黃先敏+凌敏+楊正賢+羅家剛+胡先會(huì)+祁岑

摘要 [目的]測(cè)定5個(gè)不同產(chǎn)地天麻中多糖的含量。[方法]采用回流醇沉法，提取5個(gè)天麻主產(chǎn)區(qū)天麻中的多糖，用蒽酮比色法測(cè)定其多糖的含量。[結(jié)果]云南昭通天麻的多糖含量最高，為25.04%；其次是陜西略陽(yáng)天麻，為23.46%，四川汶川天麻為23.41%；含量較低的是貴州青龍?zhí)炻椋?0.67%）和湖北神龍架天麻（20.28%）。[結(jié)論]5個(gè)不同產(chǎn)地天麻多糖的含量差異極其顯著。

關(guān)鍵詞 天麻；多糖含量；回流；醇沉；蒽酮比色法

中圖分類號(hào) S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）06-0259-01

天麻為蘭科植物天麻（Gastrodia eleta BL.）的干燥塊莖[1]，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥之一，主產(chǎn)于四川、云南、貴州、湖北、陜西等地[2]。早期對(duì)天麻的研究主要集中在天麻素和天麻苷元等方面，對(duì)天麻多糖的研究報(bào)道不多[3]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)植物多糖類化合物是一種免疫調(diào)節(jié)劑，能激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)抗體、補(bǔ)體的生成和干擾素的誘生[4]，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，并且對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒副作用，可用于治療艾滋病和抗腫瘤、抗衰老等方面[5]。對(duì)天麻多糖的研究表明，天麻多糖具有清除自由基、降血壓、增強(qiáng)免疫力、抗菌等藥理作用[6]。本試驗(yàn)采用以水為溶劑回流、乙醇沉淀的方法提取不同產(chǎn)地天麻中的多糖，用蒽酮硫酸比色法對(duì)其樣品溶液中的多糖含量進(jìn)行測(cè)定分析，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 天麻樣品。5個(gè)不同產(chǎn)地的天麻樣品由昭通神農(nóng)烏天麻良種繁育有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)儀器。YB-150型高速多功能粉粹機(jī)，永康市速鋒工貿(mào)有限公司生產(chǎn)；CP214電子分析天平，奧豪斯儀器上海有限責(zé)任公司生產(chǎn)；Exceed-cb超純水機(jī)，成都康寧實(shí)驗(yàn)專用純水設(shè)備廠生產(chǎn)；HH-S26s數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠生產(chǎn)；AK/GL-20B高速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)；BCD-252KSA冰箱，青島海爾股份有限公司生產(chǎn)；101A-2E電熱鼓風(fēng)恒溫箱，上海實(shí)驗(yàn)儀器有限公司生產(chǎn)；WFJ7200型可見(jiàn)分光光度計(jì)，尤尼柯上海儀器有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 試驗(yàn)藥品與試劑。葡萄糖對(duì)照品，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：F20111208；蒽酮，上海潤(rùn)捷化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；95%硫酸，汕頭市達(dá)濠精細(xì)化學(xué)品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：XK13-201471-008-II。上述藥品均為分析純。95%乙醇，廣西貴港市甘化酒精有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蒽酮-硫酸溶液的配制。稱取蒽酮0.1 g，加入95%濃硫酸溶解，定容至50 mL，配成0.2%蒽酮-硫酸溶液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。精確稱量0.025 0 g烘至恒重的葡萄糖純品，用蒸餾水溶解定容至250 mL，配成濃度為0.1 mg/mL的溶液。取溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，放入試管中，加水至1 mL，加入蒽酮-硫酸溶液3 mL，浸入冰水中，待所有試管加完，沸水浴15 min，管口加蓋。取出放入冰水中5 min，在室溫下10 min后，測(cè)其吸光度。

1.2.3 樣品溶液制備。采用回流法對(duì)天麻中的多糖進(jìn)行提取。精確稱取1.0 g天麻粉，放入燒瓶中，再加入40倍體積的蒸餾水，80 ℃回流3 h。將溶液離心2 min，轉(zhuǎn)速10 000 r/min。取上清液10 mL，加入95%乙醇160 mL，在4 ℃下放置12 h，使溶液中多糖沉淀。取出離心3 min，轉(zhuǎn)速10 000 r/min，將沉淀物放入60 ℃的烘箱中烘干。將烘干的多糖用200 mL蒸餾水溶解，取0.2 mL溶液放入試管中，加1.8 mL水，再加入6 mL蒽酮-硫酸溶液，浸入冰水中，待所有試管加完后，沸水浴15 min。取出冰水浴5 min，然后在室溫下放置10 min，測(cè)吸光度。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。采用蒽酮硫酸比色法，在620 nm波長(zhǎng)下測(cè)溶液的吸光度。以吸光度（A）為橫坐標(biāo)，濃度（C）（mg/mL）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取天麻粉1 g，按上述步驟制備溶液，測(cè)定其吸光度，連續(xù)測(cè)6次，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行分析。

