杜慶鑫 魏艷秀 劉攀峰 杜紅巖

(中國林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究開發(fā)中心 國家林業(yè)局杜仲工程技術(shù)研究中心 鄭州 450003)

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杜仲雄花主要活性成分含量的多樣性*

杜慶鑫 魏艷秀 劉攀峰 杜紅巖

(中國林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究開發(fā)中心 國家林業(yè)局杜仲工程技術(shù)研究中心 鄭州 450003)

【目的】 研究不同種質(zhì)杜仲雄花主要活性成分含量的遺傳變異規(guī)律，比較并評(píng)價(jià)杜仲雄花主要活性成分含量的多樣性，為雄花用杜仲優(yōu)良資源選育和開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)和材料?！痉椒ā?以193份不同種質(zhì)杜仲雄花為材料，采用AlCl3比色法測(cè)定杜仲雄花中總黃酮含量，全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定氨基酸含量，HPLC法測(cè)定桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷、異槲皮苷、紫云英苷6種活性成分含量，并對(duì)8種活性成分含量進(jìn)行變異分析、相關(guān)性分析、主成分分析和聚類分析?！窘Y(jié)果】 不同種質(zhì)杜仲雄花8種活性成分含量和多樣性指數(shù)均以氨基酸最高，分別為206.23 mg·g-1和2.05； 變異系數(shù)以京尼平苷最高，達(dá)112.00%，氨基酸最低，僅為12.52%。相關(guān)性分析結(jié)果顯示：桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷及異槲皮苷5種活性成分間均呈極顯著正相關(guān)，氨基酸除與總黃酮呈極顯著正相關(guān)外，與其他活性成分相關(guān)性不顯著。通過主成分分析，前4個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)87.040%，可以用于杜仲雄花資源前期的評(píng)價(jià)選擇?；?種活性成分，將193份杜仲種質(zhì)劃分為5個(gè)類群，各類群8種活性成分含量之間均存在顯著性差異。第Ⅰ類群種質(zhì)8種活性成分含量均較低； 第Ⅱ類群種質(zhì)氨基酸含量最高； 第Ⅲ類群種質(zhì)黃酮類化合物及其組分含量最高； 第Ⅳ類群種質(zhì)環(huán)烯醚萜類化合物組分含量最高； 第Ⅴ類群種質(zhì)綠原酸和京尼平苷酸含量最高。初步明確杜仲種質(zhì)雄花的不同類型?！窘Y(jié)論】 杜仲種質(zhì)雄花8種活性成分含量較高，開發(fā)利用價(jià)值大，而且表現(xiàn)出豐富的多樣性和變異，很有選擇潛力和改良潛力。

杜仲； 雄花； 種質(zhì)； 活性成分； 多樣性

杜仲(Eucommiaulmoides)，杜仲科杜仲屬，為第四紀(jì)冰川侵襲后僅留存于我國的孑遺樹種，是我國特有的珍稀瀕危二級(jí)保護(hù)植物和天然藥食兩用植物，具有很高的經(jīng)濟(jì)、藥用、營養(yǎng)和生態(tài)價(jià)值，在軍工、航空航天、橡膠工業(yè)、醫(yī)療保健、健康食品等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用(杜紅巖等， 2006； 杜紅巖， 2014； 赫錦錦， 2010)。杜仲雌雄異株，雄花簇生于當(dāng)年生枝條基部，產(chǎn)量高，易于采集(白喜婷等， 2008)。我國傳統(tǒng)以杜仲干皮入藥，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨的功效(Dongetal.， 2011a； 杜紅巖等， 2011)。以往對(duì)杜仲的研究多集中在皮、葉上，現(xiàn)代研究表明，杜仲雄花富含與皮、葉中類似的桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、京尼平苷等環(huán)烯醚萜類化合物組分，異槲皮苷、紫云英苷等黃酮類化合物組分，以及綠原酸和氨基酸等活性成分(吳敏等， 2014； 葉東旭等， 2012)。環(huán)烯醚萜類化合物具有抗炎、抗腫瘤、利膽、保肝、通便及治療風(fēng)濕等功能活性，綠原酸具有抗菌、抑制突變、保護(hù)心血管等作用，黃酮類化合物具有降脂減肥、抗自由基、抗菌、抗病毒等生物活性，氨基酸具有很高的營養(yǎng)價(jià)值。其中，總黃酮和氨基酸在杜仲雄花中的含量遠(yuǎn)高于皮和葉，其他活性成分含量也較高(張欣等， 2012； Takamuraetal.， 2007； 劉嚴(yán)， 2012； 杜紅巖等， 2013)。杜仲雄花已被列為新食品原料，以杜仲雄花為原料開發(fā)出的杜仲雄花茶、杜仲雄花酒、杜仲雄花功能飲料等產(chǎn)品具有良好的醫(yī)療保健功能(Dongetal.， 2011b)，備受市場(chǎng)青睞。

