李卉園，黃小梅，郭莉娜，李榮華，李 燦，陳建文，黃 迪林友勝，王航宇，劉漪淪，鄧峰美△

1.成都醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 (成都 610500)； 2.石河子大學(xué)藥學(xué)院(石河子 832000)；3.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(成都 610500)

鎖陽對肝纖維化模型大鼠血細(xì)胞分型的影響

*李卉園1，黃小梅1，郭莉娜1，李榮華1，李 燦1，陳建文1，黃 迪1林友勝1，王航宇2，劉漪淪3，鄧峰美1△

1.成都醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 (成都 610500)； 2.石河子大學(xué)藥學(xué)院(石河子 832000)；3.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(成都 610500)

目的 探討鎖陽對四氯化碳( CCl4) 誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化血細(xì)胞分型影響。方法 將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、秋水仙堿組(0.2 mg/kg)和鎖陽組(200 mg/kg)，每組各15只。前6周，正常對照組大鼠用花生油，其余組大鼠2次/周，以3 mL/kg的劑量，用 CCl4與花生油(4∶6)混合液，皮下注射復(fù)制肝纖維化模型。6周后，秋水仙堿組與鎖陽組大鼠分別以相應(yīng)劑量，1次/d，灌胃，正常對照組和模型組大鼠給予等容生理鹽水，持續(xù) 6 周。12周末，大鼠麻醉后處死，取血清，采用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行外周血常規(guī)分析。結(jié)果 與模型組相比，鎖陽組大鼠白細(xì)胞數(shù)目(WBC)、中性粒細(xì)胞比值(NEUT%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EOS%)、血小板分布寬度(PDW%)和紅細(xì)胞分布寬度(RDW%)較模型組明顯降低，淋巴細(xì)胞百分比(LYM%)、紅細(xì)胞數(shù)目(RBC)、紅細(xì)胞壓積(HCT%)、血紅蛋白含量(MCH)和平均紅細(xì)胞體積(MCV)較模型組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 鎖陽對肝纖維化大鼠的血細(xì)胞分型產(chǎn)生了影響。

肝纖維化； 鎖陽； 血細(xì)胞分型

肝纖維化是肝臟組織受到急、慢性損傷刺激后，進(jìn)行持續(xù)自我修復(fù)所致的病理改變，其病理特征是肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生，是肝內(nèi)細(xì)胞之間及其與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrixc, ECM)相互作用的結(jié)果[1]。鎖陽是鎖陽屬鎖陽科一種多年生、全寄生肉質(zhì)草本植物。文獻(xiàn)[2-3]表明，鎖陽具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化作用，而炎癥與自由基損傷是肝纖維化的重要致病因素。因此，課題組前期與教育部新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室合作，開展了鎖陽進(jìn)行肝纖維化的初步干預(yù)研究[4-6]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鎖陽對四氯化碳( CCl4) 所致的肝損傷動(dòng)物模型具有保護(hù)作用，與模型組相比，鎖陽組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)均有明顯降低[7]。但是，鎖陽對外周血細(xì)胞分型變化的影響卻未見報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性SD大鼠，SPF級別，體質(zhì)量140～160 g，60只，購買于成都達(dá)碩公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK(川)2013-024。

1.2 試劑與儀器

鎖陽由新疆石河子大學(xué)藥學(xué)院提供；秋水仙堿，云南玉藥生物制藥有限公司，批號H53021904； CCl4分析純 AR( 500 mL /瓶)， 購于成都科龍化工試劑廠，批號20120220；SF-3000型血細(xì)胞分析儀，日本SYSMEX株式會(huì)社產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法

將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、秋水仙堿組和鎖陽組，每組各15只。前6周，正常對照組大鼠用花生油，其余組大鼠2次/周，以3 mL/kg的劑量，用 CCl4與花生油(4∶6)混合液，皮下注射，復(fù)制肝纖維化模型。6周后，秋水仙堿組與鎖陽組大鼠分別以0.2 mg/kg、200 mg/kg的劑量，1次/d，灌胃，正常對照組和模型組大鼠給予等容生理鹽水，持續(xù) 6周。

1.4 取材

將大鼠固定，麻醉，于鎖骨中點(diǎn)以上0.5 cm 處切開皮膚，離出頸總靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，將靜脈留置管向近心端插入，取頸靜脈血。

1.5 指標(biāo)檢測

取血后，在2 h內(nèi)用血細(xì)胞分析儀，檢測大鼠血中白細(xì)胞數(shù)目(WBC)，中性粒細(xì)胞比值(NEUT%)、單核細(xì)胞百分比(MONO%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYM%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EOS%)、紅細(xì)胞數(shù)目(RBC)、血小板分布寬度(PDW%)、紅細(xì)胞壓積(HCT%)、血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)和紅細(xì)胞分布寬度(RDW%)各項(xiàng)指標(biāo)的變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠WBC、NEUT%測定結(jié)果

與正常對照組相比，模型組大鼠血細(xì)胞WBC、NEUT%較正常組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，秋水仙堿組和鎖陽組大鼠WBC、NEUT%較模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 各組大鼠WBC，NEUT%測定結(jié)果

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

2.2 各組大鼠MONO%、LYM%、EOS%比較

與正常對照組相比，模型組大鼠MONO%、EOS%明顯升高，LYM%明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，秋水仙堿組和鎖陽組EOS%明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，鎖陽組LYM%明顯升高，秋水仙堿組MONO%明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 各組大鼠MONO%、LYM%、EOS%測定結(jié)果

