劉 煒,崔 敏,宋志元,孫雪峰,梁群超,儲 君,梁留川,張要齊*

（1.鄭州市動物疫病預防控制中心，河南鄭州 450016；2.新鄭市科學技術(shù)局，河南新鄭 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭 451162）

清熱敗毒散的解熱、抗炎及體外抑菌作用研究

劉 煒1,崔 敏2,宋志元3,孫雪峰3,梁群超3,儲 君3,梁留川3,張要齊3*

（1.鄭州市動物疫病預防控制中心，河南鄭州 450016；2.新鄭市科學技術(shù)局，河南新鄭 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭 451162）

為了評價清熱敗毒散的解熱、抗炎和體外抑菌作用，采用家兔蛋白胨發(fā)熱法，小鼠耳廓二甲苯致炎法和體外二倍稀釋法，觀察清熱敗毒散的解熱、抗炎和體外抑菌作用。結(jié)果顯示，清熱敗毒散高、中、低劑量組的家兔體溫變化明顯，4 h時達到正常體溫水平，明顯優(yōu)于陰性對照組和陽性對照組（P＜0.05）；清熱敗毒散高、中和低劑量組的腫脹抑制率分別為38.2%、32.3%和19.6%，高和中劑量組達到了氫化可的松的抑制效果；清熱敗毒散對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的MIC分別為0.031 g/mL、0.063 g/mL和0.125 g/mL，對大腸桿菌的抑制作用最強。表明清熱敗毒散具有良好的解熱、抗炎和體外抑菌作用。

清熱敗毒散；解熱；抗炎；體外抑菌

清熱敗毒散是以中醫(yī)辨證施治為原則，通過現(xiàn)代藥理學技術(shù)研制的一種中藥復方制劑，由板藍根、金銀花、魚腥草、黃芩等多味中藥組成，主要用于細菌、病毒等引起的豬溫熱病的防治。本文采用家兔蛋白胨發(fā)熱法，小鼠耳廓二甲苯致炎法和體外二倍稀釋法，考察了清熱敗毒散的解熱、抗炎及體外抑菌作用，為清熱敗毒散的臨床應用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物

清熱敗毒散，由河南惠通天下生物工程有限公司制備。

阿司匹林片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)，規(guī)格100 mg/片，批號2015070412。氫化可的松注射液，山西兆益生物有限公司生產(chǎn)，規(guī)格20 ml: 100 mg，批號201511232。

1.2 試驗動物

家兔和昆明種小鼠均來自河南省實驗動物中心。

1.3 菌種

大腸桿菌 （CVCC 2801）、沙門氏菌（CVCC 1803）、金黃色葡萄球菌（CVCC 1883）均購自中國獸醫(yī)微生物菌種保藏中心。

2 方法

2.1 中藥提取

稱取清熱敗毒散100 g，浸泡1 h，慢火水煎2次，每次煎煮30 min，合并2次煎液，低速離心濃縮定容至 100 mL，相當于 1 g生藥 /mL，用NaHCO3溶液調(diào)pH至7.0，經(jīng)高壓滅菌、分裝，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 清熱敗毒散的解熱作用[1]

2.2.1 家兔預處理

家兔40只，雌雄各半，雌者無孕，平均體重為2.0±0.2 kg。在給藥前，每隔1 h測量一次體溫，共測量4次。每次體溫均在38.0℃～39.6℃的范圍內(nèi)，且最高和最低的體溫差不超過0.4℃，各兔之間的體溫相差不超過1℃。家兔耳靜脈注射過濾滅菌蛋白胨生理鹽水溶液，劑量為1 mL/kg。觀察家兔體溫變化，每1 h記錄1次。選取注射1 h后體溫上升超0.5℃的家兔作為試驗用兔。

2.2.2 家兔的分組與給藥

將家兔隨機分成5組，每組6只。陰性對照組分別灌服8 mL的生理鹽水作為對照。陽性對照組分別灌服8 mL阿司匹林水溶液 （濃度為25 mg/mL，給藥量為100 mg/kg體重）。試驗組為清熱敗毒散組，分為高、中、低劑量組，分別灌服1、4、8 mL不同濃度的清熱敗毒散水煎液 （給藥量分別為0.5、2.0、8.0 g/kg體重）。給藥后0.15h、1h、2h、3h、4h各測體溫一次，觀察藥物對發(fā)熱兔的解熱效果。