目前對(duì)杜仲雄花中活性成分含量的研究還不夠系統(tǒng)和深入，僅涉及少數(shù)活性成分或少數(shù)材料，尤其是多樣性的研究還沒有開展。從杜仲育種、遺傳改良及種質(zhì)資源的利用來看，系統(tǒng)研究不同種質(zhì)杜仲雄花主要活性成分含量多樣性具有重要意義。本研究對(duì)193份杜仲種質(zhì)雄花中桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、京尼平苷、綠原酸、異槲皮苷、紫云英苷、總黃酮和氨基酸8種主要活性成分含量進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行變異分析、相關(guān)性分析、主成分分析和聚類分析，旨在揭示杜仲種質(zhì)雄花主要活性成分含量的遺傳變異規(guī)律，比較并評(píng)價(jià)杜仲雄花8種活性成分含量的多樣性，以期為雄花用杜仲優(yōu)良資源選育提供重要依據(jù)和材料，并為進(jìn)一步開發(fā)利用我國豐富的杜仲雄花資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料193份，均采自中國林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究開發(fā)中心原陽試驗(yàn)基地(113°36′ E，34°55′ N)杜仲基因庫?；驇觳捎?株小區(qū)，定植行間距為3 m×3 m。每份試驗(yàn)材料選取6株樹，每株樹均于盛花期分別在樹冠中部的東、西、南、北4個(gè)方向采摘雄花各約10簇，低溫冷藏帶回實(shí)驗(yàn)室，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器與試劑

儀器： A300型自動(dòng)氨基酸分析儀，德國曼默博爾公司； AG135型十萬分之一電子天平，METILER TOLEDO； ND200-1氮吹儀，杭州瑞誠儀器有限公司； DHG-91013SA 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司； Cary 300紫外-可見分光光度計(jì)，美國安捷倫； HT-300BQ 型數(shù)控超聲波清洗器，濟(jì)寧恒通超聲電子設(shè)備有限公司； HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，鄭州元強(qiáng)儀器設(shè)備有限公司； Shimadzu LC-20A型高效液相色譜儀，日本島津； SPD-20A紫外檢測(cè)器，日本島津。

試劑： 蘆丁、桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、京尼平苷、綠原酸、異槲皮苷、紫云英苷對(duì)照品購自上海源葉生物科技有限公司； 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma公司； 甲醇為色譜純，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 總黃酮和氨基酸含量的測(cè)定 將采集的杜仲雄花樣品在105 ℃下殺青3 min，然后60 ℃烘干，粉碎過60目篩?？傸S酮含量測(cè)定參照AlCl3顯色法(范杰平， 2006)，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品。氨基酸含量測(cè)定參照GB/T5009.124—2003《食品中氨基酸的測(cè)定》方法，并略有改動(dòng)。稱取0.100 g杜仲雄花樣品，置于10 mL安瓿瓶中，精密加入6 mol·L-1鹽酸溶液10 mL，抽真空后封口，于110 ℃烘箱內(nèi)水解24 h，取出冷卻后過濾，定容至50 mL，從中取0.5 mL濾液脫酸，加入2 mL樣品稀釋液，過0.45 μm微孔濾膜，用A300型氨基酸自動(dòng)分析儀分析，進(jìn)樣量為20 μL?？傸S酮和氨基酸含量的測(cè)定結(jié)果均為3次重復(fù)的平均值。