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

2.3 各組大鼠RBC、PDW%、HCT%比較

與正常對照組相比，模型組大鼠的RBC、HCT%明顯降低，PDW%升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，秋水仙堿組和鎖陽組的RBC、HCT%明顯升高，PDW/%降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 各組大鼠RBC、PDW%、HCT%測定結(jié)果

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

2.4 各組大鼠MCH、MCV、RDW%比較

與正常對照組相比，模型組大鼠的MCH、MCV明顯降低，RDW%升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，秋水仙堿組和鎖陽組MCH明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，鎖陽組MCV升高，RDW%降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表4 各組大鼠MCH，MCV、RDW%測定結(jié)果

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

3 討論

肝纖維化的產(chǎn)生，實(shí)質(zhì)上是細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解的平衡被打破，從而導(dǎo)致肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積。在此病理過程中，ECM主要來源為肝星狀細(xì)胞(HSC)的激活。正常情況下，HSC處于靜息狀態(tài)，一旦發(fā)生肝細(xì)胞損傷，HSC就會(huì)被激活。目前，有文獻(xiàn)[8]報(bào)道，肝細(xì)胞被損傷后，參與HSC激活的細(xì)胞因子除了TGF-β1之外，血小板等也參與到了激活HSC的病理過程中。此外，另有文獻(xiàn)[9]證實(shí)，慢性肝病患者外周WBC、RBC、PDW%與肝臟病理分期有明顯相關(guān)性，隨病理分期的增加而逐步減少，大部分病人外周血表現(xiàn)為WBC、RBC、HCT%也明顯低于正常?；蛟S可以利用外周血細(xì)胞的分型變化以及數(shù)量的改變作為判斷肝纖維化進(jìn)程的理論依據(jù)，這也能為臨床診斷肝纖維化提供有利指標(biāo)，從而減少肝臟活檢。

本研究數(shù)據(jù)顯示，WBC、NEUT%和EOS%明顯升高，LYM%明顯降低，表明細(xì)胞內(nèi)炎癥增多。而炎癥反應(yīng)和炎癥因子在HSC的活化、凋亡中起重要作用，可以促進(jìn)肝纖維化的形成[10-12]。同時(shí)，肝纖維化發(fā)生后，脾功能亢進(jìn)，會(huì)加速血細(xì)胞在脾臟中的破壞[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RBC，HCT%，MCH，MCV明顯降低，符合大鼠肝纖維化的病理特點(diǎn)，證明實(shí)驗(yàn)造模成功。在用鎖陽干預(yù)后，與模型組相比，WBC、HCT%、RBC、MCV、RDW%等指標(biāo)有一定程度回升，表明鎖陽能夠在一定程度上改變肝纖維化大鼠靜脈血中的細(xì)胞分型，緩解肝纖維化癥狀。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，鎖陽對肝纖維化大鼠的血細(xì)胞分型產(chǎn)生了一定影響，同時(shí)，能夠減輕肝纖維化癥狀。至于血細(xì)胞分型的變化和肝纖維化癥狀減輕之間是否具有直接的因果關(guān)系，仍需進(jìn)一步證實(shí)，這將作為本實(shí)驗(yàn)室研究的新方向?？傊緦?shí)驗(yàn)結(jié)果能夠?yàn)殒i陽的臨床使用提供一定的理論支持。

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Effect of Cynomorium on the Blood Cell Type of Rats with Hepatic Fibrosis

LiHuiyuan1,HuangXiaomei1,GuoLina1,LiRonghua1,LiCan1,ChenJianwen1,HuangDi1,LinYousheng1,WangHangyu2,LiuYilun3,DengFengmei1△.

1.SchoolofBasicMedicalSciences,ChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China; 2.SchoolofPharmacy,ShiheziUniversity,Shihezi832000,China;3.TheFirstAffiliatedHospitalofChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China

Objective To explore the effect of cynomorium on CCl4induced fibrosis in rats and analyze the blood cell type. Methods Sixty Sprague Dawley (SD) rats were divided randomly into 4 groups including the control group, model group, colchicine group (0.2 mg/kg), and cynomorium group (200 mg/kg), and each group consisted of fifteen rats. In the first six weeks, the rats in control group were injected with peanut oil twice a week. In order to make the fibrosis models, the rats in the other groups were injected with the mixure of CCl4and peanut oil in the ratio of 4∶6. After six weeks, the rats in the colchicine group and cynomorium group were given the intragastric administration with the corresponding dose once a day for 6 weeks. The rats in the control and model group were injected with the equal volume of saline. The rats were sacrificed after anesthesia by the end of the 12th week. The serum was collected and analyzed by the blood cell analyzer. Results In comparison with the model group, there were significant decreases in the number of white blood cell (WBC), percentage of neutrophil and eosinophil, platelet distribution width (PDW) and the red blood cell distribution width (RDW) (P<0.05), and significant increases in the lymphocyte percentage, number of red blood cells, hematocrit, hemoglobin content, and the mean corpuscular volume (MCV) (P<0.05) in the cynomorium group. Conclusion Cynomorium has a certain effect on the blood cell type in rats with hepatic fibrosis.

Liver fibrosis; Cynomorium; Blood cell type

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20170116.1700.002.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2017.01.005

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No:81560566，81570558)；四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(No:2017JY0151、No:17ZA0113、No:15ZA0266)；發(fā)育與再生四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No:SYS15-004)；四川省大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃訓(xùn)練項(xiàng)目(No:CXXS201303)；成都醫(yī)學(xué)院科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(No:CYTD15-04)；成都醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃訓(xùn)練項(xiàng)目(No:2013705011)。

R31

A

△通信作者：鄧峰美，E-mail:dengfm2004@163.com