2.3 清熱敗毒散的抗炎作用[5]

2.3.1 小鼠分組及給藥

取昆明種小鼠50只，體重為18～22 g，分為5組，雌雄各半。3個試驗組分高、中、低劑量組，3個劑量組的給藥量分別為 0.5 g/kg、2.0 g/kg、8.0 g/kg體重，氫化可的松對照組腹腔注射氫化可的松，給藥量為0.005 g/kg體重，陰性對照組灌服同體積的生理鹽水作為對照。以上各組劑量每日分兩次給藥，間隔5 h，連續(xù)3天。

2.3.2 檢測指標

于末次給藥1.5 h后，分別將每只小鼠右耳外側(cè)均勻涂抹二甲苯0.2 mL，左耳不涂。致炎后20 min將小鼠拉頸處死，用8 mm打孔器迅速在兩耳相同部位打下耳片，精確稱重，按照以下公式計算鼠耳腫脹度、耳腫脹率和腫脹抑制率。

耳腫脹度=左耳重量-右耳重量

2.4 清熱敗毒散的體外抑菌作用[6]

2.4.1 牛肉膏湯液體培養(yǎng)基的制備

稱取牛肉膏0.3 g，蛋白胨1.0 g，氯化鈉0.5 g。放入燒杯內(nèi)，加少量蒸餾水加熱熔化后，再加蒸餾水至100 mL，用0.5 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到7.2～7.6，過濾，121℃，高壓滅菌30 min。

2.4.2 藥物液體培養(yǎng)基的制備

取滅菌試管8只，依次編號，排列于試管架上。在超凈工作臺內(nèi)，按無菌操作原則，用移液管吸取無菌生理鹽水加入各試管，每管2 mL，再吸取清熱敗毒散水煎液（1 g生藥/mL）2 mL加入第1管，反復吹吸；從第1管吸出2 mL放入第2管，吹勻；又從第2管吸出2 mL放入第3管。依此法逐管按二倍稀釋至第7管，從第7管吸取的2 mL溶液棄去，第8管作為對照管。第1管到第7管藥液依次被稀釋成 2、4、8、16、32、64、128倍，即濃度分別為0.50、0.25、0.125、0.063、0.031、0.016、0.008 g/mL。

2.4.3 菌株的接種與培養(yǎng)

將大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌接種于肉湯培養(yǎng)基中在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～18 h，取出后用麥氏比濁管確定各試驗用菌的近似濃度。根據(jù)所得濃度，用滅菌生理鹽水將各個試驗用菌稀釋到大約1×106CFU/mL。每種菌株稀釋液均接種于含有不同濃度藥物的試管和對照管，每管0.1 mL，接種好后置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h取出，觀察不同細菌在不同濃度的藥物試管中的生長情況。使細菌不生長的最低藥物濃度即為藥物對該菌株的MIC（最小抑菌濃度）。

3 結(jié)果與分析

3.1 清熱敗毒散的解熱作用情況

給藥后體溫變化為家兔實時體溫與家兔正常體溫的差值。由表2-1可知，與陰性對照組相比，阿司匹林組和清熱敗毒散組有明顯的解熱作用，且清熱敗毒散的解熱作用明顯優(yōu)于阿司匹林，但清熱敗毒散高、中、低劑量組之間的解熱作用差異不明顯。結(jié)果說明清熱敗毒散具有較好的解熱作用。

3.2 清熱敗毒散的抗炎作用情況

由表2-2可知，清熱敗毒散高、中、低劑量組與陰性對照組相比差異顯著（P＜0.05），且高和中劑量組明顯優(yōu)于低劑量組（P＜0.05）；清熱敗毒散高和中劑量組與氫化可的松對照組相比差異不明顯（P＞0.05），但氫化可的松對照組明顯優(yōu)于低劑量組（P＜0.05）。結(jié)果表明清熱敗毒散可顯著抑制鼠耳腫脹，達到與氫化可的松相同的抑制效果，其腫脹抑制率分別為38.2%、32.3%、19.6%，說明清熱敗毒散具有較強的消炎作用。

