戴 一，朱向群，吳靈剛

（新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽合肥 230088）

烏靈參化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展*

戴 一，朱向群，吳靈剛

（新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽合肥 230088）

烏靈參；化學(xué)成分；藥理作用；臨床應(yīng)用

烏靈參（XN）又叫雷震子，因皮色烏黑、用之靈驗(yàn)有效而得名，為炭角菌科黑柄炭角菌Xylaria nigripes (KI.) Sacc的菌核，主產(chǎn)四川、云南等地，在臺灣地區(qū)也有報(bào)道[1]。XN性溫、味微苦，具有益氣補(bǔ)血的作用，被《四川中藥志》所收載，民間用其除濕、鎮(zhèn)驚、止心悸、催乳、補(bǔ)腎、安眠等[2]。早期研究主要集中于XN的臨床研究，趙聰格等[3]、王嘉麟等[4]在治療抑郁癥、焦慮性失眠、神經(jīng)調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)等方面亦進(jìn)行了綜述。近年來，XN研究較為活躍，在多個(gè)方面取得了一定進(jìn)展，本文從XN化學(xué)成分、藥理活性及臨床應(yīng)用等方面進(jìn)行綜述，以期為XN的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 化學(xué)成分

XN所含成分主要為多糖、腺苷、氨基酸、微量元素及蛋白等[5-6]。關(guān)于蛋白成分，1993年，Sreerama和Veerabhadrappa從XN中分離獲得了羧酸酯水解酶FE-Ⅰ、FE-Ⅱ、FE-Ⅲ和FE-Ⅳ，酯酶活性較高，等電點(diǎn)分別為5.1、5.25、5.4和5.6。FE-Ⅰ和FE-Ⅱ相對分子量約為78.5kDa，F(xiàn)E-Ⅲ和FE-Ⅳ約為78.5kDa，這四種酶為同源二聚體，其亞基通過非共價(jià)鍵相連[7]。

對于XN中所含的小分子單體成分，2008年，Gong等[8]從XN中首次分離出5-羥基-7-甲氧基-2-甲基-4-二氫色原酮(1)、5,7-二羥基-2-甲基-4-二氫色原酮(2)、5-羥基-2-甲基-4-二氫色原酮(3)、1-(2,6-二羥基苯)-3-羥基-丁酮(4)、5α,8α-過氧化麥角甾-6,22-二烯-3β-醇(5)、麥角甾-7,22-二烯-3β-5α,6β-三醇(6)、大戟醇(7)、β-谷甾醇(8)、2-(4-羥基苯)-乙醇(9)等9個(gè)單體成分，其中化合物1、2為首次分離到的天然產(chǎn)物。2015年，Li等[9]對XN的化學(xué)成分的研究取得新進(jìn)展，分離出兩個(gè)新的化學(xué)單體xylapyrrosides A（10）和B（11）及兩個(gè)已知化合物pollenopyrrosides A（12）和B（13），這些單體擁有獨(dú)特的2-甲酰基吡咯稠合嗎啉環(huán)的三環(huán)骨架，均為螺環(huán)吡咯生物堿，在天然產(chǎn)物中非常稀少，且xylapyrrosides A、B分別與pollenopyrrosides A和B兩兩成鏡像關(guān)系；同時(shí)，Li等的課題組首次完成了帶有吡喃糖環(huán)的螺酮縮醇生物堿的合成，全合成出化合物10、11、13和3個(gè)新的類似物xylapyrrosides A1（14）、A2 (15)和B1(16)。此外，XN還含有香豆素成分8-二羥基-3-甲基-3，4-二氫異香豆素[10]。

