李崢嶸

（河南省駐馬店市中醫(yī)院藥劑科駐馬店463000）

中藥紅芪藥材的鑒定及有效成分多糖的提取工藝

李崢嶸

（河南省駐馬店市中醫(yī)院藥劑科駐馬店463000）

目的：探討中藥紅芪藥材的鑒定方法及紅芪有效成分多糖的提煉工藝。方法：通過(guò)紅芪的外形、切片及粉末顯微等三種方式鑒定紅芪的特征，比較水提醇沉法與堿浸提法提取多糖含量與得率。結(jié)果：（1）紅芪外表呈紅褐色，皮質(zhì)堅(jiān)韌，紋理清晰，味微甜，咀嚼無(wú)豆腥氣味；（2）水提醇沉法最佳提取工藝條件為：溫度80℃，固液比例1∶12，反復(fù)沉淀提取兩次，1 h/次；（3）水提醇沉法提取的紅芪多糖含量與得率明顯高于0.3 mol/L、0.5 mol/L堿浸提法（P＜0.05）。結(jié)論：通過(guò)外形、切片及粉末顯微觀察可掌握紅芪特點(diǎn)，紅芪水提醇沉法提取紅芪多糖有效性高于堿浸提法，在今后的提取工藝中，可注重對(duì)綜合性多指標(biāo)提取工藝的深入研究。

紅芪；多糖；鑒定；提取

紅芪為豆科植物多序巖黃芪的干燥根，是常見(jiàn)的中醫(yī)藥材。味甘，性微溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、排毒斂瘡之功效，《神農(nóng)本草經(jīng)》中有紅芪藥用的相關(guān)記載[1]。紅芪含有多糖、生物堿、黃酮、氨基酸等物質(zhì)，且多糖為紅芪中最主要的活性成分，是一種雜多糖，具有抗氧化、抗癌、提高機(jī)體免疫力等作用[2]。本研究對(duì)紅芪的鑒定與紅芪多糖的提取工藝進(jìn)行探討，對(duì)擴(kuò)展中醫(yī)藥材價(jià)值提供一定的參考依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料產(chǎn)自甘肅武山的紅芪。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材水合氯醛，甘油乙醇，無(wú)水乙醇，0.3 mol/L、0.5 mol/L堿溶液，冰醋酸，pH試紙，電子顯微鏡，苯酚，離心機(jī)，天平，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

2 方法

2.1 紅芪鑒定方法通過(guò)藥材的外形、組織切片及粉末顯微等方式進(jìn)行鑒定。（1）觀察紅芪外觀顏色、分支形態(tài)、紋路及氣味、味道，判斷是否為紅芪，必要時(shí)可掰斷藥材判斷粉性。（2）組織切片鑒定方法：首先，將紅芪放入燒杯中煮沸30 min左右，瀝干切片，切片厚度為0.3～0.5 mm；其次，在紅芪切片上滴加2～4滴水合氯醛，繼續(xù)加熱至切片邊緣呈現(xiàn)小泡；隨后添加甘油乙醇，待鏡下能清楚觀察紅芪切面的變化即可。（3）組織粉末化鑒定：將紅芪研磨成細(xì)粉，在顯微鏡下滴加一滴清水?dāng)嚢韬筇砑?～4滴水合氯醛，觀察紅芪細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

2.2 紅芪多糖提取工藝（1）紅芪多糖水提醇沉法：粉碎紅芪后置入燒杯，加入95%乙醇并充分?jǐn)嚢韬笏″伡訜幔? h后抽濾，晾干藥渣并過(guò)篩，將過(guò)渣提取物濃縮加乙醇沉淀，沉淀物經(jīng)兩次溶解后加乙醇真空沉淀干燥，最后提取多糖。采用單因素與正交實(shí)驗(yàn)計(jì)算紅芪中多糖含量與得率。（2）紅芪多糖堿浸提法：將紅芪藥材粉碎后用95%乙醇脫脂，晾曬過(guò)篩，加入0.3 mol/L、0.5 mol/L堿溶液（固液比1∶12），經(jīng)水浴鍋加熱至80℃后浸提2次，1 h后抽濾，將提取液用冰醋酸濃縮后加入70%乙醇溶液中，經(jīng)溶解沉淀后，二次洗滌沉淀，真空沉淀干燥后，采用紫外線(xiàn)分光光度計(jì)算紅芪多糖含量。

3 結(jié)果

3.1 藥材性狀鑒別結(jié)果紅芪外表呈紅褐色，皮質(zhì)堅(jiān)韌，紋理清晰，味微甜，咀嚼無(wú)豆腥氣味；紅芪形狀呈長(zhǎng)條圓柱形，分支少，上粗下細(xì)，斷面具有纖維性和粉質(zhì)性。

3.2 藥材組織顯微結(jié)果（1）顯微鏡下片狀紅芪木栓層左右細(xì)胞整齊排列，細(xì)胞呈長(zhǎng)方形或紡錘形；切面形成層細(xì)胞成環(huán)排列，細(xì)胞較扁平；木質(zhì)層導(dǎo)管細(xì)胞呈圓形或橢圓；木薄層細(xì)胞以圓形或多角形緊密排列；木射線(xiàn)細(xì)胞呈長(zhǎng)方形；韌皮薄壁及射線(xiàn)細(xì)胞單個(gè)排列，呈圓形或橢圓。（2）經(jīng)顯微鏡下紅芪粉末化可見(jiàn)，紅芪纖維多數(shù)長(zhǎng)120μm，細(xì)胞壁較厚且觀察到不規(guī)則裂隙紋路，導(dǎo)管分子長(zhǎng)度在70～200μm，均同向并列排列。此外，可見(jiàn)以單粒狀大小不一的淀粉粒分散開(kāi)來(lái)，直徑在1～15μm，呈卵圓形或橢圓。

