賈培松，努爾孜亞·亞力買買提，管建華，羅 影， 郝敬喆，賈文捷，魏 鵬

(1. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室，烏魯木齊 830091；2. 青河縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，新疆青河縣 836200)

新疆石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株遺傳多樣性

賈培松1，努爾孜亞·亞力買買提1，管建華2，羅 影1， 郝敬喆1，賈文捷1，魏 鵬1

(1. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室，烏魯木齊 830091；2. 青河縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，新疆青河縣 836200)

利用生物學(xué)和ISSR(Inter simple sequence repeat)標(biāo)記技術(shù)對石河子地區(qū)12株野生阿魏菇的遺傳多樣性進(jìn)行研究，旨在為阿魏菇育種提供基礎(chǔ)材料和科學(xué)依據(jù)。結(jié)果顯示：在阿魏菇菌株菌絲培養(yǎng)特征方面，各菌株除在菌絲顏色和現(xiàn)原基方面無明顯差異外，在菌落形態(tài)、菌絲長勢等6項特征方面均有一定差異；拮抗試驗結(jié)果顯示，2株阿魏菇栽培菌株與石河子地區(qū)野生菌株均有較強(qiáng)拮抗反應(yīng)，大多數(shù)石河子地區(qū)野生菌株間有較強(qiáng)拮抗反應(yīng)；ISSR標(biāo)記共擴(kuò)增出52條DNA條帶，多態(tài)性條帶41條，多態(tài)比率為78.85%，供試菌株兩兩間的相異系數(shù)為0.11～0.59，在相異系數(shù)(D)為0.47時，可將14個供試菌株分為4個類群。表明石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株已開始發(fā)生遺傳分化，并具有一定的遺傳多樣性。

野生阿魏菇；遺傳多樣性；ISSR；聚類分析

阿魏菇(FeurotusferulaeLenzi)是新疆當(dāng)?shù)貙ιL在傘形花科阿魏屬植物根莖部的側(cè)耳屬野生菌的統(tǒng)稱[1-2]，其味道鮮美、質(zhì)地優(yōu)良，是一種食用和藥用價值都很高的珍稀食用菌，素有“天山神菇”、“草原上的牛肝菌”之美稱[3-4]。在中國，阿魏菇野生資源僅分布在新疆塔城、阿勒泰、石河子等地氣候惡劣的阿魏灘上，并選擇性地腐生或寄生在中藥阿魏的根莖部，分布量稀少[5-6]。近年，由于環(huán)境和人為因素，阿魏菇野生資源保有量急劇下降，一些區(qū)域的阿魏菇資源幾乎消失，亟待保護(hù)[7]。國內(nèi)多年生產(chǎn)的栽培菌株均來自新疆野生子實體的分離[8-9]，國內(nèi)栽培的阿魏菇存在菌株混亂、種性不穩(wěn)定、菌種退化等問題[10]。因此，明確阿魏菇野生資源的遺傳多樣性、生物學(xué)特性等問題，對阿魏菇新品種選育、種質(zhì)資源保護(hù)開發(fā)等具有重要意義。

周潔等[11]采用2種拮抗方法對35個毛木耳菌株進(jìn)行快速鑒定，表明拮抗試驗?zāi)芸焖俜从吵龉┰嚲甑倪z傳關(guān)系，并表示拮抗類別可分為隆起型、溝型、隔離型和菌絲差異型。王振河等[12]采用拮抗試驗對31個生產(chǎn)用白靈菇菌株進(jìn)行親緣關(guān)系分析，結(jié)果顯示有28個菌株之間都無拮杭反應(yīng)，表明國內(nèi)目前推廣的白靈菇菌株多數(shù)為同種異名，遺傳多樣性并不豐富。

李輝平[13]應(yīng)用ISSR分析白靈側(cè)耳、黑木耳等食用菌的遺傳多樣性，表明ISSR擴(kuò)增多態(tài)性高，用較少的引物即可得到多態(tài)性豐富的條帶，ISSR標(biāo)記技術(shù)可用于白靈側(cè)耳、黑木耳等菌株種質(zhì)遺傳多樣性分析和種質(zhì)評價。Du等[14]應(yīng)用ISSR分析毛木耳的遺傳多樣性，表明ISSR是食用菌種內(nèi)菌株鑒定鑒別和遺傳分析的良好標(biāo)記。趙夢然等[15]和Zhao等[16]應(yīng)用ISSR分析白靈側(cè)耳的遺傳多樣性，表明ISSR 產(chǎn)生的多態(tài)性位點比率和位點平均的預(yù)期雜合度的數(shù)值都較高，可作為野生白靈側(cè)耳種質(zhì)遺傳多樣性的分析手段。