2 藥理活性

2.1 抗氧化作用 對XN藥理活性的研究，近年來多集中在抗氧化活性方面。XN水提物具有抗氧化活性，尤其是菌絲體胞內(nèi)多糖具有很強(qiáng)的還原能力，其螯合鐵離子能力、ABTS自由基清除能力和DPPH自由基清除能力的IC50值分別為141.2、174.25和351.56ng/ml[11]。另外，栽培XN及市售XN產(chǎn)品（XNP）抗氧化活性不同，對栽培XN及XNP分別采用水和乙醇提取，提取物分別記為XN水提物（XN-H）、XNP水提物（XNP-H）、XN乙醇提取物（XN-E）和XNP乙醇提取物（XNP-E）。對于抗氧化活性，無論水提還是乙醇提取，XN提取物的抗氧化活性和自由基清除能力均強(qiáng)于XNP提取物，但所有提取物的金屬離子螯合能力和還原能力均較弱[12]。XN-H（IC50 6.20μg/ml）和XN-E(IC50 5.41μg/ml)的抗氧化活性強(qiáng)于Trolox（IC50 19.64μg/ml）和維生素C（IC50 26.39μg/ml），而XNP提取物的抗氧化活性均弱于Trolox和維生素C。在超氧自由基清除方面，XN-E(IC50 5.12μg/ml)、XNP-E（IC50 8.89μg/ml）與Trolox(IC50 6.94μg/ml)和維生素C（IC50 4.25μg/ml）的活性類似；XN提取物的DPPH自由基清除能力弱于Trolox和維生素C，但約是XNP提取物的8倍；對于ABTS自由基清除能力，XN和XNP提取物均較弱。

在上述提取物中，XN-E提取物的總黃酮含量（32.69mg/g）和酚類含量（59.75mg/g）最高，XNP-H的多糖含量最高，XN-E具有最強(qiáng)的抗氧化活性和自由基清除能力與其較高含量的多酚有關(guān)，而不是多糖[12]。對于XN的DPPH自由基清除活性的具體物質(zhì)基礎(chǔ)，Wu[10]從XN中獲得了5,8-二羥基-3-甲基-3,4-二氫異香豆素，該物質(zhì)在20μmol/L濃度時(shí)的DPPH自由基清除能力是維生素C的1.67倍，是維生素E的2.10倍。另外，XN的化學(xué)單體xylapyrrosides A和B及pollenopyrrosides A和B也顯示出溫和的抗氧化活性[9]。

2.2 造血及降血糖活性 XN顯示出的血液系統(tǒng)活性主要為造血功能。給失血50%的大鼠灌服XN及FeSO4(加維生素C)10d，每隔一天檢查血象l次，共12次，發(fā)現(xiàn)給藥期間XN組紅細(xì)胞（RBC）和血紅蛋白（Hb）的增長率明顯高于對照組，但與FeSO4組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同時(shí)，XN還能明顯縮短RBC和Hb恢復(fù)至放血前90%水平所需要時(shí)間[13]。XN還具有降血糖作用，Chen等[14]研究發(fā)現(xiàn)，XN水提物對正常Wistar大鼠和類固醇激素性胰島素抵抗(SIIR)大鼠均具有降血糖作用，給藥60min后，正常Wistar大鼠血糖降低21%，SIIR大鼠血糖降低26%。另外，對于SIIR大鼠，胰島素受體底物-1和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4的信號蛋白分別增加0.51倍和1.12倍，血漿中游離脂肪酸含量不變，而5-HT受體拮抗劑（對氯苯丙氨酸）可阻斷XN水提物的降血糖作用。因此提示，XN水提物對正常Wistar大鼠和SIIR大鼠均有降血糖作用，對SIIR大鼠的降血糖作用可能與5-HT相關(guān)，可提高SIIR大鼠對胰島素的敏感性。