1.3.2 桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸等6種活性成分含量的測(cè)定 采用HPLC法(郭洋靜等， 2014)，并進(jìn)行改進(jìn)。將采集的杜仲雄花樣品在105 ℃下殺青3 min，然后60 ℃烘干，粉碎過60目篩。稱取杜雄花粉末0.100 g，加入50%的甲醇溶液2.5 mL，稱定質(zhì)量，超聲40 min，放至室溫，稱定質(zhì)量，用50%的甲醇補(bǔ)足質(zhì)量損失后搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。精密稱取對(duì)照品桃葉珊瑚苷2.80 mg、京尼平苷酸1.40 mg、綠原酸2.80 mg、京尼平苷1.60 mg、異槲皮苷0.60 mg和紫云英苷0.60 mg，置同一5 mL的容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。6種活性成分含量的測(cè)定結(jié)果均為3次重復(fù)的平均值。

色譜條件： Thermo hypersil gold色譜柱(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)，以甲醇(B)-0.5%磷酸水溶液(C)為流動(dòng)相， 梯度洗脫(0～30 min，5%～15%B； 30～70 min，15%～30%B； 70～100 min，30%～54%B)； 檢測(cè)波長： 206 nm(0～15 min)，236 nm(15～55 min)，255 nm(55～100 min)； 流速： 1.0 mL·min-1； 進(jìn)樣量： 8 μL； 柱溫30 ℃。

分別精密吸取混合對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μL 進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，分別得到以下回歸方程。桃葉珊瑚苷：Y=6.0×105X+11 980(R2=0.999 9)，京尼平苷酸：Y=3.8×105X+11 553(R2=0.999 9)，綠原酸：Y=1.0×106X+39 526(R2=0.999 9)，京尼平苷：Y=5.3×105X+21 454(R2=0.999 9)，異槲皮苷：Y=2.8×105X+10 358(R2=0.999 9)，紫云英苷：Y=2.4×105X+8 860.3 (R2=0.999 9)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用Excel軟件計(jì)算各活性成分含量的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)和遺傳多樣性指數(shù)。遺傳多樣性指數(shù)用Shannon-wiener指數(shù)表示，即H′=-∑PilnPi(Shannonetal.， 1949； 胡建斌等， 2013)。利用SPSS 20.0軟件進(jìn)行相關(guān)性分析、主成分分析和聚類分析。各成分含量間的相關(guān)性用Pearson相關(guān)系數(shù)表示，主成分分析采用方差最大化正交旋轉(zhuǎn)方法，以累計(jì)貢獻(xiàn)率大于85%為提取主成分標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)采用歐式平方距離，Ward法進(jìn)行系統(tǒng)聚類(刁松鋒等， 2014； 王飛權(quán)等， 2015)。

2 結(jié)果與分析

2.1 杜仲雄花主要活性成分含量變異及分布特征

193份杜仲種質(zhì)雄花主要活性成分含量基本統(tǒng)計(jì)參數(shù)見表1。氨基酸含量最高，平均為206.23 mg·g-1，其次是總黃酮(21.99 mg·g-1)，紫云英苷(0.23 mg·g-1)最低。8種活性成分遺傳多樣性指數(shù)(H′)均較大，由大到小依次為氨基酸(2.05)、異槲皮苷(2.04)、桃葉珊瑚苷(2.02)、總黃酮(2.00)、綠原酸(1.97)、京尼平苷酸(1.94)、紫云英苷(1.74)、京尼平苷(1.73)。

杜仲雄花主要活性成分含量在不同材料間變異程度不同，京尼平苷變異系數(shù)(112.00%)最大，其次是紫云英苷(89.56%)，其他活性成分變異系數(shù)由大到小依次為京尼平苷酸(88.60%)、異槲皮苷(55.65%)、綠原酸(52.11%)、桃葉珊瑚苷(44.72%)、總黃酮(24.97%)、氨基酸(12.52%)?？梢姡胖傩刍ň┠崞杰蘸吭诓煌牧祥g變異程度最大；氨基酸不但含量高，而且變化相對(duì)穩(wěn)定。

