李丹+鐘良軍+張睿

[摘要] 目的 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，比較福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）在慢性牙周炎（CP）和冠心病伴慢性牙周炎（CHD+CP）患者齦下菌斑中的分布，探討其檢出率與CP和CHD的關(guān)系。方法 整群選擇2014年1—12月該院收治的132例患者為研究對象，CP 62例，CHD+CP 70例，收集位點齦下菌斑，提取DNA，用PCR法檢測T.f、P.g分布。 結(jié)果 兩組中，T.f檢出率分別是66.67%、71.43%、92.5%和85.71%、70.37%、80.95%；T.f在CP中分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z= -2.982， P=0.003﹤0.05）。P.g在兩組中，在輕、中、重度CP檢出率分別是22.23%、52.38%、35.00%和21.43%、55.56%、42.86%。在（CP+CHD組）中，T.f與P.g有相關(guān)性（r= -0.306， P=0.012﹤0.05）。結(jié)論 Tf可能與冠心病發(fā)病有相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 慢性牙周炎；冠心??；齦下菌斑 牙周致病菌

[中圖分類號] R781 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）01（b）-0047-03

[Abstract] Objective To compare the distribution of T.f and P.g in the subgingival plaque of patients with chronic periodontitis and coronary heart disease with chronic periodontitis by PCR technology， and discuss the correlation between the test rate and CP and CHD. Methods 132 cases of patients admitted from January 2014 to December 2014 were group selected as the research objects， including 62 cases with CP and 70 cases with CHD+CP， and the DNA was extracted， and the distribution of T.f and P.g was tested by the PCR method. Results The test rate of T.f was respectively 66.67%，71.43%，92.5% and 85.71%，70.37%，80.95%， and the difference in the distribution of T.f had statistical significance（Z= -2.982， P=0.003<0.05）， and the test rate of mild， moderate and severe degrees of CP was respectively 22.23%，52.38%，35.00%和21.43%，55.56%，42.86%， and in the CP+CHD group， the T.f is correlated with P.g（r= -0.306，P=0.012<0.05）. Conclusion Tf may be correlated with the incidence of coronary heart diseases.

[Key words] Chronic periodontitis； Coronary heart disease； Subgingival plaque； Periodontal pathogen

牙周病是我國成人失牙的主要原因，現(xiàn)有研究表明，牙周病能夠增大冠心病的發(fā)病風(fēng)險，而牙周病是幾種細菌聚集而產(chǎn)生的慢性炎癥。其中，牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）、福賽斯坦納菌（Tannerella forsythensis， T. f） 是目前公認的牙周可疑致病菌，也是近些年牙周炎與冠心病相關(guān)性研究的主要細菌[1]。該實驗整群選擇2014年1—12月該院收治的132例冠心病伴慢性牙周炎患者作為研究對象并對其齦下菌斑中2種牙周致病菌進行檢測，研究其在冠心病伴慢性牙周炎患者中分布情況及冠心病患者齦下菌斑中牙周致病菌的分布與慢性牙周炎病變程度之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗組整群選取在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管醫(yī)院就診患者，經(jīng)病史、X線和選擇性冠狀動脈造影結(jié)果分為：冠心病伴慢性牙周炎患者共70例為研究對象，年齡48～74歲，平均（60.44±9.04）歲。對照組選取該院口腔科同一階段接診的并經(jīng)X線片診斷為慢性牙周炎的初診患者，共62例。納入標準：身體健康，無遺傳性病史及其他系統(tǒng)性疾病，近3個月內(nèi)未接受牙周治療，近 1個月內(nèi)未服用任何抗菌藥物，所需標本和臨床指標均在患者知情同意下進行采集和檢查。冠心病納入標準[2]，冠脈造影判斷陽性標準：前降支、回旋支、右冠脈或左主干存在≥50%直徑的固定性狹窄或阻塞性病變。對照組選口腔科就診CP患者62例。慢性牙周炎納入標準[3]。

1.2 菌斑采集

選擇4個區(qū)中切牙和第一恒磨牙共8個位點取樣。用無菌刮治器取齦下菌斑，置EP管中，-20℃保存。

1.3 DNA模板的制備

室溫解凍牙菌斑標本15 min→加入 50 g/L chelex-100液150 μL（無菌去離子水加20 mg/mL的蛋白酶K 4 μL）→漩渦混勻10 min→6℃水浴3 h→100 ℃水浴 10 min→立刻冰浴1 min→4℃14 000 r/min離心5 min→取上清液，-20℃保存?zhèn)溆谩?