2.3 抗炎保肝作用 XN提取物具有免疫調(diào)節(jié)活性。用1μg/ml脂多糖(LPS)誘導(dǎo)Balb/c小鼠腹膜巨噬細(xì)胞，以5-30μg/ml的XN-H或XN-E處理時(shí)，對巨噬細(xì)胞沒有細(xì)胞毒作用，但在上述濃度條件下，XN-H和XN-E對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮（NO）、PGE2、IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ均有劑量依賴性的抑制作用，而且XN-H處理組活性強(qiáng)于XN-E處理組。另外，XN-H提取物對iNOS與COX-2 RNA表達(dá)、LPS-誘導(dǎo)IκB-α磷酸化及NF-κB激活的抑制作用均強(qiáng)于XN-E[15]。由于二者所含物質(zhì)的區(qū)別，XN-H比XN-E具有更強(qiáng)的抗炎活性，其機(jī)制可能是通過NF-κB信號途徑抑制iNOS和COX-2的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，物質(zhì)基礎(chǔ)可能是β-葡聚糖[15]。Song等[16]分別以500mg/kg和1000mg/kg的劑量連續(xù)9天灌胃小鼠XN-H，然后皮下注射2ml/kg的40% CCl4橄欖油溶液，結(jié)果兩個(gè)劑量給藥組均能阻止血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（sGOT）、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（sGPT）和肝硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)（TBARS）水平的升高，并能提高肝超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）的濃度及增強(qiáng)CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠血清的總抗氧化活性，保肝作用類似水飛薊素。這個(gè)結(jié)果顯示XN提取物能有效保護(hù)CCl4誘導(dǎo)的肝損傷，其機(jī)制可能與抗氧化作用有關(guān)。

2.4 其它作用 有研究發(fā)現(xiàn)，XN提取物可緩解大鼠快動眼睡眠剝奪誘導(dǎo)的空間記憶障礙，海馬區(qū)的CREB磷酸化可能是其機(jī)制之一[17]。此外，XN提取物還具有較強(qiáng)的殺滅蚊子幼蟲的能力，體現(xiàn)了XN藥理作用的多樣性[18]。

3 臨床應(yīng)用

3.1 治療失眠 治療失眠是XN的主要臨床應(yīng)用之一。彭利芬[19]對100例手術(shù)后失眠癥患者采用烏靈膠囊進(jìn)行治療，總有效率達(dá)到94%，證實(shí)了烏靈膠囊治療失眠的有效性。對于烏靈膠囊治療失眠的有效性和安全性，一個(gè)多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照實(shí)驗(yàn)（92個(gè)志愿者服用安慰劑，84個(gè)志愿者服用烏靈膠囊，連續(xù)服用4周，接著進(jìn)行2周隨訪）發(fā)現(xiàn)，治療前后烏靈膠囊組、安慰劑組匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)（PSQI）和世界衛(wèi)生組織生存質(zhì)量測定量表簡表指標(biāo)（WHOQOL-BREF）明顯提高，但組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，烏靈膠囊組和安慰劑組不良反應(yīng)率分別為10.10%和6.73%。該結(jié)果僅能說明烏靈膠囊組通過4周用藥可以改善失眠癥狀，且耐受性良好，由于與安慰劑組相比無明顯差別，需進(jìn)一步臨床試驗(yàn)驗(yàn)證[20]。

3.2 治療抑郁癥 郭慧榮等[21]對34例青少年適應(yīng)障礙患者給予口服烏靈菌粉治療，治療6周后，抑郁自評量表、焦慮自評量表評分較治療前明顯下降；病情嚴(yán)重程度、療效總評和療效指數(shù)較治療前明顯下降，且全部患者無明顯副反應(yīng)，可見烏靈菌粉治療青少年適應(yīng)障礙安全、有效。

腦卒中后抑郁是腦卒中患者常見并發(fā)癥之一。萬愛蘭等[22]將70例腦卒中后抑郁患者隨機(jī)分為賽洛特+烏靈膠囊組、賽洛特對照組，結(jié)果烏靈膠囊聯(lián)合賽洛特治療起效快，可明顯改善腦卒中后抑郁障礙的程度，并能促進(jìn)神經(jīng)功能康復(fù)，不良反應(yīng)較少且輕微。