本研究對新疆石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株進(jìn)行培養(yǎng)特征、拮抗反應(yīng)和ISSR標(biāo)記分析，旨在明確野生阿魏菇菌株的遺傳多樣性、生物學(xué)特征等，為阿魏菇育種提供基礎(chǔ)材料和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2株阿魏菇栽培菌株，庫存編號分別為Pl.x02(Genbank ID: KX149098 )和Pl.x05(Genbank ID: KX149099)，由青河縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心提供。12株野生菌株，采自新疆石河子地區(qū)阿魏灘，組織分離而來，保存于新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所。

1.2 供試培養(yǎng)基

PDA(Potato Dextrose Agar)培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g，補(bǔ)水至1 000 mL，pH≈7.0，115 ℃高壓蒸汽滅菌30 min。

PD(Potato Dextrose)加富培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，KH2PO43 g，MgSO41.5 g，蛋白胨10 g，補(bǔ)水至1 000 mL，pH≈7.0，115 ℃高壓蒸汽滅菌30 min。

1.3 試驗方法

1.3.1 菌絲培養(yǎng)特征 阿魏菇菌株取出后在PDA培養(yǎng)基平板上活化10 d，使用直徑9 mm打孔器沿菌落邊緣取相同菌齡接種物接種至PDA平板中央，每菌株設(shè)3個重復(fù)，于25 ℃暗培養(yǎng)。每天觀察菌絲生長情況，定期統(tǒng)計：菌絲顏色、菌落邊緣形態(tài)、菌絲長速、菌絲濃密度、氣生菌絲濃度、基內(nèi)菌絲濃度、菌絲長勢和現(xiàn)原基情況8項菌絲培養(yǎng)特征指標(biāo)。采用“十字”交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長速度[17]。

1.3.2 阿魏菇菌株平板對峙試驗[11]阿魏菇菌株在PDA培養(yǎng)基平板上活化10 d，用打孔器取直徑9 mm菌餅接種至PDA平板一側(cè)，采用同樣方法在同一PDA平板內(nèi)接種3個不同阿魏菇菌株的菌柄，3個菌柄平均分布在PDA平板內(nèi)，呈正三角形分布，兩兩間距為2 cm左右，每組處理3次重復(fù)，于25 ℃暗培養(yǎng)，定期觀察和統(tǒng)計各菌株的生長情況和菌株間拮抗反應(yīng)。

1.3.3 阿魏菇菌株ISSR標(biāo)記分析 菌絲體收集和DNA提?。豪肞D加富液體培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲體培養(yǎng)，菌絲量達(dá)到要求時用滅菌紗布過濾收集菌絲體，瀝干液體，自然晾干，用錫箔紙包好，于-20 ℃冰箱保存，待用。

采用試劑盒法提取阿魏菇菌株菌絲體DNA，試劑盒為HP Fungal DNA Kit (OMEGA USA)，10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量濃度，用滅菌的雙蒸水將樣品DNA質(zhì)量濃度調(diào)至30 ng/μL左右，-20℃冰箱保存，待用。

ISSR-PCR引物篩選：參照文獻(xiàn)[18]中ISSR-PCR反應(yīng)引物、反應(yīng)體系和反應(yīng)條件及方法進(jìn)行引物篩選[18]。

ISSR-PCR的反應(yīng)體系(25 μL)：DNA模板約30 ng，引物0.4 μmol/L，dNTPs 0.2 mmol/L，MgCl22 mmol/L，TaqDNA聚合酶 2 U，PCR緩沖液 1×。ISSR-PCR擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性1 min，48 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；最后72 ℃補(bǔ)平10 min。

引物篩選方法：選3株阿魏菇試驗菌株DNA進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用15 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測，熒光染料后置凝膠成像系統(tǒng)照相。將擴(kuò)增條帶數(shù)多、重復(fù)性好、強(qiáng)度較高、清晰可辨的譜帶所對應(yīng)的引物為目標(biāo)引物。

