趙小云

表皮生長(zhǎng)因子受體、切割修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1、抑癌基因p53在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)以及相關(guān)性研究

趙小云

（河西學(xué)院醫(yī)學(xué)院，甘肅 張掖 734000）

目的 探討非小細(xì)胞肺癌組織中表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、切割修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（ERCC1）和p53蛋白表達(dá)情況與臨床分期、病理分型、臨床特征的關(guān)系。方法 用免疫組化法檢測(cè)60例非小細(xì)胞肺癌患者原發(fā)腫瘤組織中EGFR ERCC1和p53蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 60例非小細(xì)胞肺癌組織的EGFR、ERCC1及p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.3% （35/60）、63.3%（38/60）和51.7%（31/60）；ERCC1和p53的表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化程度明顯相關(guān)（P＜0.01），ERCC1與年齡、性別等臨床特征明顯相關(guān)（P＜0.05），EGFR的表達(dá)與腫瘤病理分型有關(guān)（P＜0.05）；p53的表達(dá)分別與EFGR、ERCC1表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 ERCC1、p53表達(dá)率隨腫瘤分級(jí)、分期的升高而明顯增高，EGFR、ERCC1、p53的表達(dá)與腫瘤臨床病理特征有關(guān)，且多個(gè)基因的共同表達(dá)也隨腫瘤分級(jí)、分期的升高而明顯增高。檢測(cè)EGFR、ERCC1和p53蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷、治療及預(yù)后評(píng)價(jià)有重要意義。

非小細(xì)胞肺癌；EGFR；ERCC1；p53

肺癌是世界上發(fā)病率和病死率均居首位的惡性腫瘤。2010年，美國(guó)死亡分析報(bào)告指出，在所有癌癥致死患者中，肺癌占26%。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌總數(shù)的80%～85%，具有癌基因激活、抑癌基因失活以及生長(zhǎng)因子受體過(guò)度表達(dá)等特點(diǎn)。

表皮因子受體（EGFR）是一種跨膜受體型酪氨酸激酶，在NSCLC中存在過(guò)表達(dá)并促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，酪氨酸激酶編碼區(qū)基因突變是EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR—TKI）靶向治療的前提條件[1]。p53抑癌基因是一種多功能蛋白，在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、基因轉(zhuǎn)錄、應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞DNA修復(fù)等腫瘤演變過(guò)程中發(fā)揮重要作用[2]。ERCC1基因在胞內(nèi)DNA復(fù)制及損傷修復(fù)環(huán)節(jié)起關(guān)鍵作用，在核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)（NER）中起限速或調(diào)節(jié)作用[3]。在NSCLC中，ERCC1的表達(dá)與鉑類耐藥相關(guān)[4]。EGFR、ERCC1、p53在NSCLC中的表達(dá)均有報(bào)道，而其相互關(guān)系卻少有探討。本研究應(yīng)用免疫組化法，對(duì)60例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本進(jìn)行EGFR、ERCC1以及p53蛋白檢測(cè)，了解其在肺癌中的表達(dá)特征，并探討其與非小細(xì)胞肺癌臨床分期、病理分型及臨床特征的關(guān)系，為非小細(xì)胞肺癌的診斷、治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

研究標(biāo)本由河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院病理科提供，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，取得患者同意。標(biāo)本取自外科2011 年6月至2014年10月住院接受手術(shù)的60例NSCLC患者，手術(shù)切除、經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為NSCLC。男性15例、女性45例，年齡33～81歲，中位年齡58歲。臨床TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期4例，Ⅲ期21例，IV期26例。術(shù)后病理檢查結(jié)果：低分化腺癌21例，中分化腺癌14例，高分化腺癌6例；低分化鱗癌10例，中分化鱗癌8例，高分化鱗癌1例。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例。無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移34例，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移26例（見表1）。

表1 EGFR、ERCC1、p53與NSCLC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

1.2 方法

采用Elivision TM plus二步法，鼠抗人EGFR單克隆抗體（EGFR/113）、鼠抗人ERCC1蛋白單克隆抗體、鼠抗人p53單克隆抗體和Elivision TM plus試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，工作濃度為1∶50，操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，每批染色均設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

EGFR陽(yáng)性表達(dá)為胞質(zhì)和胞膜著色，ERCC1陽(yáng)性表達(dá)為胞核著色，結(jié)果判斷如下：每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)不少于1 000個(gè)細(xì)胞。用各視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的平均百分?jǐn)?shù)計(jì)分：0%～24%為陰性，≥25%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，用χ2檢驗(yàn)及確切概率法分析EGFR、ERCC1、p53陽(yáng)性率與NSCLC患者臨床生物學(xué)特征的關(guān)系，用Spearman等級(jí)相關(guān)分析判斷ERCC1、EGFR、p53的相關(guān)性。P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 EGFR、ERCC1、p53在NSCLC中的表達(dá)

60例非小細(xì)胞肺癌的EGFR、ERCC1及p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.3%（35/60）、63.3%（38/60）和51.7%（31/60）。

2.2 EGFR、ERCC1、p53表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

EGFR陽(yáng)性染色位于腫瘤細(xì)胞膜和胞質(zhì)，呈棕黃色（見圖1）。EGFR表達(dá)與NSCLC病理分型、患者年齡有關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤分期、細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及性別無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。

圖1 EGFR在非小細(xì)胞肺癌中的陽(yáng)性表達(dá)（SP，×400）

ERCC1陽(yáng)性產(chǎn)物主要位于腫瘤細(xì)胞核，呈棕褐色（見圖2）。ERCC1表達(dá)隨NSCLC腫瘤分期、細(xì)胞分化程度的升高而增多（P＜0.05），且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病例中表達(dá)明顯增多（P＜0.05），與患者性別亦有關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤病理分型及患者年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05）。

