣/A對。

2 黃豆苷元基本理化性質(zhì)研究

2.1 黃豆苷元在不同pH值磷酸鹽緩沖液中的溶解度：將過量黃豆苷元原料投入pH值為2.0，5.8，6.5，7.2，7.8的磷酸鹽緩沖液的錐形瓶中，渦旋15min，置空氣恒溫振蕩器中，37℃、120次/min恒溫振蕩12h，平衡48h后，在規(guī)定時間取樣，用0.45μm微孔濾膜保溫過濾后，測定溶液吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算藥物的濃度，結(jié)果黃豆苷元在不同pH值磷酸鹽緩沖液中的溶解度分別為1.643，2.064，2.567，5.179，6.876μg/mL。結(jié)果表明黃豆苷元的溶解度隨著pH值的升高而增加。

2.2 黃豆苷元在不同介質(zhì)中油水分布系數(shù)的測定：本文采用搖瓶法測定黃豆苷元的油/水分配系數(shù)。本實驗選擇正辛醇為油相，pH2.0，5.7，6.5，7.8的磷酸鹽緩沖液及蒸餾水為水相，在經(jīng)水飽和過的正辛醇溶液中定量加入黃豆苷元溶解后，0.45μm濾膜過濾，與經(jīng)正辛醇飽和的不同pH值水相各15mL裝入錐形瓶中，密塞，于渦旋振蕩器上劇烈振蕩30min后，放入37℃空氣恒溫振蕩器中，在120r/min下振蕩72h，靜置后兩相分層，分別吸取水相和油相，紫外分光光度法測定黃豆苷元在水相中的濃度（Cw），計算油相的濃度Co=（m總-Cw·Vw）/V，油相和水相中藥物濃度的比值即為油/水分配系數(shù)P=C油相/C水相=Co/Cw，每種介質(zhì)重復(fù)測定3次取平均值。

結(jié)果如下：水相為pH2.0，5.7，6.5，7.8的緩沖液及蒸餾水時，測得的油/水分配系數(shù)P分別為120.4，82.3，76.8，18.4和48.6，表明黃豆苷元油水分配系數(shù)隨pH值升高而降低。

3 討論

由本文上述分析可以得知，在對黃豆苷元的含量進(jìn)行測定和分析時，可以采用體外分析法進(jìn)行測定和分析，并且這樣的測定方法符合藥典相關(guān)規(guī)定和要求。在本研究中，對黃豆苷元的測定采取了紫外分光光度法的測定方法，并確定其檢測波長是249mm。本次測定試驗結(jié)果顯示，分析方法不但可行，且重現(xiàn)性非常好。除此之外，準(zhǔn)確度也十分高，因而可以將本體外分析法當(dāng)做黃豆苷元的測定方法推廣使用。希望本文的研究分析可以為藥學(xué)工作人員的工作提供一些借鑒和幫助。

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