張俊彪，郭軍霞

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，河南新鄉(xiāng)453100）

紅景天苷對人心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制

張俊彪，郭軍霞

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，河南新鄉(xiāng)453100）

目的觀察人心肌細(xì)胞（HCM）在不同濃度紅景天苷的刺激下其乳酸脫氫酶（LDH）、脫酸激酶（CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和超氧化物歧化酶（SOD）的釋放量，以及心肌細(xì)胞活性的變化。分析紅景天苷對人心肌細(xì)胞的作用，并探討其可能的分子機(jī)制。方法體外模擬缺氧環(huán)境對人心肌細(xì)胞造成損傷，測定不同濃度紅景天苷作用下人心肌細(xì)胞LDH、CK、AST以及SOD釋放量，并采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)法試劑盒（cck-8）檢測不同處理組細(xì)胞活性，赫克斯特-碘化丙啶（Hoechst-PI）雙染觀察細(xì)胞凋亡情況，免疫熒光染色檢測低氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）表達(dá)。結(jié)果與缺氧對照組比較，1×10-4、10-5及10-6mol/L紅景天苷處理組LDH、CK和AST釋放量均降低，呈劑量依賴性（P＜0.01）。與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（1×10-4、10-5及10-6mol/L）細(xì)胞上清SOD含量增加，呈劑量依賴性（P＜0.01）。與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（1×10-4、10-5及10-6mol/L）人心肌細(xì)胞隨著紅景天苷的劑量增大，細(xì)胞活性逐漸升高。與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（1×10-4、10-5及10-6mol/L）人心肌細(xì)胞隨著紅景天苷的劑量增大，死亡以及凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)明顯減少趨勢。缺氧可激活HIF-1α的表達(dá)。結(jié)論紅景天苷能抑制人心肌細(xì)胞LDH、CK和AST的釋放，增加SOD的含量，同時(shí)可提高人心肌細(xì)胞的活性并減少其凋亡，對其有保護(hù)作用，其分子機(jī)制可能與誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá)有關(guān)。

紅景天苷；人心肌細(xì)胞；缺氧；細(xì)胞活性；低氧誘導(dǎo)因子α

心血管疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康。慢性心力衰竭近年來發(fā)病率逐年增加，其中冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┦瞧渥钪饕牟∫颉９谛牟〉纳頇C(jī)制為冠狀動(dòng)脈急性狹窄使其供應(yīng)區(qū)域的心肌細(xì)胞在短期內(nèi)發(fā)生缺血、缺氧以及再灌注損傷，從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡。紅景天苷是藏藥紅景天的主要成分，經(jīng)藥效學(xué)證實(shí)紅景天具有明顯的抗心肌缺氧、缺血的作用。在急性心肌缺血早期，心肌細(xì)胞死亡的主要方式為細(xì)胞凋亡[1]。低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor 1-alpha，HIF-1α）是低氧誘導(dǎo)的一個(gè)特異性轉(zhuǎn)錄活化因子。HIF-1可能通過影響凋亡調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究擬通過在細(xì)胞水平分析在不同濃度紅景天苷的作用下，人心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH），肌酸激酶（creatine kinase，CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的釋放量以及細(xì)胞活性的改變，并觀察在紅景天苷有效濃度作用下人心肌細(xì)胞凋亡情況以及HIF-1表達(dá)的情況，進(jìn)一步探討紅景天苷在心肌細(xì)胞的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株人心肌細(xì)胞株（human cardiac myocytes，HCM）購買于通派（上海）生物有限公司。

1.1.2 主要試劑紅景天苷（大連美侖生物技術(shù)有限公司），LDH、CK、AST測試盒（南京建成生物工程研究所），SOD檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），活細(xì)胞計(jì)數(shù)法試劑盒（cell counting kit-8，CCK-8）（日本同仁化學(xué)研究所），胎牛血清（fatal bovine serun，F(xiàn)BS）（美國Gibco公司），達(dá)爾伯克必須基本培養(yǎng)基（H-dulbecco's modified eagle medium，H-DMEM）培養(yǎng)基（美國Hyclone公司），Hoechst33342染料（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），蛋白酶抑制劑（protease inhibitor，PI）染料（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，HIF-1α抗體（美國BI公司），異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記二抗（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（美國Hyclone公司），DMSO（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），胰蛋白酶（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)人心肌細(xì)胞株（HCM）生長于含10%FBS的H-DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)，當(dāng)生長密度達(dá)到90%時(shí)開始進(jìn)行細(xì)胞傳代。