對于XN治療伴隨癲癇的抑郁癥患者的有效性和安全性，采用多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照的方式進(jìn)行12周治療，104例伴有癲癇的抑郁癥患者隨機(jī)分為XN組和安慰劑組，志愿者在治療的第0、2、4、8和12周隨訪，81人完成隨訪，該研究主要療效終點(diǎn)是抑郁癥總有效率，治療12周后XN組（51.3%，n=39）比安慰劑組（35.7%，n=42）顯著有效；對于癲癇的發(fā)作頻率和嚴(yán)重性，XN組和安慰劑組比較無明顯差別；此外，伴隨癲癇的抑郁癥患者生活質(zhì)量和發(fā)作擔(dān)憂得分，XN組高于安慰劑組，且大部分患者不良反應(yīng)較輕。提示XN能減輕抑郁癥癥狀，且患者耐受性良好[23]。

另外，有專利保護(hù)了XN與箭葉秋葵、滇藏方枝柏等組成復(fù)方治療陰虛的抑郁癥患者[24]，與白芍、全蝎組方亦可治療抑郁癥，且療效顯著[25]。由此可見,XN對治療抑郁癥具有良好的應(yīng)用前景，且日益受到關(guān)注。

3.3 治療前列腺增生 XN還可以治療前列腺增生。例如：XN膠囊治療32例前列腺增生癥的臨床癥狀總有效率為96.9%，B超檢查前列腺體積明顯縮?。◤那傲邢俅笮∵M(jìn)行評價(jià)，總有效率為71.9%），綜合評價(jià)總有效率為90.6%。XN膠囊長期服用除無副作用外，尚有提高血紅蛋白及免疫功能的作用，絕大多數(shù)患者服用后自覺精力充沛、精神飽滿、食欲增加、睡眠時(shí)間延長，因此，對治療前列腺增生亦有輔助作用[26]。還有專利報(bào)道XN可與莪術(shù)、浙貝母等組方治療前列腺炎和前列腺增生[27]，與靈芝、龜殼、珍珠粉等10種中藥組合治療腎病等[28]。

4 小結(jié)

烏靈參作為一種名貴藥材，對其化學(xué)成分的研究較少，且沒有系統(tǒng)性，但有研究發(fā)現(xiàn)，烏靈參中除含有常見成分外，尚含有天然產(chǎn)物中非常稀少且獨(dú)特的2-甲?；量┏砗蠁徇h(huán)的三環(huán)骨架。因此，深入開展烏靈參化學(xué)成分的系統(tǒng)研究對于發(fā)現(xiàn)烏靈參的新活性、開發(fā)其藥用價(jià)值具有重要意義。對于烏靈參藥理作用的研究，近年來主要局限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，盡管在抗氧化活性及造血、護(hù)肝等方面進(jìn)行了探索，但沒有特色成果，還有待進(jìn)一步深入研究烏靈參的藥理作用。

[1]Ju YM, Hsieh HM. Xylaria species associated with nests of odontotermes formosanus in Taiwan[J]. Mycologia,2007,99(6):936-957.

[2]劉繼林.補(bǔ)藥烏靈參[J].成都中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1983,6(2):54-55.

[3]趙聰格,蘇秀霞,張濤,等.烏靈膠囊臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].臨床合理用藥,2012,5(2B):135.

[4]王嘉麟,郭蓉娟,王玉來.烏靈參的藥理作用及應(yīng)用進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2010,3(2):150-152.

[5]陳宛如,方鴻峰,馬志章,等.真菌中藥烏靈參化學(xué)成分的初步研究[J].中國藥學(xué)雜志,1990,25(11):648-649.

[6]鐘榮華,徐水法.HPLC測定烏靈菌粉中腺苷含量[J].中國中藥雜志,2003,28(7):679-680.

[7]Sreerama L,Veerabhadrappa PS.Isolation and properties of carboxylesterases of the termite gut-associated fungus,Xylaria nigripes.K.,and their identity from the host termite, Odentotermes horni.W.,mid-gut carboxylesterases[J].Int J Biochem,1993,25(11): 1637-1651.

[8]龔慶芳,張玉梅,譚寧華,等.黑柄炭角菌發(fā)酵菌絲體的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2008,33(11):1269-1272.

