鄒 瑩， 張連富*，3

（1.食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江南大學(xué)，江蘇 無錫 214122；2江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；3.國家功能食品工程技術(shù)研究中心，江南大學(xué)，江蘇 無錫214122）

瑪咖水提物抗小鼠前列腺增生作用

鄒 瑩1，2， 張連富*1，2，3

（1.食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江南大學(xué)，江蘇 無錫 214122；2江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；3.國家功能食品工程技術(shù)研究中心，江南大學(xué)，江蘇 無錫214122）

探討了瑪咖水提物抗前列腺增生的藥效物質(zhì)及其作用機理。將50只雄性ICR小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性藥組，瑪咖組（60mg/kg，含芐基芥子油苷1.44mg/kg）及芐基芥子油苷組（1.44mg/kg）。除空白組外，其他組連續(xù)30 d皮下注射丙酸睪酮（5.0mg/kg），制造小鼠前列腺增生模型，觀察各組小鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)；血清中睪酮（T）、雌二醇（E2）、T/E2水平和前列腺酸性磷酸酶的影響及鏡下病理學(xué)改變。結(jié)果顯示，與模型組相比，瑪咖組和芐基芥子油苷組小鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)顯著降低（P＜0.01），血清T、DHT含量和T/E2比值明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），光鏡下見前列腺增生程度大為減輕，增生的腺上皮乳頭減少或消失，瑪咖組的結(jié)果與芐基芥子油苷組相似。結(jié)果表明，瑪咖水提物和芐基芥子油能顯著抑制小鼠前列腺增生；芐基芥子油苷是瑪咖水提取物抗前列腺增生主要的活性物質(zhì)。

前列腺增生；芐基芥子油苷；瑪咖水提物；丙酸睪酮；抑制作用

良 性 前 列 腺 增 生 癥 （benign prostatic hyperplasia，BPH）屬于中老年男性常見病，它是前列腺尿道周圍區(qū)細胞的良性腺瘤性增生表現(xiàn)為尿道周圍前列腺腺體進行性增生，從而引起下尿路癥狀，最終導(dǎo)致膀胱及腎功能損害，嚴重影響患者的生活質(zhì)量[1-2]?，斂В↙epidium meyenii），俗稱瑪卡、馬卡，英文俗稱MACA，屬十字花科（Brassicaceae）獨行菜屬（Lepidium）一年生或兩年生草本植物，原產(chǎn)于南美安第斯山脈海拔 3 500以上的山區(qū)[3]。長期以來，瑪咖被認為有抗氧化、抗疲勞、增強免疫力、改善性功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、提高生育力，同時還可應(yīng)用于風(fēng)濕癥、呼吸疾病、抑郁癥、貧血癥、女性更年期綜合征等病癥的治療[4]?，斂е刑赜械木呱锘钚缘墓πС煞郑绗斂?、瑪咖生物堿、芥子油苷、異硫氰酸酯、瑪咖酰胺、甾醇等具有重要的藥理作用[5-8]。Yabar等[9]研究3種生態(tài)型瑪咖收獲前、采收、收獲后干燥系列工序的芥子油苷曲線圖，通過含量和黑芥子酶活性的影響時發(fā)現(xiàn)收獲期間的6種芥子油苷，其中芐基芥子油苷在3種生態(tài)型中含量最豐富，占總芥子油苷質(zhì)量的80%。M.Gasco等人研究紅瑪咖對睪酮誘發(fā)良性前列腺增生大鼠的影響，發(fā)現(xiàn)紅瑪咖提取物中芐基芥子油苷劑量不同對前列腺質(zhì)量減小產(chǎn)生影響，推斷芐基芥子油苷可能是瑪咖的生物活性成分，但是紅瑪咖中存在的其他次級代謝物也可能影響前列腺大小[8]?，斂е械钠S基芥子油苷可能與其抑制前列腺增生的功能有關(guān)，但缺乏具體的研究證明。作者為闡明瑪咖抑制前列腺增生的有效物質(zhì)及作用機理提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