1.2.2 心肌細(xì)胞缺氧模型的建立心肌細(xì)胞生長接近至融合狀態(tài)時(shí)，選用Koyama T等人的方法模擬人體內(nèi)缺氧環(huán)境，配制缺氧液（mmol/L）：NaH2PO30.9、NaHCO36.0、MgSO41.2、CaCl21.0、乳酸鈉40、HEPES 20、KCl 10.0、NaCl 98.5，pH值6.8，37℃。用缺氧液置換正常培養(yǎng)液，在高濃度飽和氮?dú)猓ǎ?5%，1 L/min）下作用30min，測血?dú)釶O2≤4.0 kPa。三氣培養(yǎng)箱（950 ml/L N2，50 ml/L CO2）中密閉孵育處理6 h，造成心肌細(xì)胞缺氧損傷，建立心肌細(xì)胞缺氧模型[2]。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為6組：①正常對照組：用正常培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，不加藥物處理；②缺氧對照組：參照上述方法，建立缺氧模型，不加藥物處理；③取生長對數(shù)期細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)加入濃度為1×10-4mol/L的紅景天苷預(yù)處理細(xì)胞，然后參照缺氧方法處理細(xì)胞；④取生長對數(shù)期細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)加入濃度為10-5mol/L的紅景天苷預(yù)處理細(xì)胞，然后參照缺氧方法處理細(xì)胞；⑤取生長對數(shù)期細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)加入濃度為1×10-6mol/L的紅景天苷預(yù)處理細(xì)胞，然后參照缺氧方法處理細(xì)胞；⑥陽性藥物對照組：缺氧+1×10-7mol/L胰島素初始劑量（initial(dose)insulin，INS）預(yù)處理組，處理方法參照③～⑤組。

1.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH、CK和AST的活性測定按上述方法處理后的各組細(xì)胞取100μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液，參照LDH、CK和AST試劑盒說明書進(jìn)行操作，于生化分析儀上檢測LDH，CK和AST的活性。

1.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SOD的活性測定按上述方法處理后的各組細(xì)胞取100μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液，參照SOD檢測試劑盒說明書的方法于核酸蛋白分析儀上測定550 nm處測光吸收度值，對各組細(xì)胞SOD的含量進(jìn)行測定。

1.2.6 細(xì)胞活性檢測取生長對數(shù)期細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)加入濃度分別為1×10-4、10-5及10-6mol/L的紅景天苷做預(yù)處理，然后參照缺氧方法處理細(xì)胞，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，每孔5×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，置于37℃，含5%CO2飽和濕度的敷箱中繼續(xù)孵育24 h過夜。生長融合至90%時(shí)取出96孔板，按每孔10 μl加入CCK-8試劑，于敷箱中放置3 h后酶標(biāo)儀450 nm波長下分別檢測各組細(xì)胞的吸光度值（optical density，OD），吸光度值既可以反映各處理組的細(xì)胞活性，又可以反映活細(xì)胞數(shù)量。

1.2.7 Hoechst-PI雙染檢測人心肌細(xì)胞凋亡取各組處于生長對數(shù)期生長狀態(tài)良好的細(xì)胞棄去原培養(yǎng)液，PBS清洗3次，分別加入5 mg/L Hoechst33342以及5 mg/L PI染料試劑，嚴(yán)格按照說明書操作，室溫下避光孵育10 min，于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡的情況。

1.2.8 免疫熒光檢測紅景天苷對HIF-1α的影響將處于生長對數(shù)期的人心肌細(xì)胞接種于12孔板，4%多聚甲醛固定并做透化處理，PBS清洗3次后，用10%羊血清封閉，隨后加入HIF-1α兔多克隆抗體，于4℃環(huán)境過夜孵育。再次PBS清洗3次，羊抗兔FITC標(biāo)記的熒光二抗孵育30 min后置于光顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍攝圖像保存。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組數(shù)據(jù)間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LD H、C K和AST活性

各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的LDH、CK和AST的活力（見表1）。與正常對照組比較，缺氧對照組心肌細(xì)胞上清中LDH，CK和AST釋放量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與缺氧對照組1×10-4、10-5及10-6mol/L紅景天苷處理組LDH，CK和AST釋放量均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其降低LDH、CK和AST釋放量的作用呈劑量依賴性，隨著紅景天苷作用濃度的增高，心肌細(xì)胞釋放的LDH、CK和AST逐漸減少，紅景天苷10-4mol/L處理組與胰島素處理組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明紅景天苷對細(xì)胞有保護(hù)作用。

表1 紅景天苷對缺氧心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液LD H、C K和AST釋放量的影響（u/dl±s）