1.4 PCR反應(yīng)體系

使用PCR儀擴增，反應(yīng)體系如表1。

2 結(jié)果

2.1 臨床標本

T.f和P.g陽性對照和空白對照PCR結(jié)果見圖1。

2.2 T.f和P.g在兩組不同程度牙周炎齦下菌斑中細菌的檢出情況

T.f和P.g在兩組不同程度牙周炎齦下菌斑中細菌的檢出情況，見表2。

3 討論

目前我國正處于老齡化社會，隨著老年人數(shù)的與日俱增，老年口腔疾病和心腦血管疾病的患病率呈上升趨勢。牙周病作為全球普遍蔓延的一種慢性病，多發(fā)于中老年人群，是引起成人牙齒的喪失的重要原因[4]。國外的流行病學(xué)方面研究已證明，牙周病與心血管疾病之間具有很大程度的關(guān)聯(lián)性。更有研究表明，CP可能是引起CHD的風(fēng)險因素之一[5-7]。已有證據(jù)表明[8]，牙周致病菌與CHD患者的心血管壁存在關(guān)聯(lián)。Chen等[9]研究發(fā)現(xiàn)，血小板活化因子在炎性牙周組織中高表達，同時也很大程度上影響著冠心病的發(fā)生和發(fā)展，由此可見，牙周炎和冠心病相互關(guān)聯(lián)。

馬麗等[10]對在160例糖尿病患者齦下菌斑檢測中發(fā)現(xiàn)，T.f在輕、中、重度度牙周炎組檢出率為47.82%，48.71%和67.39%。重度牙周炎組的檢出率明顯高于輕、中度組。從而得出結(jié)論T..f與牙周病程度及糖尿病病程有關(guān)。與該實驗的研究結(jié)果一致。在該實驗兩組中，T.f檢出率在輕、中、重慢性牙周炎伴冠心病患者中檢出率分別是66.67%、71.43%和92.50%。檢出率隨牙周病嚴重程度而增加。并且這種趨勢與單純牙周炎組分布相似，表明該細菌也是糖尿病腎病伴牙周病的主要致病菌。另外，T.f檢出率在不同程度CP中分布不同，有統(tǒng)計學(xué)差異，表明T.f對細菌在不同程度CHD的分布有影響，且呈正相關(guān)。該研究證實CP可增加CHD發(fā)生危險，并且T.f可能對CHD的發(fā)展發(fā)揮很大的作用。但該菌詳盡的生物學(xué)及免疫學(xué)特性尚待研究，其對冠心病的影響機制也需要深入研究。

[參考文獻]

[1] Nonnenmacher C， Stelzel M， Susin C. Periodontal microbiota in patients with coronary artery disease measured by real-time polymerase chain reaction： A case-control study[J].Periodontol，2007，78（9）：1724-1730.

[2] 陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：300-302.

[3] Armitage GC， Wu Y， Wang HY， et al. Low prevalence of a periodontitis associated interleukin-1 composite genotype in individuals of Chinese heritage[J].Periodontol，2000， 71（2）：164-171.

[4] 孫曉菊.老年牙周病與心腦血管疾病[J].中國實用口腔醫(yī)學(xué)，2014，7（2）：65-68.

[5] Williamg，Haynes，Clark Stanford.Periodontal disease and atherosclerosis： from dental to arterial plaque.arteriosclerosis thronbosis[J].Vascular Biology，2003，23（8）：1309-1311.

[6] 李偉，胡紅梅，秦翠，等.冠心病與慢性牙周炎相關(guān)性的系統(tǒng)評價[J].中國老年學(xué)雜志，2013，33（20）：4955-4957.

[7] 戴曉瑋，鐘良軍，朱濤.伴慢性牙周炎冠心病患者動脈粥樣.硬化斑塊中牙齦卟啉單胞菌牙齦素基因片段檢測[J].中國實用診斷與治療雜志，2013，27（7）：673-675.

[8] Li xiao jing，Kristin M，Leif tronstad，et al.Systemic disease caused by oral infection[J].Clinical Microbiology Reviews，2010，13（4）：547-548.

[9] Chen H，Zheng P. Platelet-activating factor levels of serum and gingival crevicular fluid in nonsmoking patients with periodontitis and/or coronary heart disease[J].Clin Oral Invest，2010，14：629-636.

[10] 馬麗，張建全，潘亞萍.福賽斯坦納菌在2型糖尿病患者齦下菌斑中的分布[J]華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，29（1）：57-61.