瑪咖水提物粉末：日本 Tokiwa Phytochemical公司產(chǎn)品； 芐基芥子油苷： 日本Tokiwa Phytochemical公司 產(chǎn) 品 ； 丙酸睪 酮 注 射 液（Testosterone propionate，TP）：上海通用藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品；睪酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒、雌二醇酶聯(lián)免疫分析試劑盒、前列腺酸性磷酸酶和雙氫睪酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒：上海江萊生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 實驗動物

ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量（24±2）g，SPF級，由上海格瑞斯威公司提供。試驗期間小鼠自由取食和飲水，室溫（22±2）℃，濕度（55±5）%，通風(fēng)，12 h/12 h明暗周期。每周測體質(zhì)量1次，并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整丙酸睪酮注射容積和給藥容積。

1.3 主要儀器

電子天平：Mettler公司產(chǎn)品；高速剪切乳化機FA25：德國FLUKO Equipment Shanghai有限責(zé)任公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

取ICR雄性小鼠50只，小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機分為5組，每組10只。各組分別為：①空白組；②模型組；③陽性藥組（非那雄胺1 mg/kg）；④瑪咖組 （60mg/kg）；⑤芐基芥子油苷組 （1.44mg/ kg）。于第1天開始，除正常對照組皮下注射大豆油外，另外4組實驗組各鼠皮下注射丙酸睪酮（5 mg/（kg/d），連續(xù)30 d）[9]，分別給③、④、⑤組小鼠灌胃非那雄胺、瑪咖、芐基芥子油苷，正常對照組和模型組不給藥，灌胃等容量的生理鹽水，每天灌胃1次。

2.2 取材和結(jié)果處理

連續(xù)灌胃30 d后，禁食12 h。每組小鼠分別稱其體重后，眼靜脈叢取血，分離血清，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）進行睪酮（testosterone，T）、雌二醇（estradiol，E2）、雙氫睪酮（dihydrotestosterone，DHT）含量和前列腺酸性磷酸酶（prostatic acid phospatase，PAP）活性的測定；頸椎脫臼法處死小鼠，剝離前列腺周圍組織，摘取前列腺迅速稱重，計算各組小鼠前列腺濕質(zhì)量的平均值，前列腺指數(shù)及抑制率（指數(shù)=前列腺質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g），抑制率=100（（處理組-陰性對照組）/（陽性對照組-陰性對照組）×100））。其后將前列腺組織用體積分數(shù)10%甲醛固定，4℃冰箱保存，石蠟包埋，切片，厚4μm，HE染色，光鏡下觀察各組前列腺組織的細胞學(xué)形態(tài)。

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16．0統(tǒng)計軟件處理。將檢測結(jié)果計算均值和標準差（x±sd），組間比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗。

3 結(jié)果

3.1 瑪咖和芐基芥子油苷對小鼠前列腺濕質(zhì)量和前列腺指數(shù)的影響

如表1所示，TP處理前后小鼠體質(zhì)量沒顯著差異。與正常對照組相比，模型組的前列腺濕質(zhì)量及指數(shù)增大，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）?，斂ЫM（60 mg/kg）和芐基芥子油苷組（1．44 mg/kg）的前列腺濕質(zhì)量和前列腺指數(shù)均顯著低于模型組 （P＜0．01）?，斂Ш推S基芥子油苷前列腺濕質(zhì)量抑制率分別為84．02%和73．46%，前列腺指數(shù)抑制百分率分別為87．48%和77．31%（見表1）。

表1 瑪咖水提物和芐基芥子油苷對小鼠前列腺增生模型前列腺濕重和指數(shù)的影響（n=10，X±SD）Table 1 Effects of oral adm inistration of M aca aqueous extract and benzyl glucosinolate on body weights and prostatic index in testosterone propionate treated m ice（n=10，±SD）

表1 瑪咖水提物和芐基芥子油苷對小鼠前列腺增生模型前列腺濕重和指數(shù)的影響（n=10，X±SD）Table 1 Effects of oral adm inistration of M aca aqueous extract and benzyl glucosinolate on body weights and prostatic index in testosterone propionate treated m ice（n=10，±SD）