表1 紅景天苷對缺氧心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液LD H、C K和AST釋放量的影響（u/dl±s）

注：1）與正常對照組比較，P＜0.05；2）與缺氧對照組比較，P＜0.05

A S T含量正常對照組2 9 8 . 4 2 ± 2 3 . 5 6 2 0 . 7 1 ± 4 5 . 3 2 3 0 1 ± 4 5 . 2 6缺氧對照組8 9 4 . 9 8 ± 5 6 . 3 91）2 8 6 7 . 6 7 ± 7 8 . 5 71）7 0 5 . 5 8 ± 4 3 . 8 51）組別L D H含量C K含量缺氧+紅景天苷1 0-6m o l / L 3 9 7 ± 6 5 . 2 62）1 4 4 5 . 8 7 ± 5 7 . 5 42）6 3 7 . 3 2 ± 3 4 . 6 32）缺氧+紅景天苷1 0-5m o l / L 3 6 4 ± 3 5 . 3 52）1 0 7 5 . 7 6 ± 7 5 . 4 32）5 5 8 . 2 3 ± 3 5 . 3 52）缺氧+紅景天苷1 0-4m o l / L 3 4 5 ± 1 2 . 5 62）7 8 9 . 4 6 ± 4 6 . 4 22）5 0 1 . 6 4 ± 2 7 . 8 52）缺氧+ 1 × 1 0-7m o l / L胰島素3 1 2 . 3 2 ± 2 8 . 3 82）1 2 9 . 3 8 ± 3 9 . 2 22）3 7 8 . 5 7 ± 3 9 . 4 82）

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SO D活性

與正常對照組SOD含量（17.83±0.45）u/L比較，缺氧對照組細(xì)胞上清SOD含量（9.04±0.28）u/L降低（P＜0.01）。與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（1×10-4、10-5及10-6mol/L）細(xì)胞上清液SOD含量顯著增加，其增加SOD含量的作用呈劑量依賴性。隨著紅景天苷作用濃度的增高，心肌細(xì)胞SOD含量逐漸升高（P＜0.01），紅景天苷10-4mol/L處理組與胰島素處理組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明紅景天苷對細(xì)胞有保護(hù)作用。見圖1。

圖1 紅景天苷對缺氧心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液SO D含量的影響

2.3 細(xì)胞活性

與正常對照組比較，缺氧對照組心肌細(xì)胞活性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（10-4、10-5及10-6mol/L）人心肌細(xì)胞活性隨著紅景天苷的劑量增大，抑制率逐漸減小，細(xì)胞活性逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），紅景天苷10-4mol/L處理組與胰島素處理組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明紅景天苷對人心肌細(xì)胞有提高細(xì)胞活性的作用。見表2。

表2 紅景天苷對心肌細(xì)胞活性的影響（n＝6±s）

表2 紅景天苷對心肌細(xì)胞活性的影響（n＝6±s）

注：1）與正常對照組比較，P＜0.05；2）與缺氧對照組比較，P＜0.05

組別O D值抑制率/ %P值正常對照組1 . 1 2 ± 0 . 0 2 1 0缺氧對照組0 . 4 5 ± 0 . 0 1 4 5 9 . 8 2 ± 4 . 1 21）0 . 0 2 3缺氧+紅景天苷1 0-6m o l / L 0 . 6 9 ± 0 . 0 4 2 4 1 . 6 1 ± 3 . 3 62）0 . 0 0 4缺氧+紅景天苷1 0-5m o l / L 0 . 7 7 ± 0 . 0 7 3 3 1 . 2 5 ± 2 . 2 42）0 . 0 0 1缺氧+紅景天苷1 0-4m o l / L 0 . 8 1 ± 0 . 0 3 1 2 7 . 6 7 ± 1 . 8 82）0 . 0 0 0缺氧+ 1 × 1 0-7m o l / L胰島素1 . 0 1 ± 0 . 0 1 3 9 . 8 7 ± 2 . 3 42）0 . 0 0 6

2.4 紅景天苷對缺氧損傷心肌細(xì)胞凋亡及死亡的影響

Hoechst-PI雙染檢測結(jié)果（見圖2），正常對照組的細(xì)胞胞漿飽滿，呈橢圓形或梭形，不同濃度紅景天苷處理組以及胰島素處理組的心肌細(xì)胞形態(tài)變化明顯小于缺氧對照組，生長較好，核區(qū)染色均勻；缺氧對照組細(xì)胞核區(qū)體積變小，皺縮明顯，出現(xiàn)較多死細(xì)胞，PI染色后出現(xiàn)強(qiáng)紅色熒光；紅景天苷給藥組隨著藥物濃度的逐漸升高，死亡以及凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)減少趨勢。