圖2 ERCC1在非小細(xì)胞肺癌中的陽(yáng)性表達(dá)（SP，×400）

p53陽(yáng)性染色位于腫瘤細(xì)胞核，呈棕黃色。p53表達(dá)隨NSCLC腫瘤分期、細(xì)胞分化程度的升高而增多（P＜0.05），并且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病例中表達(dá)明顯增多（P＜0.05），與腫瘤病理分型及患者年齡、性別無(wú)關(guān)（P＞0.05）。

2.3 p53、ERCC1及EGFR在NSCLC中表達(dá)的相關(guān)性

60例NSCLC患者中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)35例，其中ERCC1陽(yáng)性表達(dá)24例（68.6%），p53陽(yáng)性表達(dá)21例（60.0%）。在25例EGFR陰性表達(dá)患者中，ERCC1陽(yáng)性表達(dá)14例（56.0%），p53陽(yáng)性表達(dá)10例（40.0%）；EGFR表達(dá)與p53正相關(guān)（P=0.038），而與ERCC1無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。在38例ERCC1表達(dá)陽(yáng)性患者中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)24例（63.2%），p53陽(yáng)性表達(dá)25例（65.8%）；在22例ERCC1陰性表達(dá)患者中，p53陽(yáng)性表達(dá)6例（27.3%），p53表達(dá)與ERCC1表達(dá)正相關(guān)（P＜0.01，見表2）。

表2 p53、ERCC1、EGFR在NSCLC中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

EGFR在NSCLC中的陽(yáng)性表達(dá)率為58.3%，在各種病理類型肺癌及有或無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中均有較高的表達(dá)率，提示肺癌的發(fā)展與EGFR過(guò)度表達(dá)及活性增強(qiáng)有關(guān)，EGFR陽(yáng)性的癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的分裂增殖活性和浸潤(rùn)性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，EGFR與NSCLC腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度以及年齡、性別等臨床特征無(wú)明顯相關(guān)性，而與病理分型相關(guān)，說(shuō)明EGFR可能多發(fā)于鱗癌，與腫瘤侵襲能力關(guān)系不密切，但EGFR并不能作為判斷肺癌患者預(yù)后的有效指標(biāo)，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

p53在NSCLC中的陽(yáng)性表達(dá)率為51.7%，與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)，與之前研究相符，而與病理分型、患者年齡、性別等臨床特征無(wú)明顯相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，p53蛋白的表達(dá)隨TNM分期的升高而增高，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病例中表達(dá)率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移的病例，在中低分化的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)率明顯增高，提示p53高表達(dá)的NSCLC惡性程度高，是預(yù)后不良的標(biāo)志。

ERCC1蛋白在NSCLC中的表達(dá)陽(yáng)性率為63.3%，與腫瘤分期、腫瘤細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及患者年齡、性別等臨床特征明顯相關(guān)，而與病理分型無(wú)關(guān)。腫瘤細(xì)胞TNM分期越高，ERCC1蛋白表達(dá)率也越高。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中陽(yáng)性表達(dá)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，并在中低分化腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高。ERCC1陽(yáng)性多見于女性，尤其是老年女姓，其表達(dá)增強(qiáng)可能提示肺癌預(yù)后不良以及耐藥程度增高。

Spearman等級(jí)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，EGFR與p53正相關(guān)（P= 0.038），而與ERCC1無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路主要包括MAPK通路、PI3K通路、c-Src通路，各個(gè)信號(hào)通路之間交聯(lián)，使細(xì)胞的最終效應(yīng)受多種因素綜合調(diào)控[5]。腫瘤抑癌基因p53與多種基因存在相互調(diào)節(jié)作用。正常野生型p53蛋白的半衰期很短，用一般免疫組化法難以測(cè)出。p53突變后，半衰期明顯延長(zhǎng)，穩(wěn)定性增加，故用免疫組化法檢測(cè)到的p53蛋白多為突變p53蛋白，它不僅失去了正常抑癌作用，而且還有促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化的作用，由抑癌基因轉(zhuǎn)變成癌基因[6]。有研究證實(shí)，p53能正向激活EGFR表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞增殖[7]，可增加ER和EGFR /HER-2旁路途徑，抵抗4-羥基三苯氧胺（OHT）細(xì)胞毒作用，影響內(nèi)分泌治療效果[8]；且有助于靶向藥物西妥昔單抗對(duì)EGFR受體下游信號(hào)通路的抑制[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述研究一致，EGFR 與p53正相關(guān)（P=0.038），提示p53可能影響EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路，兩者有互相促進(jìn)的可能性，需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

惡性腫瘤是一個(gè)多因素、多步驟作用的結(jié)果，其發(fā)生要經(jīng)過(guò)一系列基因表達(dá)變化的共同作用。EGFR、ERCC1和p53都是目前臨床上比較常用的腫瘤指標(biāo)。通過(guò)檢測(cè)ERCC1基因mRNA表達(dá)，EGFR基因突變等分子標(biāo)記物，制訂個(gè)體化治療方案，成為今后惡性腫瘤治療的趨勢(shì)。尋找并鑒定這類分子標(biāo)志物，有助于指導(dǎo)臨床制訂治療方案，篩選獲益人群，真正做到“量體裁衣、對(duì)人下藥”，使治療更具針對(duì)性，效果更好。

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R734.2

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1671-1246（2017）05-0142-03

注：本文系2014年甘肅省高等學(xué)校科研項(xiàng)目（2014B-122）