黃娟萍，莊滿賢，黃大森，陳 元，蕭雪瑩，王 霆，王顯著

(廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州510765)

高效液相色譜法測定芩香清解口服液中黃芩苷的含量

黃娟萍*，莊滿賢，黃大森，陳 元，蕭雪瑩，王 霆，王顯著#

(廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州510765)

目的：建立高效液相色譜法測定芩香清解口服液中黃芩苷含量的方法，以建立芩香清解口服液的質(zhì)量控制標準。方法：色譜柱為Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)，檢測波長為280 nm，流速為1.0 ml/min，進樣量為10 μl，柱溫為30 ℃。結(jié)果：黃芩苷質(zhì)量濃度在2.409～77.080 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率100.0%，RSD為1.7%。結(jié)論：本研究方法操作簡便、準確度高、重復(fù)性好，可用于芩香清解口服液的質(zhì)量控制。

芩香清解口服液； 質(zhì)量標準； 高效液相色譜法

芩香清解口服液由黃芩、廣藿香、蟬蛻、石膏、葛根、大黃、芍藥等12味中藥制成，具有疏散風(fēng)熱、清瀉里熱、解毒利咽的功效，主要用于小兒上呼吸道感染表里俱熱證，癥見發(fā)熱、鼻塞、流涕、咳嗽、咽紅腫痛、便秘、口渴煩躁、舌紅苔黃、脈洪數(shù)等者。臨床研究表明，其在治療小兒急性上呼吸道感染表里俱熱證是有效及安全的[1]。 芩香清解口服液的處方藥材較多，成分復(fù)雜，因此建立完善的制劑質(zhì)量標準對產(chǎn)品質(zhì)量控制意義較大。為保障本品的質(zhì)量可控性，本研究對芩香清解口服液中黃芩苷的含量進行測定。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，DAD檢測器，Chem Station Edition數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；Sartorius CPA225D型十萬分之一天平(德國賽多利斯公司)；Masrer-QUT型純水機(上海和泰儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

芩香清解口服液[太陽石(唐山)藥業(yè)有限公司，批號：20150501、20150502、20150503；廣州一品紅制藥有限公司，批號：20150801、20150802、20150803]。黃芩苷對照品(批號：110715-201318)購買于中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為實驗室自制超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液：精密吸取本品5 ml，置于100 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2 對照品溶液：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 ml含18 μg的溶液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液：按處方比例分別稱取除黃芩外的其余藥味，按處方制備方法制備缺黃芩陰性樣品，再按照“2.1.1”項下方法制備陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，色譜柱為Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)；檢測波長為280 nm；流速為1.0 ml/min；進樣量為10 μl；柱溫為30 ℃。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，理論板數(shù)按黃芩苷峰面積計算≥2 500。黃芩苷與相鄰峰之間分離度>1.5，表明陰性對照測定無干擾，見圖1。

A.陰性對照溶液；B.對照品溶液；C.供試品溶液A. negative control solution; B. control solution; C. test solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC

2.4 精密度試驗

取“2.1.2”項下對照品溶液，按照“2.2”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，計算黃芩苷峰面積的RSD=0.4%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.5 線性關(guān)系考察

按“2.1.2”項下方法分別配制質(zhì)量濃度為2.409、4.818、9.636、19.270、38.540、57.810、77.080 μg/ml的溶液，按照“2.2”項下色譜條件分別進樣10 μl，記錄色譜圖。以對照品溶液濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得線性回歸方程Y=37.244 56X+3.629 44，r=0.999 97，結(jié)果表明黃芩苷質(zhì)量濃度在2.409～77.080 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批樣品(批號：20150501)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液6份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算黃芩苷含量的平均值(n=6)為4.6 mg/ml，RSD為0.8%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.1.1”項下供試品溶液(批號：20150501)適量，分別于室溫(25 ℃)下放置0、3、7、13、22、48 h時按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算黃芩苷含量RSD=1.3%(n=6)。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫下48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 中間精密度試驗

由2位不同分析員，在不同時間分別取同一批樣品(批號：20150501)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液6份，并使用不同的儀器進行分析，記錄色譜圖并計算黃芩苷含量RSD=1.0%(n=12)。結(jié)果表明，本方法中間精密度良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的供試品(批號：20150501)9份，每份2.5 ml，分別加入低、中、高3個質(zhì)量濃度(分別為0.240 62 mg/ml)的黃芩苷對照品40、50、60 ml，每個質(zhì)量濃度3份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗結(jié)果

2.10 黃芩苷的含量測定

取6批芩香清解口服液樣品(批號：20150501、2150502、20150503、20150801、2150802、20150803)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液各2份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，采用外標法計算芩香清解口服液中黃芩苷的含量，見表2。

表2 黃芩苷的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 測定成分的選擇

黃芩以根入藥，味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效，現(xiàn)多與其他藥物組合成中藥復(fù)方制劑，治療感冒、發(fā)熱和流感病毒感染等疾病[2-3]。黃芩含多種黃酮類化合物，主要為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等[4-6]，而黃芩苷為黃芩的主要有效成分，常被選擇為制劑的質(zhì)量控制指標[7-10]。黃芩為本方中君藥，故選擇其主要成分黃芩苷作為指標成分進行測定。