ISSR標(biāo)記多態(tài)性分析：利用篩選到的引物分別對DNA樣品進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用15 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠在凝膠成像儀上拍照，利用Image Lab 4.1泳帶分析軟件對電泳條帶進(jìn)行分析，將圖譜資料轉(zhuǎn)化成數(shù)字資料，有條帶記為1，無條帶記為0，構(gòu)建成“0/1”表型數(shù)據(jù)矩陣。

根據(jù)數(shù)據(jù)矩陣統(tǒng)計算出各引物的多態(tài)位點數(shù)、位點總數(shù)和多態(tài)位點百分率。多態(tài)位點百分率(P)的計算公式為：P=k/n×100%，式中：P為多態(tài)位點百分率，k為多態(tài)性位點數(shù)，n為測定的位點總數(shù)。

聚類分析：使用DPS 7.05軟件，對樣本進(jìn)行UPGMA聚類分析，生成遺傳距離聚類圖，根據(jù)聚類圖分析野生阿魏菇菌株間的遺傳多樣性及遺傳分化特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 阿魏菇菌株菌絲培養(yǎng)特征分析

對14個阿魏菇菌株的8項培養(yǎng)特征進(jìn)行測定，結(jié)果顯示(見表1)，各菌株菌絲顏色基本為白色，無明顯差異；PDA平板上，有7個菌株的菌落邊緣為圓形，較整齊，其他7株的菌落邊緣不整齊；各菌株間，在菌絲濃密度、基內(nèi)菌絲和氣生菌絲3個方面有一定遺傳差異；菌絲長勢方面，菌株P(guān)l.x67菌絲長勢最強(qiáng)，與部分菌株差異明顯，除Pl.x67菌株外其他菌株間差異不明顯；菌絲生長速度方面，對照菌株P(guān)l.x02、Pl.x05菌絲長速最慢，與菌株P(guān)l.x64、Pl.x69無顯著差異，但與其他10個野生菌株均有顯著差異；PDA平板上，25 ℃暗培養(yǎng)，所有菌株均未形成子實體原基。以上結(jié)果表明石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株已發(fā)生遺傳分化，具有一定的遺傳多樣性。

表1 阿魏菇菌株菌絲培養(yǎng)特征描述Table 1 Description of culture characteristics for ferula mushrooms

注：菌絲濃密度“+” 稀疏，“++” 一般，“+++” 濃; 基內(nèi)菌絲“+” 稀疏，“++” 一般，“+++” 濃; 氣生菌絲“+” 稀疏，“++” 一般，“+++” 濃; 菌絲長勢“+” 弱，“++” 一般，“+++” 強(qiáng)。

Note:Mycelial density “+” sparse，“++” medium，“+++” dense; Substrate hyphae “+” little，“++” medium，“+++” much; Aerial hyphae “+” little，“++” medium，“+++” much; Mycelium growth vigor “+” week，“++” medium，“+++” strong.

2.2 阿魏菇菌株平板對峙試驗分析

14個阿魏菇菌株兩兩間的平板對峙試驗，結(jié)果顯示(表2)，2個栽培菌株pl.x02和pl.x05間有強(qiáng)的拮抗反應(yīng)，拮抗類型為隔離型；2個栽培菌株與石河子地區(qū)所有野生阿魏菇菌株均有非常強(qiáng)的拮抗反應(yīng)，并均為隆起型；野生阿魏菇菌株pl.x60和pl.x61間無拮抗反應(yīng)，pl.x63、pl.x68和pl.x69三者間均無拮抗現(xiàn)象，其他石河子野生阿魏菇菌株間均有拮抗反應(yīng)，絕大多數(shù)為隆起型。以上結(jié)果表明石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株具有較明顯的遺傳分化現(xiàn)象。

表2 阿魏菇菌株間的拮抗反應(yīng)Table 2 Antagonistic reaction between ferula mushroom strains

注：拮抗類型為A.隆起型，B.隔離型; 拮抗強(qiáng)度：“-” 無拮抗，“+” 弱，“++” 一般，“+++” 強(qiáng)。

Note:Antagonistic type,A.ridgy，B.separate;Antagonistic intensity “+” week，“++” medium，“+++” strong.