注：模型組與空白組比較，**P＜0．01；不同治療組與模型組比較，##P＜0．01。

前列腺指數(shù)抑制率/% 0 d 31 d空白組 36．18±0．325 36．34±0．532 42．937±3．869 —— 1．182±7．265 ——模型組 34．73±0．559 35．03±0．813 63．050±4．064 3**—— 1．800±4．996**——瑪咖組 36．5±0．667 35．44±0．610 42．59±4．783##84．023 1．202±7．842##87．48芐基芥子油苷組 36．5±1．184 35．34±0．980 44．914±6．006 4##73．459 1．271±6．131##77．31非那雄胺組 34．33±0．855 34．38±0．648 40．250±4．839##94．66 1．171±7．47##92．02組別 體質(zhì)量/g 前列腺濕質(zhì)量/mg 前列腺濕重抑制率/%前列腺指數(shù)/（mg/g）

3.2 瑪咖水提物和芐基芥子油苷對小鼠血清性激素水平和前列腺酸性磷酸酶活性的影響

如圖1（c）和圖1（d）所示，與空白組相比，模型組小鼠血清T水平顯著升高（P＜0．01），可能與皮下注射TP有關(guān)，而E2水平與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明在性腺存在的條件下皮下注射TP可使小鼠體內(nèi)T含量顯著升高，而對E2水平無明顯影響，模型小鼠的前列腺組織在外源性雄激素的作用下出現(xiàn)增生。

與模型組相比，芐基芥子油苷組可顯著降低模型小鼠血清中的T水平（P＜0．01），但瑪咖組T水平與模型組沒有顯著性差異；與模型組相比，瑪咖組和芐基芥子油苷組的E2均有顯著提高 （P＜0．01），但血清中的T/E2的比值均有顯著下降（P＜0．01），與空白組比較，則無明顯差異（圖1（b）和（c））。實驗結(jié)果表明芐基芥子油苷具有明顯降低TP致前列腺增生模型小鼠血清中T水平和升高E2水平的作用；提示瑪咖組和芐基芥子油苷組抑制模型小鼠前列腺增生的作用可能與其降低雄激素水平、升高雌激素水平有關(guān)，改善模型小鼠體內(nèi)的雌、雄激素比例，從而發(fā)揮抗前列腺增生作用。

注：Control：空白組；BPH model：模型組；M：瑪咖組；BGL：芐基芥子油苷組；FN：非那雄胺組。模型組與空白組比較，**P＜0．01，*P＜0．05；不同治療組與模型組比較，##P＜0．01，#P＜0．05。圖1 瑪咖水提物和芐基芥子油苷對小鼠前列腺增生模型血清中PAP、DHT、T、E2和T/E2的影響Fig.1 Effects of M aca aqueous extract and benzyl glucosinolate on PAP，DHT，T，E2 and T/E2 in serum

從圖1（a）和圖1（b）可看出，與空白組相比，模型組小鼠血清中DHT和PAP含量水平明顯升 （P＜0．05），瑪咖組、芐基芥子油苷組與模型組比較有顯著性差異（P＜0．05），能顯著降低實驗前列增生模型組小鼠血清中PAP的活性和血清DHT水平；各給藥組與空白組比較，則無明顯差異。試驗結(jié)果表明瑪咖和芐基芥子油苷均具有抑制前列腺增生模型小鼠前列腺增生，降低模型小鼠PAP的活性和DHT水平的作用。