3.3 紅芪多糖提取工藝結(jié)果采用水提醇沉法提取的多糖，以單因素與正交實(shí)驗(yàn)及苯酚-硫酸法測(cè)定出紅芪多糖的含量與得率。發(fā)現(xiàn)水提醇沉法工藝提取的最優(yōu)條件為：溫度80℃，固液比例1∶12，反復(fù)沉淀提取2次，1 h/次，乙醇沉淀濃度70%左右。此條件下提取的紅芪多糖含量高達(dá)64.5%，得率可達(dá)3.84%。采用堿浸提法提取多糖結(jié)果顯示，堿溶液濃度越大，多糖含量越高，0.5 mol/L堿溶液提取紅芪多糖含量可達(dá)46.3%，得率為2.1%。0.3 mol/L堿溶液提取下的多糖含量為45.1%，得率為1.2%。可知堿浸提法提取的多糖含量與得率均低于水提醇沉法（P＜0.05）。

4 討論

中醫(yī)藥材作為我國(guó)幾千年來(lái)的傳世瑰寶，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展的今天，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)將中醫(yī)藥材從生物學(xué)、分子學(xué)角度闡述藥理作用，有利于中醫(yī)在國(guó)際醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的競(jìng)爭(zhēng)力與接受度。早在《金匱要略》中有關(guān)紅芪的記載為：主治氣虛風(fēng)濕，關(guān)節(jié)浮腫等癥[3]。紅芪能有效改善由心脾氣虛引起的氣短、眩暈、浮腫等癥狀。特別是對(duì)于氣虛體弱的女性，長(zhǎng)期服用具有排毒養(yǎng)顏、補(bǔ)氣抗衰的功效。隨著紅芪藥用價(jià)值的不斷提高，紅芪的栽培與多糖提取逐漸受到重視。通過(guò)中藥藥材常見(jiàn)鑒定方式，觀察紅芪外觀形態(tài)和顯微下切片及粉末形態(tài)可知紅芪具有味甘、性微溫、外觀呈紅褐色、紋理清晰、皮質(zhì)堅(jiān)韌等特征。與《藥典》中關(guān)于紅芪的特征性狀基本一致[4～5]。

多糖是紅芪中最主要的活性物質(zhì)。在紅芪多糖藥物相關(guān)研究中提到，多糖具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能，改善心腦血管疾病的輔助作用[6]。多糖的提取方法諸多，常見(jiàn)的有水提法、酸堿提法、酶解生物法。不同提取方式的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在不同種類(lèi)的多糖提取中。水提醇沉法是提取多糖的傳統(tǒng)方法，通過(guò)水浴浸提，反復(fù)過(guò)濾沉淀，加入95%乙醇后沉淀析出多糖，經(jīng)真空干燥后可粗提取。該研究中水提醇沉法提取多糖含量64.5%與0.3 mol/L、0.5 mol/L堿浸提法提取多糖含量45.1%、46.3%比較，水提醇沉法提取的紅芪多糖含量更高，且水提醇沉法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好。堿浸提法中堿性溶液通過(guò)破壞細(xì)胞壁，溶解細(xì)胞膜釋放多糖達(dá)到提取目的。但堿浸提法是在多糖酶法基礎(chǔ)上提取多糖的方式，酶解溫度、時(shí)間、酶添加量都會(huì)對(duì)提取效果造成影響，加酶量與提取效果呈現(xiàn)曲線(xiàn)關(guān)系。張玲等[7～8]研究提到，當(dāng)加酶量在0.4%時(shí)多糖提取量最大。隨著酶量的增加，酶與紅芪中纖維素分子接觸更大，溶出的多糖不斷增加，使得底物減少，在多余酶無(wú)法產(chǎn)生反應(yīng)下，多糖的得率有所降低。此外，多糖中糖苷鍵被過(guò)多的酶分解，含量隨之下降。

綜上所述，采用水提醇沉法提取紅芪多糖比堿浸提法提取效果更好，多糖得率更高（P＜0.05）。隨著酶提法的不斷完善以及其他提取工藝的挖掘，紅芪多糖可望有更為高效的提取工藝。

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[2]柳小亞,李繼平,陳心悅,等.HPLC同時(shí)測(cè)定紅芪中8個(gè)活性成分的含量及聚類(lèi)分析[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2016,51(5):786-791

[3]強(qiáng)正澤,李成義,王明偉,等.不同月份紅芪微量元素特征研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2016,23(9):90-95

[4]葉迎,包強(qiáng),王瑞海,等.甘肅黃芪和紅芪中總皂苷含量測(cè)定對(duì)比研究[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2016,9(10):1197-1203

[5]李成義,王燕,強(qiáng)正澤,等.紅芪與黃芪中兩個(gè)異黃酮類(lèi)成分含量的比較研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2014,16(7):534-537

[6]牛江濤,曹瑞,張澤國(guó),等.紅芪多糖的提取分離及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房,2017,28(1):130-133

[7]張玲,李朋玲,華永麗,等.黃芪和紅芪的紅外光譜法結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法鑒別[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2015,26(7):1657-1659

[8]張平,黃聰琳,張明童,等.紅芪藥材性狀及鑒別研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2015,22(11):82-85

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.08.103

2017-07-01）