陳 霞 何 倩

血漿miRNAs在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)不同疾病狀態(tài)中的表達(dá)特點(diǎn)

陳 霞 何 倩

目的 分析3種血漿miRNA在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)不同疾病狀態(tài)中的表達(dá)特點(diǎn)。方法 選取急性淋巴細(xì)胞白血病患兒40例，其中初診患兒12例，完全緩解患兒16例，復(fù)發(fā)患兒12例，同時(shí)收集我院經(jīng)健康體檢的兒童25例作為正常對照組。抽取所有兒童的空腹靜脈血，離心后取血漿，采取直接擴(kuò)增目的microRNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，qRT-PCR方法檢測血漿miR150、miR155、miR233的表達(dá)。結(jié)果 ALL組中血漿miR150、miR155、miR233的表達(dá)均與正常組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血漿miR150和miR233在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著低于緩解組和正常組(P<0.05)，血漿miR155在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著高于緩解組和正常組(P<0.05)。3種miRNA在初診組與復(fù)發(fā)組之間、緩解組與正常組之間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；初診組中3種血漿miRNA在不同年齡和性別之間表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；3種血漿miRNA的AUC(曲線下面積)和95%CI(95%可信區(qū)間)均有較好的滿意度，且3種血漿miRNA聯(lián)合檢測的精確度更高。結(jié)論 血漿miR150、miR155、miR233的表達(dá)在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的診斷、治療和復(fù)發(fā)監(jiān)測中有較高的應(yīng)用價(jià)值。

血漿miRNAs；兒童急性淋巴細(xì)胞白血??；不同疾病狀態(tài)

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:192～195)

兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是兒童白血病中最常見的類型，據(jù)國內(nèi)外報(bào)道其治愈率可達(dá)80%以上。但由于復(fù)發(fā)、密集的化療方案帶來的副作用，該疾病的死亡率仍較高[1]。miRNA是一種新型的非編碼的小分子RNA，研究表明，包括白血病在內(nèi)的多種癌癥的發(fā)生均與miRNA的表達(dá)紊亂密切相關(guān)[2]。microRNA已成為目前腫瘤研究的熱點(diǎn)，在很多疾病的診斷、治療和預(yù)后預(yù)測中起到標(biāo)志物的作用。然而目前的研究大多通過抽取患者骨髓或采集腫瘤組織的方式檢測miRNA，創(chuàng)傷較大。近年來的大量研究表明，血漿miRNA在疾病的診斷、治療和預(yù)后預(yù)測中可以發(fā)揮同樣的作用，且創(chuàng)傷小、操作方便[3]。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2011年3月至2015年3月期間我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒40例，其中初診患兒12例，完全緩解患兒16例，復(fù)發(fā)患兒12例，所有患兒均經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)確診，按照CCLG-08方案標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行治療。同時(shí)收集我院經(jīng)健康體檢的兒童25例作為正常對照組。急性淋巴細(xì)胞白血病組和正常組的年齡、性別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 檢測方法

抽取ALL患兒和正常組兒童的空腹靜脈血，放入EDTA試管中，室溫靜置30 min后4 ℃ 3 000轉(zhuǎn)/分離心10 min，吸取上清液(即血漿)至EP管，-80 ℃保存?zhèn)溆谩⑺醒獫{采取直接擴(kuò)增目的microRNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，qRT-PCR方法檢測血漿miR150、miR155、miR233的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過qRT-PCR結(jié)果計(jì)算3種血漿miRNA的相對表達(dá)量，使用SPSS 17.0軟件分析所有數(shù)據(jù)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血漿miR150、miR155、miR233在急性淋巴細(xì)胞白血病和正常組中的表達(dá)比較

對3種miRNA正常組和急性淋巴細(xì)胞白血病組中的表達(dá)比較發(fā)現(xiàn)，血漿miR150和miR233在ALL組中的表達(dá)顯著低于正常組(P<0.05)，血漿miR155在ALL組中的表達(dá)顯著高于正常組(P<0.05)，見表1。

表1 血漿miR150、miR155、miR233的表達(dá)

2.2 血漿miR150、miR155、miR233在急性淋巴細(xì)胞白血病不同疾病階段的表達(dá)比較

對3種miRNA在急性淋巴細(xì)胞白血病不同階段的表達(dá)比較發(fā)現(xiàn)，血漿miR150和miR233在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著低于緩解組和正常組(P<0.05)；血漿miR155在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著高于緩解組和正常組(P<0.05)；3種microRNA在初診組與復(fù)發(fā)組之間、緩解組與正常組之間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表2。