[9]Li M, Xiong J, Huang Y, et al. Xylapyrrosides a and b, two rare sugar-morpholine spiroketal pyrrole-derived alkaloids from xylaria nigripes: Isolation, complete structure elucidation, and total syntheses[J].Tetrahedron,2015,71(33):5285-5295

[10]Wu G.A study on dpph free-radical scavengers from xylaria nigripes [J].Wei Sheng Wu Xue Bao,2001,41(3):363-366.

[11]Hung MC,Tsai CC,Hsu TH,et al.Biological activities of the polysaccharides produced from different sources of xylaria nigripes (ascomycetes),a Chinese medicinal fungus[J].Int J Med Mushrooms,2015,17(2):141-150.

[12]Ko HJ,Song A,Lai MN,et al.Antioxidant and antiradical activities of wu ling shen in a cell free system[J].Am J Chin Med,2009,37(4): 815-828.

[13]馬志章，查士雋，虞研原，等.烏靈參對貧血大鼠造血功能的影響[J].科技通報(bào)，1992，8（4):252-254.

[14]Chen YI,Tzeng CY,Cheng YW,et al.The involvement of serotonin in the hypoglycemic effects produced by administration of the aqueous extract of xylaria nigripes with steroid-induced insulinresistant rats[J].Phytother Res,2015,29(5):770-776.

[15]Ko HJ,Song A,Lai MN,et al.Immunomodulatory properties of xylaria nigripes in peritoneal macrophage cells of balb/c mice[J].J Ethnopharmacol,2011,138(3):762-768.

[16]Song A,Ko HJ,Lai MN,et al.Protective effects of wu-ling-shen(xylaria nigripes) on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice[J].Immunopharmacol Immunotoxicol,2011,3（33）: 454-460.

[17]Zhao Z,Li Y,Chen H,et al.Xylaria nigripes mitigates spatial memory impairment induced by rapid eye movement sleep deprivation[J]. Int J Clin Exp Med,2014,7(2):356-362.

[18]Thongwat D, Pimolsri U, Somboon P. Screening for mosquito larvicidal activity of thai mushroom extracts with special reference to steccherinum sp against aedes aegypti (L.) (diptera: culicidae)[J]. Southeast Asian J Trop Med Public Health,2015,46(4):586-595.

[19]彭利芬.烏靈膠囊治療手術(shù)后失眠癥100例效果觀察[J].河南外科學(xué)雜志,2015,21(2):130.

[20]Lin Y,Wang XY,Ye R,et al.Ef fi cacy and safety of wuling capsule, a single herbal formula,in chinese subjects with insomnia:A multicenter, randomized,double-blind,placebo-controlled trial[J].J Ethnopharmacol, 2013,145(1):320-327.

[21]郭慧榮,任玉明.烏靈菌粉治療青少年適應(yīng)障礙的效果及安全性[J].中國臨床康復(fù),2006,10(15）：45-47.

[22]萬愛蘭,袁也豐.烏靈膠囊與賽洛特治療腦卒中后抑郁障礙的療效對照[J].中國臨床康復(fù),2006,10（31):4-6.

[23]Peng WF,Wang X,Hong Z,et al.The anti-depression effect of xylaria nigripes in patients with epilepsy:A multicenter randomized double-blind study[J].Seizure,2015,29:26-33.

[24]臧海陽.一種治療陰虛火旺型抑郁癥的中藥組合物[P].中國, CN104606558A,2015-05-13.

[25]柏躍龍.一種治療抑郁癥的中藥組合物[P].中國,CN104491760A, 2015-04-08.

[26]許瑞珠,馬志章,陳宛如.烏靈參膠囊治療前列腺增生癥臨床觀察[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,1994,4（2):11-12.

[27]陳建,羅艷萍,董調(diào)雅,等.治療前列腺炎、前列腺增生的藥物組合物及其制備方法和制劑[P].中國，CN101596303A, 2009-12-09.

[28]程中華.一種治療腎病的藥物[P].中國,CN102670983A,2012-09-19.

(綜述講座欄目編輯：張玉亭)

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1004-6879（2017）03-0249-04

2016-10-24）

* 國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201512216001）