3.2 波長及流動相的選擇

在200～400 nm對樣品進行波長掃描，黃芩苷在280 nm處有最大吸收，掃描結(jié)果與相關(guān)研究[8-12]結(jié)果一致，故選擇280 nm作為檢測波長。本研究曾考察過多種溶液作為流動相，包括不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液，發(fā)現(xiàn)甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)作為流動相時，黃芩苷的分離度及峰性狀是最好的，故選擇此流動相[13-16]。

3.3 耐用性試驗

本研究考察了色譜條件中的流速、柱溫、波長、流動相比例、色譜柱等發(fā)生微小變化時，黃芩苷含量測定結(jié)果受影響的程度。結(jié)果表明，流速分別為0.95、1.00、1.05 ml/min時，黃芩苷含量RSD=1.1%(n=6)；柱溫分別為20、30、40 ℃時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)；波長分別為270、280、290 nm時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)；流動相分別為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=45 ∶55 ∶0.2)、甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)、甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=49 ∶51 ∶0.2)時，黃芩苷含量RSD=1.1%(n=6)；色譜柱分別為Thermo ODS HYPERSIC色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、依利特Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)，因此本方法耐用性較好，適用范圍廣。

[1]李井鋒，馬融，胡思源，等.芩香清解口服液治療小兒急性上呼吸道感染表里俱熱證的多中心臨床研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30(10)：3794-3796.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：301-302.

[3]Ding Y，Dou J，Teng Z，et al.Antiviral axtivity og baicalin against influenza A(H1N1/H3N2) virus in cell culture and in mice and its inhibition of neuraminidase[J].Arch Virol，2014，159(12):3269-3278.

[4]王孟華，曲瑋，梁敬鈺.黃芩的研究進展[J].海峽藥學(xué)，2013，25(9)：6-13.

[5]劉金欣，孟繁蘊，張勝海，等.UPLC同時測定黃芩中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A[J].中草藥，2014，45(10)：1477-1480.

[6]鄭勇鳳，王佳婧，傅超美，等.黃芩的化學(xué)成分與藥理作用研究進展[J].中成藥，2016，38(1)：141-148.

[7]安靜，董占軍，孫源.HPLC測定茵桅黃口服液中的黃芩苷[J].華西藥學(xué)雜志，2015，30(2)：236-237.

[8]宋宗華，王鵬，陳曉輝，等.中藥黃芩和一清顆粒中黃芩苷HPLC定量分析方法學(xué)驗證參數(shù)限度考察[J].藥物分析雜志，2010，30(6)：1140-1144.

[9]王葳，劉冬麗，李維熙，等.蒲地藍消炎片中黃芩苷的含量測定[J].中國民族民間醫(yī)藥，2016，25(3)：17-18.

[10] 陳旭，田明.柴胡桂姜顆粒中黃芩苷含量測定方法研究[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2016，13(11)：27-30.

[11] 林超，史敏，王永和.HPLC測定和胃化滯丸中黃芩苷的含量[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2016，13(8)：32-34.

[12] 何玲玲，韋國兵，胡奇軍.高效液相色譜法測定銀黃口服液中黃芩苷含量及不確定度分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2015，25(34)：15-18.

[13] 翟媛媛，師永清.HPLC法同時測定清心明目上清片中梔子苷、連翹苷、黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].西北民族大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2016，36(1)：13-17.

[14] 李昂，闞紅玉，張囡.HPLC法同時測定疏表靈顆粒中綠原酸、橙皮苷、黃芩苷的含量[J].中國藥房，2016，27(27)：3872-3874.

[15] 孫艷濤.HPLC雙波長法同時測定消石利膽膠囊中芍藥苷、橙皮苷、黃芩苷和大黃酚的含量[J].中國藥師，2016，19(4)：801-803.

[16] 邵禮梅，王云龍，李延雪.高效液相色譜法測定蒲地藍消炎片中黃芩苷與黃芩素含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(4)：37-38.

Content Determination of Baicalin in Qinxiangqingjie Oral Liquid by HPLC

HUANG Juanping, ZHUANG Manxian, HUANG Dasen,CHEN Yuan, XIAO Xueying, WANG Ting, WANG Xianzhu

(Research and Development Center, Guangzhou Yipinhong Pharmaceutical Co., Ltd., Guangdong Guangzhou 510760, China)

OBJECTIVE：To establish the method for content determination of baicalin in Qinxiangqingjie oral liquid by HPLC, so as to establish the quality control specification of Qinxiangqingjie oral liquid. METHODS：The chromatographic column was Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm), the mobile phase was methanol - water - phosphoric acid(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2), with detective wave length of 280 nm, flow rate of 1.0 ml/min, sample size of 10 μl and column temperature of 30 ℃. RESULTS：Baicalin in 2.409 μg/ml-77.080 μg/ml had good linear relationship, the average recovery rate was 100.0%,RSDwas 1.7%. CONCLUSIONS：The method is simple, high accuracy and good repeatability, which could be used for quality control of Qinxiangqingjie oral liquid.

Qinxiangqingjie oral liquid； quality standards； HPLC

R927.2

A

1672-2124(2017)04-0526-04

2016-11-17)

*工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：390447099@qq.com

#通信作者：高級工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：wxz971509@163.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.04.037