表2 血漿miR150、miR155、miR233在ALL不同疾病階段 的表達(dá)

*與緩解組相比，P<0.05；#與正常組相比，P<0.05。

2.3 初診組中3種血漿miRNA在不同年齡、性別之間的表達(dá)

比較初診組中不同年齡和性別之間血漿miR-150、miR-155、miR233的表達(dá)顯示,3種血漿miRNA在不同年齡和性別之間表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表3。

表3 初診組中3種血漿miRNA在不同年齡、性別之間的表達(dá)±s)

2.4 3種血漿miRNA診斷兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的效能

結(jié)果顯示，血漿miR150、miR155、miR233 的在診斷ALL時(shí)均有較高的敏感度和特異度，且相比于單獨(dú)檢測一種指標(biāo)，三者血漿指標(biāo)聯(lián)合檢測時(shí)的敏感度和特異度更高，診斷意義更大，見表4。

表4 3種血漿microRNA診斷ALL的效能

3 討論

有關(guān)發(fā)病機(jī)制的研究已成為白血病研究的重要內(nèi)容，近年的研究表明，miRNA在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)病過程中扮演著重要角色。以往的研究多集中在組織和細(xì)胞中的miRNA，最新研究證實(shí)在血漿中同樣存在miRNA，并且能夠在白血病患者血漿中檢測到miRNA的特異表達(dá)譜，在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的早期診斷、預(yù)后評估中發(fā)揮重要作用[4]。

miR150參與免疫和造血系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，miR150通過調(diào)控靶基因引起下游基因的表達(dá)發(fā)生變化，從而參與各系統(tǒng)的發(fā)生，其表達(dá)紊亂常導(dǎo)致免疫系統(tǒng)、造血系統(tǒng)等系統(tǒng)惡性疾病的發(fā)生[5]。但是miR150在不同種類的腫瘤中的作用不同，在胃癌、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨肉瘤等腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，而在慢性粒細(xì)胞性白血病、NK/T細(xì)胞淋巴瘤等腫瘤中呈現(xiàn)低表達(dá)。研究表明，miR150在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)降低[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn)初診組和復(fù)發(fā)組miR150的表達(dá)顯著低于緩解組和正常組，而初診組與復(fù)發(fā)組之間、緩解組與正常組之間比較均無顯著差異，說明miR150在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生過程中通過降低表達(dá)水平而可發(fā)揮抑癌作用，且miR150的表達(dá)變化可反映患兒不同的疾病狀態(tài)。

miR155是miRNA家族中最早發(fā)現(xiàn)的致癌因子之一，與造血、免疫等惡性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。與miR150不同的是，miR155在惡性疾病的發(fā)生中均呈現(xiàn)高表達(dá)而發(fā)揮癌基因的作用[8]。Faraoni等的研究表明，miR155在兒童急性髓性血病患者中的表達(dá)上調(diào)，可用于評估兒童急性髓性血病患者的預(yù)后[9]。本研究結(jié)果也顯示，兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患兒的血漿miR155在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著高于緩解組和正常組，說明miR155在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生中發(fā)揮癌基因的作用。

正常情況下，miR233在骨髓中表達(dá)較高，并在造血系統(tǒng)的分化過程中起重要作用，其表達(dá)異常則會(huì)導(dǎo)致血液系統(tǒng)惡性疾病的發(fā)生。在對骨髓中miR233的檢測發(fā)現(xiàn)，miR233在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患兒緩解期的表達(dá)升高，在初診期和復(fù)發(fā)期患兒中表達(dá)下降，說明miR233的表達(dá)下降與兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的生存有相關(guān)性[10]。本研究通過監(jiān)測兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血漿miR233水平發(fā)現(xiàn)，其在初診組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)水平與其在骨髓中的表達(dá)呈現(xiàn)相同的趨勢，但血漿miR233在緩解組的表達(dá)與正常組相比并未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與我們的病例樣本不足有關(guān)。

同時(shí)，我們對3種血漿miRNA對兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的診斷價(jià)值進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)血漿miR150、miR155、miR233對急性白血病的診斷均有較高的價(jià)值，但是由于每種血漿miRNA均可異常于表達(dá)多種疾病中，僅檢測單個(gè)miRNA時(shí)往往會(huì)造成在疾病診斷時(shí)特異性不高的情況，因此，為了提高疾病診斷的精確度，需要多種miRNA聯(lián)合檢測。本研究的結(jié)果也證實(shí)，將miR150、miR155、miR233 3種血漿miRNA聯(lián)合檢測時(shí)的特異度和敏感度更高。