進(jìn)一步分析杜仲雄花主要活性成分含量在不同取值區(qū)域的分布情況， 結(jié)果見圖1。桃葉珊瑚苷含量主要分布在2.00～17.00 mg·g-1，在5.00～14.00 mg·g-1尤為集中； 京尼平苷酸含量主要分布在9.00 mg·g-1以內(nèi)，且呈左偏移增加趨勢(shì)； 綠原酸含量主要分布在1.00～12.00 mg·g-1； 京尼平苷含量主要分布在3.00 mg·g-1以內(nèi)，也呈現(xiàn)左偏移增加趨勢(shì)； 異槲皮苷含量主要分布在0.05～2.05 mg·g-1； 紫云英苷含量幾乎全部集中在0.75 mg·g-1以內(nèi)； 大部分杜仲種質(zhì)雄花總黃酮含量分布在12.50～30.00 mg·g-1；氨基酸含量基本分布在160.00～255.00 mg·g-1。

表1 杜仲雄花主要活性成分含量基本統(tǒng)計(jì)參數(shù)Tab.1 Basic statistic parameters of main active components content in E. ulmoides male flowers mg·g-1

圖1 杜仲雄花主要活性成分含量分布Fig.1 Distribution of main active components content in E. ulmoides male flowers

2.2 杜仲雄花主要活性成分含量的相關(guān)性分析

杜仲雄花主要活性成分含量相關(guān)性分析結(jié)果見表2。8種活性成分含量之間存在不同程度的相關(guān)性。其中，桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷及異槲皮苷5種活性成分間均呈極顯著正相關(guān)。紫云英苷與京尼平苷間呈顯著正相關(guān)，與異槲皮苷間呈極顯著正相關(guān)?？傸S酮與異槲皮苷、氨基酸間呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.292和0.192，而與其他活性成分相關(guān)不顯著，說明異槲皮苷對(duì)總黃酮的影響大于氨基酸。氨基酸除與總黃酮呈極顯著正相關(guān)外，與其他活性成分相關(guān)性不顯著。

表2 杜仲雄花主要活性成分含量間相關(guān)性①Tab. 2 Correlation between main active components content in E. ulmoides male flowers

①** 和 *分別表示活性成分之間在0.01和0.05水平上相關(guān)。** and * mean correlation at 0.01 and 0.05 level between 8 active components.

2.3 杜仲雄花主要活性成分含量的主成分分析

對(duì)杜仲雄花8種主要活性成分含量進(jìn)行主成分分析(表3)，前4個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)87.040%，基本包含所有性狀的大部分信息。 第1主成分貢獻(xiàn)率達(dá)到43.386%，桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸和京尼平苷貢獻(xiàn)較大，主要表征的是環(huán)烯醚萜類化合物組分和綠原酸的信息。第2主成分貢獻(xiàn)率為19.005%，紫云英苷和異槲皮苷貢獻(xiàn)較大，主要表征的是黃酮類化合物組分的信息。第3主成分貢獻(xiàn)率為14.188%，氨基酸貢獻(xiàn)最大，主要表征的是氨基酸的信息。第4主成分貢獻(xiàn)率為10.461%，總黃酮貢獻(xiàn)最大，主要表征的是總黃酮的信息。

表3 杜仲雄花主要活性成分含量的主成分分析Tab. 3 Principal components analysis of main active components content in E. ulmoides male flowers