3.3 瑪咖水提物和芐基芥子油苷對小鼠前列腺組織病理學(xué)改變的影響

各組前列腺切片鏡檢結(jié)果表明，空白組小鼠前列腺上皮為單層柱狀或單層立方上皮構(gòu)成，腺體較均勻排列，個別腺體腺腔增大，腺腔內(nèi)有大量的前列腺分泌物腺腔規(guī)則，腺體和腺細胞豐富飽滿；模型組小鼠前列腺腺體和腺細胞出現(xiàn)明顯增生，大部分腺體呈乳頭狀向腔內(nèi)突出；腺上皮部分呈高柱狀，細胞層次增加，細胞體積增大，細胞質(zhì)較稀少?？梢娫錾袤w排列緊密，腺上皮細胞數(shù)目增多，呈復(fù)層或假復(fù)層，增生的上皮乳頭相互交匯呈層疊或迷路狀結(jié)構(gòu)，乳頭間成裂隙狀腺腔，腺腔內(nèi)無或僅有少許粉染分泌物；非那雄胺組小鼠的前列腺明顯腺體減少，間質(zhì)增多，腺體也明顯減小?，斂ЫM腺體和腺細胞增生不明顯，腺體少量增生，呈乳頭狀向腔內(nèi)突出，上皮為為單層柱狀上皮，少數(shù)呈高柱狀，分泌物減少；芐基芥子油苷組小鼠前列腺增生程度大為減輕，大小比較一致，腺細胞豐富飽滿，排列整齊，接近正常腺體；非那雄胺治療組，腺體和腺細胞增生不明顯，有少數(shù)腺體和細胞出現(xiàn)增生，分泌功能增強，細胞變得明亮增大，見圖2。

圖2 瑪咖和芐基芥子油苷對小鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)的影響（×200）Fig.2 Effects of M aca aqueous extract and benzyl glucosinolate on histoarchitecture of prostate（× 200）

4 討論

西藥治療是目前治療良性前列腺增生的主要方法，但花費高而且有副作用。因此溫和，有效，低副作用的植物有效成分提取物和保健品越來越受到人們的關(guān)注和歡迎。

研究結(jié)果顯示瑪咖水提物和芐基芥子油苷對TP誘發(fā)的前列腺增生具有明顯抑制作用。與模型組相比，瑪咖和芐基芥子油苷能顯著降低小鼠前列腺濕重和指數(shù)增高，抑制PAP活力并降低DHT水平。瑪咖、芐基芥子油苷能抑制5α-還原酶活性進而降低DHT水平。但瑪咖不影響雄性激素受體和T，但它影響前列腺，這表明與芐基芥子油苷和非那雄胺不同，瑪咖作用于前列腺5α-還原酶反應(yīng)后期。瑪咖水提物對前列腺濕質(zhì)量和前列腺指數(shù)的抑制率強于芐基芥子油苷，可能是因為瑪咖中可能存在其他的活性成分對前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)的抑制有協(xié)同增效作用?，斂嵛锖推S基芥子油苷同時能顯著提高小鼠血清E2水平，抑制T/E2升高，調(diào)節(jié)性激素平衡，前列腺增生得到抑制，但瑪咖水提物中活性成分可能對血清激素水平造成影響，因此芐基芥子油苷組的激素水平更接近空白對照組?，斂Ш推S基芥子油苷對前列腺增生的抑制作用相似，根據(jù)HPLC數(shù)據(jù)，瑪咖水提物的芐基芥子油苷含量與芐基芥子油苷的劑量相同，都是1.44mg/kg，由此推斷瑪咖水提物抑制前列腺增生的主要活性物質(zhì)很可能是芐基芥子油苷。進一步研究芐基芥子油苷在抗前列腺增生中所扮演的角色，將有助于闡明瑪咖抑制前列腺增生的分子機制?，斂η傲邢僭錾囊种谱饔眯?yīng)較為溫和，顯示了其作為安全有效的防治男性良性前列腺增生類植物保健品的良好開發(fā)前景。

[1]HE Leye.Clinical study of lower urinary tract symptoms and benign prostatic hyperplasia[J].Changsha：Central South University，PhD.2010.

[2]SHEN Nan，REN Kuang，WANGYanchun，etal.Inhibitory effectof secoisolariciresinoldiglusosideon hyperplasia of prostate in ratsand itsmechanism[J].J Jilin Univ（Med Edi），2011，37（2）：288-291.

[3]XU Tiancai，XUERunguang，YANGShaohua，etal.Study on thepowder-characteristicsofmacaused asmedicineand food[J].J Chinese Agri Sci Bull，2012，28（12）：241-247.