2.3 阿魏菇菌株ISSR標(biāo)記分析

2.3.1 ISSR-PCR反應(yīng)引物的篩選 從16條隨機(jī)引物中初步篩選出6條適用于阿魏菇菌株ISSR-PCR擴(kuò)增的反應(yīng)引物(表3)。

2.3.2 ISSR標(biāo)記試驗 14個菌株的ISSR標(biāo)記試驗結(jié)果顯示(表4)， 6條引物共擴(kuò)增出52條較為清晰的DNA條帶，片段大小為100～2 000 bp，各個引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為6～11，平均條帶數(shù)約為9條，表明阿魏菇菌株存在較豐富的遺傳信息；14個菌株共擴(kuò)增出多態(tài)性DNA條帶41條，多態(tài)比率為78.85%，表明石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株具有一定的遺傳多樣性。

表3 ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)的引物Table 3 Primers of ISSR-PCR

表4 阿魏菇ISSR標(biāo)記多態(tài)性分析 Table 4 Polymorphic analysis generated from ISSR marker for ferula mushrooms

2.3.3 ISSR多態(tài)性分析 聚類結(jié)果顯示(圖1)，供試的14個菌株兩兩間的相異系數(shù)為0.11～0.59，在相異系數(shù)(D)為0.47水平上，可將14個供試菌株分為4個類群，2個栽培菌株可以與石河子地區(qū)野生菌株分開，分屬在第Ⅰ類群，其他3個類群分別包含7個、1個和4個菌株，表明石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株間遺傳關(guān)系較近，存在一定的遺傳多樣性和遺傳分化現(xiàn)象，但與對照菌株有較明顯的遺傳差異；pl.x60和pl.x61，及pl.x63、pl.x68和pl.x69三者，均各自聚在距離最近的一個類群中，表明具有更近的親緣關(guān)系，與平板對峙試驗結(jié)果相似。

3 討論與結(jié)論

可培養(yǎng)性和培養(yǎng)的良好生長是大型真菌利用的基本前提，對于野生種質(zhì)資源來說，野生菌株培養(yǎng)特征的差異也是遺傳背景差異的重要體現(xiàn)，培養(yǎng)特征為其提供快捷有效的種質(zhì)鑒定及利用的選擇標(biāo)識。本研究對新疆石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株的8個培養(yǎng)特征進(jìn)行研究分析，各菌株表現(xiàn)出一定的遺傳差異，在菌絲長速和菌絲長勢方面?zhèn)€別野生菌株與其他菌株差異顯著，表明該地區(qū)野生阿魏菇資源已開始出現(xiàn)遺傳分化現(xiàn)象，具有一定的遺傳多樣性。趙夢然等[19]對新疆野生阿魏蘑進(jìn)行培養(yǎng)特征多樣性分析，結(jié)果表明新疆野生阿魏蘑的培養(yǎng)特征在菌落形態(tài)、菌絲長勢等方面存在較大差異，但其使用的28個野生菌株中只有1株為石河子地區(qū)，其余菌株均為阿勒泰地區(qū)采集，該研究屬首次報道石河子地區(qū)野生阿魏菇的遺傳多樣性。

圖1 阿魏菇ISSR標(biāo)記的UPGMA聚類圖Fig.1 UPGMA dendrogram generated from ISSR marker for ferula mushrooms

拮抗性在食用菌學(xué)上特指一種微生物產(chǎn)生的代謝物質(zhì)使另一種微生物生長受抑制的現(xiàn)象，拮抗現(xiàn)象不僅發(fā)生在不同物種間，也可出現(xiàn)于同一物種的不同菌株間。在食用菌菌種選育中，有時兩個菌落間也會因互相抑制而出現(xiàn)不生長區(qū)，即形成所謂“拮抗線”，這是兩個具有不同遺傳基因菌落間的一種拮抗現(xiàn)象[20]。因此，拮抗試驗?zāi)芸焖俜从吵龉┰嚲甑挠H緣關(guān)系，可用于種質(zhì)資源的遺傳分化、鑒定等研究。本研究發(fā)現(xiàn)石河子地區(qū)野生阿魏菇菌株中，多數(shù)菌株間具有拮抗反應(yīng)，而部分菌株間無拮抗反應(yīng)，表明該區(qū)野生阿魏菇已開始發(fā)生遺傳分化現(xiàn)象。拮抗反應(yīng)能夠說明種質(zhì)菌株間是否存在遺傳分化，但不能夠表現(xiàn)出種質(zhì)菌株遺傳多樣性的豐富程度。