2.4 杜仲雄花主要活性成分含量的聚類分析

根據(jù)杜仲雄花8種主要活性成分含量，對(duì)193份杜仲種質(zhì)進(jìn)行聚類，在歐氏距離7.0處劃分為5個(gè)類群(圖2)，各類群的主要活性成分含量見表4。5個(gè)類群8種活性成分含量均存在顯著差異。其中，第Ⅰ類群包括60份材料，該類群種質(zhì)桃葉珊瑚苷和氨基酸含量在5個(gè)類群中僅處于第4位，其他6種活性成分含量均為5個(gè)類群中最低。第Ⅱ類群包括57份材料，該類群種質(zhì)氨基酸含量最高，平均達(dá)221.53 mg·g-1，顯著高于第Ⅰ，Ⅲ，Ⅴ類群種質(zhì)，總黃酮含量也較高，平均為24.01 mg·g-1，在5個(gè)類群中位居第2位。綜合來看，該類群種質(zhì)屬于氨基酸和總黃酮含量都很高的種質(zhì)。第Ⅲ類群包括18份材料，該類群種質(zhì)總黃酮含量在5個(gè)類群中最高，平均為26.82 mg·g-1，顯著高于其他4個(gè)類群種質(zhì)，黃酮類化合物組分異槲皮苷含量(1.87 mg·g-1)和紫云英苷含量(0.69 mg·g-1)也顯著高于其他4個(gè)類群種質(zhì)。綜合來看，該類群種質(zhì)屬于黃酮類化合物及其組分含量很高的種質(zhì)。第Ⅳ類群包括19份材料，該類群種質(zhì)環(huán)烯醚萜類化合物組分含量很高，桃葉珊瑚苷含量(16.18 mg·g-1)和京尼平苷含量(3.46 mg·g-1)顯著高于其他4 個(gè)類群種質(zhì)，京尼平苷酸含量也達(dá)到8.32 mg·g-1，在5個(gè)類群中位居第2位。綠原酸和氨基酸含量分別為9.06 mg·g-1和220.61 mg·g-1，均處于第2位。綜合來看，該類群種質(zhì)屬于氨基酸和環(huán)烯醚萜類化合物組分都很高的種質(zhì)。第Ⅴ類群包括39份材料，該類群種質(zhì)綠原酸含量(9.22 mg·g-1)和京尼平苷酸含量(8.91 mg·g-1)最高。綜合來看，該類群種質(zhì)屬于綠原酸和京尼平苷酸含量很高的種質(zhì)。

3 討論

本研究對(duì)193份不同種質(zhì)杜仲雄花8種主要活性成分含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)杜仲雄花桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸和京尼平苷平均含量均比郭洋靜等(2014)測(cè)定結(jié)果要高，這可能與材料的數(shù)量及來源不同有關(guān)。此外，杜仲雄花中異槲皮苷含量與中藥材羅布麻(Apocynumvenetum)葉的含量接近(相淞華等， 2010)，總黃酮含量明顯高于銀杏(Ginkgobiloba)葉總黃酮含量(郁萬文等， 2014)。氨基酸含量是油松(Pinustabulaeformis)、白皮松(Pinusbungeana)、黑松(Pinnsthunbergii)花粉氨基酸含量的2倍左右(支崇遠(yuǎn)等， 2004)。

圖2 杜仲雄花主要活性成分聚類分析Fig.2 Cluster analysis of main active components in E. ulmoides male flowers

通過系統(tǒng)比較與評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)不同種質(zhì)間杜仲雄花8種活性成分含量存在明顯差異。由于試驗(yàn)材料全部來自同一地點(diǎn)，其栽培立地條件和管理?xiàng)l件基本一致，因此說明不同種質(zhì)間杜仲雄花8種活性成分存在遺傳變異。8種活性種成分含量的變異系數(shù)介于12.52%～112.00%； 除京尼平苷和紫云英苷外，其他活性成分含量的遺傳多樣性指數(shù)均大于1.90，表現(xiàn)出豐富的多樣性。

表4 不同類群主要活性成分含量比較①Tab.4 Comparison of main active components among five groups mg·g-1

① 同行不同字母表示該成分在0.05水平上差異顯著(類群間比較)。The different letters in the same row mean sinificant difference at 0.05 level(comparison among groups).

杜仲雄花中8種活性成分含量之間存在不同程度的相關(guān)關(guān)系，其中，桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷及異槲皮苷5種活性成分間均呈極顯著正相關(guān)，總黃酮與異槲皮苷、氨基酸間呈極顯著正相關(guān)。根據(jù)性狀間的相關(guān)關(guān)系，可以在選擇某一性狀時(shí)預(yù)測(cè)其對(duì)其他性狀可能產(chǎn)生的影響，因此，在相關(guān)性極強(qiáng)的性狀間進(jìn)行選擇時(shí)，一個(gè)性狀得到改良，其他性狀也會(huì)得到改良(康永祥等， 2011； 田治國等， 2012)。根據(jù)表2，桃葉珊瑚苷含量提高會(huì)促進(jìn)京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷和異槲皮苷等活性成分含量提高。