[4]JINWenwen.Study on the functional factors of Lepidium meyenii，a plantw ithmedicine and food characteristics[J].W uhan：Huazhong University of Science&Technology，2006.

[5]LILei，ZHOU Shengsheng.Nutrition，food security assessmentand developmentprospectsofMaca[J].Sci Techn Food Indus，2012，33（5）：376-379.

[6]SHENWeizhi，ZHOU Yuxiao，LIN Guangyue，etal.Bioactive constituents and anti-fatigue effects in vivo of Lepidium meyenii（Maca）[J].J Food Sciand Bio，2014，33（7）：721-726.

[7]GUSTAVO FGonzales，SARA M iranda，JESSICA Nieto，etal.Redmaca（Lepidium meyenii）reduced prostate size in rats[J]. Reprod Biol Endocrin，2005，3（5）：1-16.

[8]GASCO M，VILLEGAS L，YUCRA S，et al.Dose-response effect of Red Maca（Lepidium meyenii）on benign prostatic hyperplasia induced by testosteroneenanthate[J].Phytomedicine，2007，14：460-464.

[9]EM ILIO Yábar，ROM INA Pedreschi，ROSANA Chirinos，etal.Glucosinolate contentandmyrosinase activity evolution in three maca（Lepidium meyenii Walp.）ecotypes during preharvest，harvest and postharvest drying[J].Food Chem，2011，127：1576-1583.

[10]GUO Qinglong，DING Qilong，WU Zhaoqiu.Effectof baicalein on experimental prostatic hyperplasia in rats andm ice[J].Biol Pharm Bull，2004，27（3）：333-337.

Protective Effects of Lepidium Meyenii（M aca）Aqueous Extract on Benign Prostatic Hyperp lasia in M ice

ZOU Ying1，2， ZHANG Lianfu*1，2，3
（1.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；2.School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；3.National Engineering Research Center For Functional Food，Jiangnan University，Wuxi214122，China）

The main substance in Maca aqueous extract responsible for the inhibition of benign prostatic hyperplasia（BPH）inm icewas investigated in thisstudy and themechanism was discussed. Fifty male ICR m ice were random ly divided into five groups：the control group，the BPH model group，the finasteride group，the Maca extract group treated w ith 60 mg/kg Maca（containing 1.44 mg/kg benzylglucosinolate）and the benzylglucosinolate group w ith a dose of 1.44mg/kg.BHPwas induced in allm ice by subcutaneous injection of testosterone propionate（TP，5.0 mg/kg）w ith the controlgroup excepted.The inhibitory effectson BPH ofMaca extractand benzylglucosinolatewere evaluated using the prostate wet weight，the prostatic index （PI），testosterone （T），dihydrotestosterone（DHT），estradiol（E2），the value of T/E2，the prostatic acid phospatase（PAP）inserum and histopathology exam ination.Comparing w ith the BPH model group，the Maca extract group and benzyl glucosinolate group significantly decreased the prostate wetweight and PI（P＜0.01），aswellas the valuesof T，DHT and T/E2 in serum（P＜0.05 or P＜0.01）.A great reduction of BPH was observed w ith the prostate glandular hyperplasia reduced or disappeared.The similar histological effects were achieved for the Maca group and benzyl glucosinolate group.The results confirmed an effective inhibition of BPH in m ice by the Maca aqueous extract and benzyl glucosinolatewhichwas suggested as themain bioactive component in Maca extract.

Benign prostatic hyperplasia，benzyl glucosinolate，maca aqueous extract，testosterone propionate，inhibition effect

R 697.32

A

1673—1689（2017）04—0371—05

2015-05-02

國家自然科學(xué)基金項目（31171724）；國家“十二五”科技支撐計劃項目（2012BAD33B05）。

*通信作者：張連富（1967—），男，河北唐山人，工學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事功能性食品研究。E-mail:lianfu@jiangnan.edu.cn

鄒瑩，張連富.瑪咖水提物抗小鼠前列腺增生作用[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報，2017，36（04）：371-375.