李健雄，張艷妮，施 勇，徐 剛，龔 甜，熊 英

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

江西省2011年-2015年呼吸道感染兒童人博卡病毒感染分析

李健雄，張艷妮，施 勇，徐 剛，龔 甜，熊 英

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

目的了解近幾年人博卡病毒在江西省呼吸道感染兒童中的流行情況。方法采集2011年8月至2015年12月1508例江西省呼吸道感染兒童的咽拭子或支氣管灌洗液樣本，利用RT-PCR對(duì)博卡病毒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1508例患兒呼吸道標(biāo)本中86例患兒被檢測(cè)出博卡病毒陽(yáng)性，陽(yáng)性率為5.70%。小于等于1歲的兒童的陽(yáng)性率最高，且男性患兒的陽(yáng)性率大于女性患兒。主要流行時(shí)間為5-8月。HBoV感染與其他呼吸道病毒混合感染率達(dá)到了60.47%。結(jié)論HBoV是引起江西省兒童呼吸道感染的主要病原體之一，多發(fā)于低齡，男性患兒，以夏季高發(fā)。且與其他呼吸道病毒有較高的混合感染率。

人博卡病毒；呼吸道感染；兒童

兒童呼吸道感染已成為當(dāng)前兒科發(fā)病率最高的一種疾病，而病毒是小兒呼吸道感染的重要原因。引起呼吸道感染的病毒種類多，變異快，迄今為止，仍有很多呼吸道感染的病因不明。2005年，瑞典科學(xué)家Allandar T[1]等采用隨機(jī)PCR擴(kuò)增法，大規(guī)模測(cè)序和生物信息學(xué)方法，篩查兒童呼吸道感染標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)了一種新的細(xì)小病毒，該種病毒被命名為人博卡病毒（HBoV）。當(dāng)前，人博卡病毒已成為常見(jiàn)的導(dǎo)致小兒呼吸道感染的病毒之一，是一種不能忽視的呼吸道病毒。本研究對(duì)江西省2011年-2015年采集的兒童標(biāo)本進(jìn)行HBoV檢測(cè)，以了解HBoV在江西省的流行狀況。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源標(biāo)本采集自江西省兒童醫(yī)院呼吸內(nèi)科，從2011年8月至2015年12月，采集不同發(fā)病時(shí)間的發(fā)熱伴呼吸道感染癥狀的15歲以下的兒童咽拭子或支氣管灌洗液。每份標(biāo)本都登記有患兒的基本資料及臨床信息。

1.2 主要儀器與試劑美國(guó)Bio-Rad PCR儀，法國(guó)VILBER LOURMAT凝膠成像系統(tǒng)、Qiagen DNA mini kit提取試劑盒，Qiagen PCR試劑盒，Promaga GoTaq Master Mix試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 病毒核酸提取標(biāo)本震蕩離心處理后，取200μl標(biāo)本，采用提取病毒總核酸，提取方法參考試劑盒說(shuō)明書。

1.3.2 博卡病毒PCR檢測(cè)利用Promaga GoTaqMaster Mix試劑盒對(duì)提取的核酸進(jìn)行人博卡病毒RT－PCR檢測(cè)，引物參考文獻(xiàn)[2]。

上游：GACCTCTGTAAGTACTATTAC

下游：CTCTGTGTTGACTGAATACAG

反應(yīng)體系為2×PCR Master Mix 12.5μl，上下游引物各0.5μl，ddH2O 6.5μl，RNA模板5μl。反應(yīng)條件為94℃3min；95℃30s、55℃30s、72℃45s共35個(gè)循環(huán)；72℃10min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，判斷是否為人博卡病毒陽(yáng)性。

1.3.3 其他呼吸道病毒檢測(cè)標(biāo)本在進(jìn)行人博卡病毒檢測(cè)的同時(shí)，采用RT－PCR方法[2]對(duì)流感病毒（A型，B型），呼吸道合胞病毒（A型，B型），副流感病毒（1型，2型，3型，4型），鼻病毒，偏肺病毒，冠狀病毒進(jìn)行檢測(cè)，采用PCR方法對(duì)腺病毒進(jìn)行檢測(cè)。判斷標(biāo)本是否存在混合感染。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 18.0軟件對(duì)病人信息、臨床信息以及檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗(yàn)并分析結(jié)果P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBoV檢測(cè)結(jié)果本研究在2011年8月至2015年12月期間采集到1508例患兒呼吸道標(biāo)本，共有86例患兒被檢測(cè)出陽(yáng)性，陽(yáng)性率為5.70%。

2.2 不同年齡兒童HBoV檢測(cè)結(jié)果不同年齡兒童HBoV檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。經(jīng)卡方檢驗(yàn)P=0.028，不同年齡間兒童HBoV陽(yáng)性率存在顯著差異，其中以小于等于1歲的兒童陽(yáng)性率最高。