1.2.6 樣品溶液吸光度測(cè)定。參照對(duì)照品溶液，采用蒽酮比色法。在620 nm波長(zhǎng)處測(cè)樣品溶液的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 天麻樣品中多糖含量的計(jì)算

5個(gè)不同產(chǎn)地的天麻樣品每個(gè)樣品做5次重復(fù)，根據(jù)其吸光度，計(jì)算樣品中的多糖含量（表1）。結(jié)果表明：不同產(chǎn)地天麻樣品中多糖含量有所差異，云南昭通天麻中多糖含量最高，為25.04%；其后依次是陜西略陽(yáng)天麻（23.46%）、四川汶川天麻（23.41%）、貴州青龍?zhí)炻椋?0.67%）；含量最低的是湖北神農(nóng)架天麻，其多糖含量為 20.28%。

2.2 不同產(chǎn)地天麻多糖含量多重比較

對(duì)不同產(chǎn)地天麻中多糖的含量進(jìn)行多重比較，分析其差異顯著性（表1）?？梢钥闯?，云南昭通天麻多糖含量與陜西略陽(yáng)天麻、四川汶川天麻多糖含量之間不具有差異顯著性，與貴州青龍?zhí)炻楹秃鄙褶r(nóng)架天麻之間多糖含量的差異極顯著（α=0.01）。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度（A）為橫坐標(biāo)，濃度（C）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程C=0.100 4 A-0.001 1（R=0.999 5），結(jié)果表明葡萄糖在0～0.07 mg/mL范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)測(cè)定，RSD=0.553%（n=6），表明試驗(yàn)的重現(xiàn)性好，儀器的穩(wěn)定性和精密度較高。

3 結(jié)論

為防止由于品種因素造成試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有所偏差，采用一種專利方法[7]對(duì)所提供的樣品進(jìn)行鑒定，確定了品種的一致性。各地不同的環(huán)境因素造成天麻中多糖含量有所差異，云南昭通天麻中多糖含量最高，與其特殊的氣候環(huán)境因素有關(guān)，低緯度高海拔、晝夜溫差大使當(dāng)?shù)刂参镏刑欠值暮肯鄬?duì)于其他地區(qū)要高[8]。

本試驗(yàn)采用回流提取天麻多糖，時(shí)間3 h，溫度80 ℃，料水比為40∶1。乙醇沉淀，提取液與乙醇的比為1∶16，時(shí)間12 h，溫度4 ℃。測(cè)定吸光度時(shí)，蒽酮硫酸溶液和樣品溶液比為3∶1，在60 min內(nèi)完成溶液的測(cè)定。該試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便可靠，重現(xiàn)性好。在試驗(yàn)過(guò)程中，蒽酮硫酸溶液加入到待測(cè)溶液中會(huì)產(chǎn)生大量熱量，造成溶液提前反應(yīng)，使結(jié)果準(zhǔn)確性降低，將試管浸入冰水中，可有效解決此問(wèn)題，保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：54-55.

[2] 王韜，仇權(quán)雷，杜艷倉(cāng)，等.云南昭通天麻多糖含量測(cè)定[J].西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31（1）：31-33.

[3] 于雪，胡文忠，姜愛(ài)麗，等.天麻的活性成分及功能性研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2016，37（8）：392-395.

[4] 陳芳，杜娟，張秉華.天麻多糖的理化性質(zhì)和藥理活性研究[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009，29（6）：71-73.

[5] KOMATSU T，KIDO N，SUGIYAMA T，et al.AntiviraL activity of acidic poLysaccharides from Coccomyxa Loeobotrydiformi，a green aLga，against an in vitro human infLuenza A virus infection[J].Immunopharmacology and ImmunotoxicoLogy，2013，35（1）：1-7.

[6] 陳維紅，羅棟.天麻素、天麻多糖藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物評(píng)價(jià)，2013，30（3）：132-134.

[7] 祁岑，羅家剛，程立君，等.快速鑒別烏天麻的方法及應(yīng)用：中國(guó)，ZL 2014 10188457.X[P].2016-03-30.

[8] 黃敏，武紹波，遲煥彩.昭通蘋果產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].北方園藝，2012（12）：190-193.