ISSR標(biāo)記技術(shù)是在SSR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的直接使用微衛(wèi)星序列進(jìn)行DNA擴(kuò)增的一項標(biāo)記技術(shù)，具有遺傳多態(tài)性高、信息量大、檢測快速、重復(fù)性好等優(yōu)點，近年被廣泛應(yīng)用于物種和種群遺傳多樣性、親緣關(guān)系分析、分子標(biāo)記輔助育種等研究領(lǐng)域[21]。本研究對14個阿魏菇菌株進(jìn)行ISSR標(biāo)記，結(jié)果顯示菌株兩兩間的相異系數(shù)為0.11～0.59，在相異系數(shù)(D)為0.47水平上，可將14個供試菌株分為4個類群，2個栽培菌株可以與石河子地區(qū)野生菌株分開，表明石河子地區(qū)野生阿魏菇具有一定的地域性和遺傳多樣性，而與栽培菌株具有較大遺傳差異。本研究采用的野生阿魏菇菌株為2012年至2014年在石河子地區(qū)阿魏灘野外采集組織分離而來，由于生存環(huán)境惡劣，人為因素影響，野生阿魏菇資源保有量非常稀少，因此現(xiàn)有野生菌株量較少，試驗樣本量偏少，在遺傳多樣性分析方面具有一定的局限性，有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。

本研究采用3種試驗方法，從培養(yǎng)特征、拮抗反應(yīng)和ISSR標(biāo)記3個方面對石河子地區(qū)野生阿魏菇種質(zhì)菌株進(jìn)行遺傳多樣性分析，3種方法各有側(cè)重。培養(yǎng)特征可以直觀的體現(xiàn)菌株的生長狀態(tài)和形態(tài)，提供的信息量與選擇的檢測指標(biāo)多少和有效性有關(guān)，拮抗反應(yīng)能夠直接表現(xiàn)出菌株間的遺傳分化情況，但提供的信息量有限，而ISSR標(biāo)記不僅能夠體現(xiàn)出菌株間的親緣關(guān)系及其遠(yuǎn)近，而且能夠挖掘出更多的遺傳信息，對指導(dǎo)種質(zhì)鑒定、遺傳育種等具有重要意義。3種方法相互補(bǔ)充，研究結(jié)果具有一定的相關(guān)性，最終結(jié)果表明石河子地區(qū)野生阿魏菇已開始發(fā)生遺傳分化，并具有一定的遺傳多樣性。

Reference：

[1] ZHANG J X,HUANG CH Y,WANG H X,etal.Genetic polymorphism of ferula mushroom growing onFerulasinkiangensis[J].AppliedMicrobiologyandBiotechnology,2006,71(3):304-309.

[2] 陳忠純.阿魏側(cè)耳的研究[J].干旱區(qū)研究,1991(2):94-95.

CHEN ZH CH.Study ofPleurotuseryngii(Dc.ex Fr.Quelet) [J].AridZoneResearch,1991(2):94-95(in Chinese).

[3] 戴玉成,周麗偉,楊祝良,等.中國食用菌名錄[J].菌物學(xué)報,2010,29:1-21.

DAI Y CH,ZHOU L W,YANG ZH L,etal.A revised checklist of edible fungi in China[J].Mycosystema,2010,29:1-21(in Chinese with English abstract).

[4] 黃年來.18種珍稀美味食用菌栽培[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997:6-10.

HUANG N L.Eighteen Species of Cultivated Mushroom [M].Beijing:Chinese Agriculture Press,1996(in Chinese).

[5] 馮作山,胡清秀,張瑞穎,等.白靈側(cè)耳研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報,2010,17(3):73-77.

FENG Z SH,HU Q X,ZHANG R Y,etal.Present status and future prospects ofPleurotusnebrodensis[J].ActaEdulisFungi,2010,17(3):73-77(in Chinese with English abstract).

[6] 陳忠純.我國阿魏側(cè)耳的馴化與栽培[J].食用菌學(xué)報,1996,3(4):11-14.