表1 不同年齡兒童HBoV檢測(cè)情況

2.3 不同性別兒童HBoV檢測(cè)結(jié)果本研究對(duì)1014例男性患兒，494例女性患兒樣本進(jìn)行了檢測(cè)。其中男性患兒陽(yáng)性68例，女性患兒陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率分別為6.70%和3.64%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)P= 0.016，說(shuō)明男性患兒和女性患兒之間的陽(yáng)性率存在顯著差異。

2.4 不同月份HBoV檢測(cè)結(jié)果1－12月的HBoV檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。不同月份HBoV陽(yáng)性率經(jīng)卡方檢驗(yàn)P=8.73×10－8，存在顯著差異，其中5－8月份陽(yáng)性率最高。

表2 不同月份HBoV檢測(cè)情況

2.5 混合感染情況共檢出HBoV與其他呼吸道病原體混合感染病例52例，占比為60.47%。混合感染最多為鼻病毒，有22例，其中只感染博卡病毒和鼻病毒的病例有11例。其余為腺病毒15例，副流感病毒11例，呼吸道合胞病毒11例，流感病毒6例，冠狀病毒6例，偏肺病毒2例。有18例（20.93%）病例存在三種及三種以上的病毒的混合感染。

3 討論

人博卡病毒自2005年在瑞典發(fā)現(xiàn)以來(lái)，在澳大利亞、美國(guó)、加拿大、法國(guó)、日本、泰國(guó)等多家也相繼應(yīng)用PCR的方法，從臨床小兒下呼吸道樣本中檢測(cè)到人博卡病毒[3]。2005年，我國(guó)溫嶺市檢出7例HBoV，并通過(guò)克隆和基因測(cè)序的方法對(duì)該病毒進(jìn)行全基因序列測(cè)定，該病毒被命名為WLL－1，溫嶺成為全球第5個(gè)發(fā)現(xiàn)HBoV感染的地區(qū)[4]。近年來(lái)我國(guó)各地相繼從呼吸道樣本中檢出人博卡病毒。越來(lái)越多的研究證據(jù)表明人博卡病毒已成為導(dǎo)致呼吸道感染的一種重要的病原體。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)到，美國(guó)[5]的HBoV檢出率為5.2%，日本[6]的HBoV檢出率為5.7%，而我國(guó)急性呼吸道感染的患兒中人博卡病毒的感染率上海為5.5%[7]，蘇州為7.1%[8]，南京為8.3%[9]，長(zhǎng)沙為11.4%[10]。本研究調(diào)查了2011至2015年這5年間江西省兒童人博卡病毒的感染情況，結(jié)果顯示，我省兒童HBoV感染的陽(yáng)性率為5.70%，和其他國(guó)家和地區(qū)的HBoV陽(yáng)性率并無(wú)明顯差別，說(shuō)明我省并不是人博卡病毒重度流行區(qū)域。

研究顯示2歲以下的嬰幼兒時(shí)HBoV的易感人群[11]。有文獻(xiàn)報(bào)道長(zhǎng)沙地區(qū)HBoV在6－12月年齡段檢出率最高[12]。蘇州地區(qū)在6-18月齡組檢出率最高[8]。

本研究中顯示在江西地區(qū)4歲以下兒童的HBoV陽(yáng)性率最高，尤其是1歲的兒童，說(shuō)明低年齡的嬰幼兒時(shí)HBoV感染的危險(xiǎn)人群。在性別方面，本研究顯示男性患兒的HBoV陽(yáng)性率要高于女性患兒，這與四川[15]，長(zhǎng)沙[10]地區(qū)的研究結(jié)果相一致。HBoV在性別方面感染率不同的原因仍需要進(jìn)行深入的研究和探討。

HBoV感染的高峰季節(jié)各研究結(jié)構(gòu)并不一致。昆明[13]的研究顯示HBoV檢出高峰為秋冬季。長(zhǎng)沙[10]的研究顯示HBoV檢出高峰為冬春季。而本研究顯示我省HBoV感染的重要發(fā)生于5-9月份，這與天津[14]HBoV夏季流行的報(bào)道相一致。HBoV在不同地區(qū)流行時(shí)間的不同可能與研究時(shí)期和地理位置有關(guān)。

HBoV和其他呼吸道病毒混合感染非常常見(jiàn)，其中多以混合感染鼻病毒、RSV、ADV和PIV為主，有報(bào)道顯示混合感染率最高可達(dá)到90%[16]。本研究中混合感染率為60.47%，混合感染率最高的病毒為鼻病毒，其次為腺病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒，這和其他文獻(xiàn)的報(bào)道相一致。三種及三種以上病毒混合感染率也達(dá)到了20.93%。HBoV為什么易發(fā)生混合感染以及混合感染與導(dǎo)致的疾病之間的關(guān)系值得繼續(xù)深入研究。

綜上所述，本研究初步掌握了江西地區(qū)呼吸道感染患兒HBoV感染的病原學(xué)及流行特征資料，對(duì)江西省兒童呼吸道感染病原譜研究的重要組成部分。研究結(jié)果提供了我省人博卡病毒的重要的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，對(duì)我省人博卡病毒的防控具有重要的意義。

[1]Allander T，Tammi MT，Eriksson M，et al.Cloning of a human parvovirus by molecular screening of respiratory tract samples[J].Proc Natl Acad Sci USA，2005，102(43)：12891-12896.