根據(jù)8種活性成分含量的測(cè)定結(jié)果，對(duì)193份杜仲種質(zhì)進(jìn)行主成分分析，前4個(gè)主成分反映了杜仲雄花主要活性成分的大部分信息，累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)到87.040%，可以對(duì)杜仲雄花資源進(jìn)行早期間接評(píng)價(jià)選擇，為杜仲育種及雄花資源開發(fā)利用提供便利。聚類分析可以將性狀相似的聚為一類，以便系統(tǒng)地分析各種質(zhì)特點(diǎn)，對(duì)植物育種和資源利用也有較好的指導(dǎo)作用。本試驗(yàn)對(duì)杜仲雄花8種主要活性成分含量進(jìn)行聚類，在歐氏距離7.0處將193份杜仲材料聚為5類。5個(gè)類群杜仲種質(zhì)雄花8種活性成分含量均存在顯著差異，這些差異是良種選育的基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

杜仲種質(zhì)資源雄花8種主要活性成分含量較高，有很大的開發(fā)利用價(jià)值，且表現(xiàn)出豐富的變異和多樣性，有較大的選擇潛力和改良潛力。杜仲雄花8種活性成分含量之間存在不同程度的相關(guān)性。通過聚類，初步明確杜仲種質(zhì)雄花的不同類型。根據(jù)不同的開發(fā)利用目標(biāo)選擇優(yōu)良資源，可在較大程度上提高雄花用杜仲良種選育效率，對(duì)于雄花用杜仲資源開發(fā)利用也有很大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

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(責(zé)任編輯 王艷娜 郭廣榮)

Diversity of the Content of Main Active Components inEucommiaulmoidesMale Flowers

Du Qingxin Wei Yanxiu Liu Panfeng Du Hongyan

(Non-TimberForestResearchandDevelopmentCenterofChineseAcademyofForestryTheEucommiaEngineeringResearchCenterofStateForestryAdministrationZhengzhou450003)

【Objective】 This study aimed to disclose the genetic variation, compare and evaluate the diversity in contents of 8 main active components inEucommiaulmoidesmale flowers, to provide a scientific basis and materials for resources selection and utilization of the male flower. 【Method】 A total of 193E.ulmoidesgermplasms were selected as samples, the content of total flavonoids and amino acids were determined by the AlCl3colorimetric method and an automatic amino acids analyzer, respectively. Aucubin, geniposidic acid, chlorogenic acid, geniposide, isoquercitrin and astragaline were determined by HPLC method. Furthermore, variation analysis, multiple comparison, correlation analysis, principal component analysis and cluster analysis were carried out based on 8 active components contents. 【Result】 In differentE.ulmoidesgermplasms, the content and diversity index of amino acids were highest among the 8 components, with an average of 206.23 mg·g-1and 2.05, respectively. The variation coefficient of geniposide content was highest (112.00%) and of amino acids content was lowest (12.52%). Correlation analysis showed that aucubin, geniposidic acid, chlorogenic acid, geniposide and isoquercitrin were extremely significantly and positively correlated with each other. The correlation between amino acids and total flavonoids was extremely significant and positive, while amino acids were not significantly correlated with the other 6 components. Principal component analysis revealed that the first four principal components represented 87.040% of 8 active components, and they were suitable for assessing theE.ulmoidesmale flower resources. Based on data of 8 active components, 193E.ulmoidesgermplasms were clustered into 5 groups and the contents of 8 active components were significantly different among the 5 groups. The contents of 8 active components were comparatively lower in the first group, the amino acids content in the second group was higher than the other 4 groups, the content of total flavonoids and flavonoids components were highest in the third group, the content of iridoid components were highest in the fourth group, and chlorogenic acid and geniposidic acid content in the fifth group were higher than the other 4 groups. Different types ofE.ulmoidesmale flowers were preliminarily defined. 【Conclusion】 The contents of 8 main active components inE.ulmoidesmale flowers were high with great value of utilization, and high diversity and variation were found in different germplasms, which showed great potential for selection and imporvement. Thus, it could provide basal materials for the male flower breeding and the resources development and utilization.

Eucommiaulmoides; male flowers; germplasms; active components; diversity

10.11707/j.1001-7488.20170205

2016-01-05；

2016-02-29。

國家“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域科技計(jì)劃課題研究任務(wù)合約(2012BAD21B0502)。

S789

A

1001-7488(2017)02-0035-09

*杜紅巖為通訊作者。