表2-2 清熱敗毒散對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

表2-1 清熱敗毒散對家兔的解熱作用

3.3 清熱敗毒散的體外抑菌作用情況

由表2-3可知，清熱敗毒散對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌均有一定的抑制作用。其中，清熱敗毒散對大腸桿菌的抑制作用最強，其最小抑菌濃度為0.031 g/mL；清熱敗毒散對沙門氏菌的抑制作用較弱，其最小抑菌濃度為0.125 g/mL。

表2-3 清熱敗毒散對各菌株的最小抑菌濃度

4 討論和小結(jié)

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為“熱毒”是由火熱壅盛所致，主要體現(xiàn)在溫熱病和熱毒熾盛癥，皆為里熱。現(xiàn)代研究認為，發(fā)熱主要是外源性致熱原作用于體內(nèi)內(nèi)生致熱原細胞產(chǎn)生并釋放內(nèi)生致熱原（EP）而致。EP是多種致熱性細胞因子，其作為發(fā)熱信息可直接或間接作用體溫調(diào)節(jié)中樞，導致下丘腦中樞性發(fā)熱介質(zhì)的釋放，進而引起溫度敏感神經(jīng)元的興奮性改變，使體溫調(diào)定點上移，產(chǎn)熱增加，散熱減少而發(fā)揮致熱作用[7]。

清熱敗毒散多由清熱類中藥組成，具有解熱、抗炎、抗菌和抗病毒等藥理作用。清熱解毒類中藥的藥理作用主要包括抗病原微生物作用，抗細菌內(nèi)毒素作用，抗炎作用，對免疫功能的影響[5]。板藍根提取物中酸性、中性和兩性化合物抗炎作用不明顯，而堿性化合物具有明顯的抗炎作用[8]，其發(fā)揮清熱解毒功效的有效成分主要為生物堿類、有機酸類、結(jié)合性氨基酸類和多糖類，它們通過調(diào)節(jié)不同機制和不同途徑相互協(xié)調(diào)，共同發(fā)揮作用[9]。金銀花具有清熱解毒、涼散風熱之功效，富含揮發(fā)油，還有黃酮類、三萜類及有機酸等[10]。有研究表明，金銀花的解熱機制可能與逆轉(zhuǎn)致熱原引起的溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的改變有關(guān)[11]。黃芩含有黃芩素和黃芩苷，具有抗菌抗病毒作用和解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用。黃芩素是體內(nèi)的有效成分，在血液中迅速轉(zhuǎn)化為黃芩苷及其他代謝物；而黃芩苷口服不易吸收，其在腸道經(jīng)酶水解為黃芩素后方可吸收入血，并在體內(nèi)也迅速轉(zhuǎn)變?yōu)辄S芩苷[12]。魚腥草含黃酮類化合物、揮發(fā)油和有機酸等[13]，研究表明魚腥草也具有解熱抗炎[14]和抗菌抗病毒的作用[15]。中草藥的抑菌機理目前尚未完全明了，體內(nèi)外抗菌效果可能不一致，體外抑菌試驗對中草藥的抗菌作用只能是一種參考型方法，還需通過臨床試驗加以比較、驗證。

中藥講求的是藥物的組方配伍，中藥單味藥的功用各有所長，也各有所偏，通過合理的配伍可以增強其原有的功用。本試驗研究表明，清熱敗毒散具有較好的解熱、抗炎和抗細菌作用，為其臨床應用提供依據(jù)。

綜上，清熱敗毒散的高、中和低劑量有較好的解熱作用；高和中劑量具較強的抗炎作用，低劑量有一定的抗炎作用；體外抑菌試驗表明清熱敗毒散對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌均勻抑制作用，由強到弱依次為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌。

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S853.74

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1003-8655（2017）02-0009-03

2017-01-06

新鄭市技術(shù)研究與開發(fā)經(jīng)費支持項目（2015CXY08）。

劉煒（1977—），高級獸醫(yī)師，從事動物疫病預防控制工作，Email：480881524@qq.com。

*通訊作者：張要齊，碩士，研究方向為農(nóng)業(yè)推廣，E-mail：httx0371@126.com。