[2]中國(guó)疾控.“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項(xiàng)傳染病監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái)項(xiàng)目發(fā)熱呼吸道癥候群監(jiān)測(cè)實(shí)施方案[S].2009.53-54.

[3]Jartti T，Hedman K，Jartti L，et al.Human bocavirus-the first 5 years[J].Reviews in Medical Virology，2012，22(1)：46-64.

[4]林峰.專家稱溫嶺發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)首例人博卡病毒[J].中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2006，6(5)313.

[5]Kesebir D，Vazquez M，Weibel C，et al.Human bocavirus infection in young children in the United States：molecular epidemiological profile and clinical characteristics of a newly emerging respiratory virus[J].J Infect Dis，2006，194(9)：1276-1282.

[6]Ma X，Endo R，Ishiguro N，et al.Detection of human bocavirus in Japanese children with lower respiratory tract infections[J].J Clin Microbiol，2006，44(3)：1132-1134.

[7]葉穎子，沈軍，曾玫，等.人博卡病毒在上海地區(qū)兒童下呼吸道感染的流行病學(xué)[J].中華傳染病雜志，2012，30(4)：246-249.

[8]李蓓荃，季偉，蔡利紅，等.2009-2010年蘇州地區(qū)博卡病毒感染住院患兒臨床特征分析[J].臨床兒科雜志，2012，30(8)：753-756. [9]陳倩，曹新，胡正，等.南京地區(qū)急性呼吸道感染患兒人博卡病毒的檢出與分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，34(5)：437-442.

[10]肖霓光，張兵，段招軍，等.長(zhǎng)沙地區(qū)急性下呼吸道感染住院兒童人博卡病毒感染的初步研究[J].臨床兒科雜志，2011，29(6)：510-513.

[11]Manning A，Russell V，Eastick K，et al.Epidemiological profile and clinical associations of human bocavirus and other human parvoviruses[J].J Infect Dis，2006，194(9)：1283-1290.

[12]劉沁，張兵，謝志萍，等.長(zhǎng)沙地區(qū)急性下呼吸道感染住院兒童的病毒病原學(xué)分析[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2015，12(1)：26-31.

[13]李秀云，孔艷，馬克玲，等.昆明地區(qū)5歲以下兒童博卡病毒和偏肺病毒感染的臨床流行病學(xué)調(diào)查[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33(9)：42-46.

[14]王維，林書祥，李勝英，等.住院呼吸道感染患兒博卡病毒檢測(cè)分析[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，2016，18(1)：39-43.

[15]楊晶艷，胡鵬威，陳蕊，等.四川地區(qū)兒童呼吸道感染人博卡病毒的流行特征與基因變異分析[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，45(1)：57-61.

[16]Kaplan NM，Dove W，Abu-Zeid AF，et al.Human Bocavirus infection among children，Jordan[J].Emerg Infect Dis，2006，12(9)：1418-1420.

Prevalence of human bocavirus among children with respiratory tract infection in Jiangxi province from2011 to 2015

LI Jianxiong，ZHANG Yanni，SHI Yong，XU Gang，GONG Tian，XIONG Ying.Jiangxi Center for Disease Control and Prevention，Nanchang 330029，China.

Objective To study the prevalence of human bocavirus(HBoV)among children with respiratory tract infection(RTI) in JiangXi province and analyze its epidemic characteristics.MethodsOne thousand five hundred and eight throat swabs or bronchial perfusate samples from children with RTI in JiangXi province were collected from August 2011 to December 2015. HBoV were detected using reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR).Results The positive ratio of HBoV was 5. 70%(86)from 1508 RIT cases.The majority of infected children were under 2 years old.The positive rate of male children was higher than female children.The prevalence of HBoV infection occurred mainly from May to August.The rate of co-infection of HBoV and other respiratory viruses was 60.47%in positive samples.Conclusion HBoV is one of the important pathogens in children with respiratory tract infection in JiangXi，which is more prevalent in the male children younger than two years old in summer and is of higher co-infection rates with other respiratory viruses.

Human bocavirus；Respiratory tract infection；Children

R373.1，R446.62

A

1674-1129(2017)01-0020-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.006

2016-09-19；

2016-12-02)

江西省衛(wèi)生計(jì)生委科技計(jì)劃（20156015）

李健雄，男，1986年生，碩士研究生，主管技師，衛(wèi)生檢驗(yàn)，病毒學(xué)檢驗(yàn)