戴 一,朱向群,吳靈剛
(安徽新華學院藥學院,安徽合肥 230088)
烏靈參為炭角菌科黑柄炭角菌Xylaria nigripes (KI.) Sacc的菌核,據(jù)《四川中藥志》記載,該藥材主產(chǎn)于四川、云南等地,性溫,味微苦,能益氣補血,民間主要用于鎮(zhèn)靜、安眠、補腎等[1]。烏靈參所含化學成分豐富,主要包括多糖、酚類、萜類及生物堿等[2]?,F(xiàn)代藥理學研究表明,烏靈參除具有鎮(zhèn)靜催眠作用外,還具有抗氧化[3]、降血糖[4]及抗炎保肝等作用[5]。但目前對烏靈參產(chǎn)生鎮(zhèn)靜催眠作用的具體成分研究較少,其鎮(zhèn)靜催眠有效部位的研究亦未見報道。為揭示烏靈參鎮(zhèn)靜催眠作用的物質基礎,本研究采用不同濃度乙醇對烏靈參進行超聲提取,并將提取物給予小鼠灌胃,觀察小鼠外觀行為及與戊巴比妥的協(xié)同作用,以期為確定烏靈參鎮(zhèn)靜催眠的有效部位提供依據(jù)。
1.1 儀器 PT-10435s型電子天平(天津市順諾儀器科技有限公司),CB3201數(shù)字描記式小動物測定儀(中國川北電子工業(yè)公司設計制造),CJ-060S超聲清洗儀(深圳市超潔科技實業(yè)有限公司),IKA RV8 V旋轉蒸發(fā)儀(艾卡(廣州)儀器設備有限公司),DZF-6050A型真空干燥箱(上海坤天儀器有限公司)。
1.2 藥材與實驗動物 烏靈參,購于亳州藥材市場,產(chǎn)地四川,經(jīng)安徽新華學院陸松霞老師鑒定為Xylaria nigripes(KI.)Sacc的菌核。實驗動物:昆明種小鼠,18g~22g,雌雄各半,由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供(合格證號:皖醫(yī)實動準字第01號) 。
2.1 各極性部位樣品溶液的制備 稱取烏靈參粉末(過4號篩)5份,每份50.0g,分別用不同濃度乙醇(100%乙醇、75%乙醇、50%乙醇、25%乙醇、水)超聲提取,固液比為1g:10ml,每份用同種濃度乙醇提取3次,每次30min,提取液合并濃縮成浸膏狀在60℃真空干燥48h,得不同濃度乙醇提取物,計算得膏率。結果:各組得膏率均在10%以上,且隨著乙醇濃度的增加,得膏率逐漸降低;乙醇濃度達到50%以后,得膏率降低并不明顯。見表1:
表1 烏靈參醇提物得膏率
2.2 小鼠自主活動實驗[6]昆明種小鼠60只,隨機分成6 組,每組10只,即空白對照組、100%乙醇提取物組、75%乙醇提取物組、50%乙醇提取物組、25%乙醇提取物組、水提取物組。各組小鼠灌胃給藥(稱取適量浸膏以生理鹽水溶解,給藥容積0.5ml/20g,給藥劑量5.0g提取物/kg),空白對照組給予生理鹽水,其余各組給予受試藥物。給藥30min后測定10min內(nèi)小鼠自主活動次數(shù)。結果:與其它各組比較,烏靈參100%乙醇提取物組能明顯減少小鼠自主活動次數(shù),說明該劑量下烏靈參100%乙醇提取物對小鼠具有明顯鎮(zhèn)靜作用,為烏靈參鎮(zhèn)靜作用的有效部位。見表2:
表2 烏靈參不同濃度乙醇提取組對小鼠自主活動的影響(±s , n=10)
組別 劑量(提取物 g/kg) 10min內(nèi)活動次數(shù)空白對照組 -- 164.6±18.3水提取物組 5.0g 155.3±17.1 25%乙醇提取物組 5.0g 150.4±23.7 50%乙醇提取物組 5.0g 138.1±19.8 75%乙醇提取物組 5.0g 113.9±21.3無水乙醇提取物組 5.0g 100.8±24.1
2.3 對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量下小鼠的催眠作用[7]另取小鼠40只,隨機分組為2組,空白對照組和100%乙醇提取物組,每組20只。小鼠灌胃(劑量、容積同2.2)給藥30min后,分別腹腔注射30mg/kg戊巴比妥鈉,觀察30min各組小鼠入睡率(以翻正反射消失達1min以上為入睡)。結果:烏靈參100%乙醇提取物可明顯增加閾下劑量戊巴比妥鈉引起的小鼠入睡率。見表3:
表3 烏靈參100%乙醇提取組對小鼠入睡的影響(n=20)
烏靈參作為一種名貴藥材,主要用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療,但其藥理作用物質基礎的研究較少。本研究采用不同濃度乙醇提取烏靈參,發(fā)現(xiàn)各組得膏率在均在10%以上,且隨著乙醇濃度的增加,得膏率逐漸降低。有文獻報道,烏靈參中含多糖、酚類、萜類及生物堿等化學成分[2]。同時,烏靈參中還含有一些初級代謝產(chǎn)物,這些成分大多極性較大,在水中有較好的溶解度,因此,低濃度乙醇有較好的得膏率。本研究發(fā)現(xiàn),烏靈參100%乙醇提取物對小鼠的自主活動次數(shù)具有明顯的抑制作用,且與戊巴比妥具有協(xié)同作用,能增加閾下劑量戊巴比妥鈉引起的小鼠入睡率,提示烏靈參100%乙醇提取物具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用,為烏靈參鎮(zhèn)靜催眠的有效部位。