綜上所述，血漿miR150、miR155、miR233在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的不同階段呈現(xiàn)不同的表達(dá)特點(diǎn)，可作為監(jiān)測該疾病進(jìn)展的有效指標(biāo)，且3種血漿miRNA聯(lián)合檢測的精確度更高，對該疾病的診斷、治療和復(fù)發(fā)的監(jiān)測有較好的應(yīng)用價(jià)值。

[1] 陳曉曦,吳劍蓉,萬朝敏,等.32例兒童復(fù)發(fā)急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床特點(diǎn)及隨訪分析〔J〕.華西醫(yī)學(xué),2015,30(5):885-889.

[2] Raghuwanshi S,Karnati HK,Sarvothaman S,et al.MicroRNAs:Key players in hematopoiesis〔J〕.Adv Exp Med Biol,2015,887:171-211.

[3] Schotte D,De Menezes RX,Akbari Moqadam F,et al.MicroRNA characterize genetic diversity and drug resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia〔J〕.Haematologica,2011,96(5):703-711.

[4] 黃鵬麗,許麗婷,江 倩,等.血漿miRNA在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中表達(dá)特點(diǎn)〔J〕.中國小兒血液與腫瘤雜志,2015,20(2):69-73.

[5] 姚 樂.microRNA在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及意義〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2016,31(1):165-168.

[6] Cuk K,Zucknick M,Madhavan D,et al.Plasma microRNA panel for minimally invasive detection of breast cancer〔J〕.PLoS One,2013,8(10):e76729.

[7] Sita-Lumsden A,Dart DA,Waxman J,et al.Circulating microRNAs as potential new biomarkers for prostate cancer〔J〕.Br J Cancer,2013,108(10):1925-1930.

[8] 徐麗華,楊乃超,顏 青,等.microRNA-155在小兒急性髓性白血病中的差異表達(dá)及分析〔J〕.標(biāo)記免疫分析與臨床,2014,21(5):571-575.

[9] Faraoni I,Laterza S,Ardiri D,et al.MiR-424 and miR-155 deregulated expression in cytogenetically normal acute myeloid leukaemia:correlation with NPMl and FLT3 mutation status〔J〕.J Hematol Oncol,2012,5:26.

[10] Han BW,Feng DD,Li ZG,et al.A set of miRNAs that involve in the pathways of drug resistance and leukemic stem-cell differentiation is associated with the risk of relapse and glucocorticoid response in childhood ALL〔J〕.Hum Mol Genet,2011,20(24):4903-4915.

(編輯：甘 艷)

Expression of Plasma miRNAs in Children with Acute Lymphoblastic Leukemia in Different Disease States

CHENXia,HEQian.

XiangyangCentralHospital,Xiangyang,441021

Objective To analyze the expression of 3 plasma miRNA in children with acute lymphoblastic leukemia in different disease states.Methods 40 children with acute lymphoblastic leukemia were collected,including 12 cases of newly diagnosed children,16 cases of complete remission,12 cases of relapse.At the same time,25 healthy children received physical examination was the control group.The fasting venous blood was extracted from all the children.After centrifugation,the plasma was taken directly to amplify the target microRNA,and the reverse transcription into cDNA.QRT-PCR method was adopted to detect the expression of miR150,miR155 and miR233 in plasma.Results The expression of miR150,miR155 and miR233 in all group were significantly different from that of the control group.The expression of plasma miR150 and miR233 in the newly diagnosed and recurrent group were significantly lower than that in the remission group and the control group(P<0.05).The expression of plasma miR155 in the initial and recurrent group was significantly higher than that in the remission group and the normal group(P<0.05).There was no significant difference in the 3 microRNA between the initial diagnosis group and the recurrence group,the remission group and the control group(P>0.05);Three kinds of plasma miRNA in newly diagnosed group between different age and gender expression showed no significant difference(P>0.05);Three plasma AUC microRNA(area under the curve) and 95%CI(95% confidence interval) had better satisfaction.And the accuracy of the combined detection of plasma miRNA in 3 kinds of plasma is higher.Conclusion The expression of plasma miR150,miR155 and miR233 has a good application value in the diagnosis,treatment and recurrence monitoring of children with acute lymphoblastic leukemia.

Plasma miRNAs;Acute lymphoblastic leukemia;Different disease states

441021 湖北省襄陽市中心醫(yī)院

何 倩

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.006

R733.71

A

1001-5930(2017)02-0192-04

2016-03-10

2016-07-07)