CHEN ZH CH.The domestication and cultivation ofPleurotusferulaein China[J].ActaEdulisFungi,1996,3(4):11-14(in Chinese with English abstract).

[7] 武紅旗,李志宏,范燕敏,等.新疆阿魏菇及其發(fā)展展望[J].食用菌,2004(1):7-8.

WU H Q,LI ZH H,FAN Y M,etal.Ferula mushroom of Xinjiang and its development prospects [J].EdibleFungi,2004(1):7-8(in Chinese).

[8] 張金霞,黃晨陽,張瑞穎,等.白靈菇中農(nóng)1號特征特性和栽培技術(shù)要點[J].食用菌學(xué)報,2010,17(3) :87-89.

ZHANG J X,HUANG CH Y,ZHANG R Y,etal.Characteristics and special cultivation requirements of Zhongnong No.1,a new cultivar ofPleurotuseryngiivar.tuoliensisC.J.Mou[J].ActaEdulisFungi,2010,17(3) :87-89(in Chinese with English abstract).

[9] 賈身茂,秦 淼.我國白阿魏蘑的馴化與栽培[J].中國食用菌,2006,25(3):3-7.

JIA SH M,QIN M.Domestication and cultivation ofPleurotusnebrodensisin China[J].EdibleFungiofChina,2006,25(3):3-7(in Chinese with English abstract).

[10] 張金霞,黃晨陽,張瑞穎,等.中國栽培白靈側(cè)耳的RAPD和IGS分析[J].菌物學(xué)報,2004,23(4):514-519.

ZHANG J X,HUANG CH Y,ZHANG R Y,etal.RAPD and IGS analysis ofPleurotusnebrodensiscultivars in China[J].Mycosystema,2004,23(4):514-519(in Chinese with English abstract).

[11] 周 潔,王 波,譚 偉,等.應(yīng)用兩種頡頏方法快速鑒別35株毛木耳菌株[C].第十屆全國食用菌學(xué)研討會會議論文集,北京,2013:185-190.

ZHOU J,WANG B,TAN W,etal.Analysis of 35Auriculariapolytrichastrains with antagonistic effect[C].The Tenth National Edible Mycology Proseminar Conference Proceedings,Beijing,2014:185-190(in Chinese with English abstract).

[12] 王振河,王斌武,忠 偉,等.31個白靈菇菌株的培養(yǎng)特性及親緣關(guān)系初探[J].食用菌,2007(3):20-22.

WANG ZH H,WANG B W,ZHONG W,etal.Preliminary study on culrural characteristics and genetic relationship of 31Pleurotuseryngiistrains[J].EdibleFungi,2007(3):20-22(in Chinese).

[13] 李輝平.ISSR在食用菌遺傳多樣性研究中的應(yīng)用[D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2007:30-36.

LI H P.Genetic diversity analysis of mushroom using a novel molecular marker inter-simple sequence repeats[D].Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences,2007:30-36(in Chinese with English abstract).

[14] DU P,CUI B K,DAI Y C.High genetic diversity in wild culinary-medicinal wood ear mushroom,Auriculariapolytricha(Mont.) Sacc.in tropical China revealed by ISSR analysis[J].InternationalJournalofMedicinalMushrooms,2011,13:289-298.

[15] 趙夢然,陳 強(qiáng),張金霞,等.IGS2-RFLP、SCoT和ISSR在白靈側(cè)耳遺傳多樣性分析中的比較研究[J].菌物學(xué)報,2013,32(4):682-689.

ZHAO M R,CHEN Q,ZHANG J X,etal.Comparison studies of genetic diversity ofPleurotuseryngiivar.tuoliensisby IGS2-RFLP,SCoT and ISSR markers[J].Mycosystema,2013,32(4):682-689(in Chinese with English abstract).

[16] ZHAO M R,HUANG CH Y,ZHANG J X,etal.Genetic variability and population structure of the mushroomPleurotuseryngiivar.tuoliensis[J].PlosOne,2013,8(12):e83253.

[17] 曲 明,王 波,李 玉.桑黃菌種生長條件的研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2013,26(5)2173-2175.

QU M,WANG B,LI Y.Growth conditions ofInonotussanghuangculture[J].SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences,2013,26(5)2173-2175(in Chinese with English abstract).

[18] 朱 堅.食用菌品種特性與栽培 [M].福建:福建科學(xué)技術(shù)出版社,2011:18-22.

ZHU J.Species Characteristics and Cultivation of Edible Fungi[M].Fujian:Fujian Science and Technology Press,2011:18-22(in Chinese).

[19] 趙夢然,李遠(yuǎn)東,黃晨陽,等.新疆野生阿魏蘑的IGS2-RFLP及培養(yǎng)特征多樣性分析[J].菌物學(xué)報,2015,34(4):612-620.

ZHAO M R,LI Y D,HUANG CH Y,etal.Genetic diversity analysis of wild ferula mushroom based on IGS2-RFLP markers and cultural characteristics[J].Mycosystema,2015,34(4):612-620(in Chinese with English abstract).

[20] 賈定洪,王 波,鄭林用,等.應(yīng)用拮抗及ISSR方法鑒定袋料香菇菌株[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2013,26(2):832-834.

JIA D H,WANG B,ZHENG L Y,etal.Identification of isolate fromLentinusedodescultivation bags with antagonism and ISSR[J].SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences,2013,26(2) :832-834(in Chinese with English abstract).

[21] 李輝平,張金霞,黃晨陽,等.ISSR技術(shù)及其在遺傳多樣性研究中的應(yīng)用[J].菌物學(xué)報,2004,24:151-153.

LI H P,ZHANG J X,HUANG CH Y,etal.Inter simple sequence repeat(ISSR) and application in the research of genetic dibersity[J].Mycosystema,2004,24:151-153(in Chinese with English abstract).

(責(zé)任編輯：史亞歌 Responsible editor:SHI Yage)

Genetic Diversity of Wild Ferula Mushroom Strains from Shihezi Area in Xinjiang

JIA Peisong1, Nurziya·Yarmamat1, GUAN Jianhua2, LUO Ying1, HAO Jingzhe1, JIA Wenjie1and WEI Peng1

(1. Institute of Plant Protection, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northwestern Oasis，Ministry of Agriculture of P. R. China, Urumqi 830091,China; 2. Agricultural Technology Extension Center of Qinghe County,Qinghe Xinjiang 836200,China)

In order to provide basic materials and scientific basis for further breeding of ferula mushroom, the genetic diversity of 12 wild ferula mushroom collected from Shihezi in Xinjiang were analyzed by cultural characteristics and ISSR markers. The observation of cultural characteristics demonstrated some differences among tested samples in colonial morphology, mycelium growth vigor and so on, but none of them in the colonial color and primordium. Obvious antagonistic reactions were observed between two artificially cultivated strains and wild strains and they also occurred among the most wild strains from Shihezi. ISSR produced 52 DNA bands, 41 of which were polymorphic. The percentage of polymorphic bands from ISSR markers was 78.85%. Cluster analysis showed that the 14 strains of ferula mushroom could be divided into 4 groups at the level ofD=0.47.The results showed that natural populations of ferula mushrooms from Shihezi had experienced genetic differentiation, and had certain genetic diversity.

Wild ferula mushroom; Genetic diversity; ISSR; Cluster analysis

JIA Peisong, male, assistant research fellow. Research area:edible fungus.E-mail:jps-fly@163.com

WEI Peng, male, senior agronomist. Research area:edible fungus.E-mail:xjzbswp@126.com

2016-01-31

2016-02-28

野生阿魏菇種質(zhì)資源保藏與遺傳多樣性研究平臺建設(shè)(PT1505)；自治區(qū)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)經(jīng)費(KY2014035)；農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室開放基金(KFJJ20150105)。

賈培松，男，助理研究員，研究方向為食用菌資源。E-mail:jps-fly@163.com

魏 鵬，男，高級農(nóng)藝師，研究方向為食用菌資源。E-mail:xjzbswp@126.com

日期：2016-12-20

S646；S188

A

1004-1389(2017)01-0152-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20161220.1645.038.html

Received 2016-01-31 Returned 2016-02-28

Foundation item The Platform Project for Preservation of Wild Ferula Mushroom Germplasm Resource and Study of Genetic Diversity (No. PT1505); Public Scientific Research Fund for Basic Scientific Research Project in Xinjiang (No.KY2014035)；the Open Fund of Key Laboratory of Integrated Management of Hormful Crop Vermin in China Northwest Oasis(No.KFJJ20150105).