圖2 紅景天苷對缺氧損傷的人心肌細(xì)胞凋亡及死亡的影響（Hoechst-PI雙染×200）

2.5 紅景天苷對心肌細(xì)胞H I F-1α表達(dá)的影響

缺氧可誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá)，使細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境，正常情況下HIF-1α較少表達(dá)，表達(dá)主要集中在細(xì)胞胞漿中，紅景天苷10-4mol/L處理后可增加細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)（見圖3）。

圖3 紅景天苷對H I F-1α的影響（免疫熒光×200）

3 討論

紅景天系薔薇目景天科紅景天屬，是多年生草本或亞灌木野生植物，一般成片密集生長于高海拔地帶。紅景天苷具有抗缺氧、抗疲勞、抗寒冷、清除氧自由基、免疫調(diào)節(jié)及保護(hù)心血管等諸多藥理作用[3]。張中平等[4]人采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法制備大鼠急性心肌缺血模型，發(fā)現(xiàn)紅景天苷可降低缺血-再灌注損傷的大鼠心電圖ST段的變化幅度，并減小大鼠急性心肌梗死的面積，進(jìn)而減輕心肌缺血-再灌注的損傷。紅景天對由過氧化氫誘導(dǎo)的子鼠心肌細(xì)胞凋亡有抑制作用，其作用機(jī)制可能與其抗脂質(zhì)氧化有關(guān)[5]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，紅景天苷可保護(hù)冠心病伴糖尿病患者的心肌功能，改善患者的腎功能[6]。此外，紅景天還有能夠抑制腫瘤的發(fā)生的作用，如人肝癌HepG2細(xì)胞[7]及腹水型H22肝癌[8]。

NATARAJAN R等人實(shí)驗(yàn)得出，心肌細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下，可通過上調(diào)HIF-1信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）的表達(dá)，啟動(dòng)對下游靶基因的調(diào)控。從而使下游血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血紅素加氧酶、一氧化氮合酶以促紅細(xì)胞生成素等靶基因表達(dá)活性的增加[9]。紅景天苷還具有促進(jìn)正常生長的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增殖，類似VEGF樣作用[10]，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有利于血管的發(fā)生和重建從而建立側(cè)支循環(huán)，對心室重塑以及改善心肌梗死的預(yù)后有促進(jìn)作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，紅景天苷體外灌流可使（sprague dawley，SD）大鼠心肌細(xì)胞膜鈉通道電流（INa）的I-V曲線下移，增加電流幅值，該作用可能與紅景天苷增加鈉通道失活電位、抑制電流失活有關(guān)[11]。心力衰竭以及心肌梗死后心室重塑發(fā)生、發(fā)展中的重要病理生理機(jī)制之一是細(xì)胞凋亡，紅景天苷通過抑制這一機(jī)制，可起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。

正常情況下，心肌細(xì)胞胞質(zhì)中含有大量的LDH、CK和AST，屬于胞漿酶。而培養(yǎng)液中含量較低，細(xì)胞損傷后，大量LDH、CK和AST被釋放到上清液中使血清酶活性升高。因此本研究通過測定LDH含量的變化可以反映細(xì)胞的損傷程度。研究結(jié)果表明，隨著紅景天苷作用濃度的增高，心肌細(xì)胞釋放的LDH、CK和AST逐漸減少，說明紅景天苷對心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。

缺氧可以使心肌細(xì)胞能量代謝發(fā)生紊亂而導(dǎo)致氧自由基生成增多，氧自由基通過細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化又可導(dǎo)致細(xì)胞損傷，從而引起細(xì)胞凋亡。SOD可避免超氧離子的損傷。故本實(shí)驗(yàn)選用SOD作為檢測的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組比較，紅景天苷處理組（1×10-4、10-5及10-6mol/L）細(xì)胞上清液SOD含量顯著增加，其增加SOD含量的作用呈劑量依賴性。說明紅景天苷可提高過氧化物酶活性從而達(dá)到抗氧化的作用，從而保護(hù)心肌細(xì)胞。

CCK-8檢測細(xì)胞活性的原理為試劑中的2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽（WST-8）在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。本研究與缺氧對照組比較，紅景天苷處理組（1× 10-4、10-5及10-6mol/L）人心肌細(xì)胞活性隨著紅景天苷的劑量增大，細(xì)胞活性逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明紅景天苷可提高人心肌細(xì)胞的活性及存活率，對心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。

在Hoechst-PI雙染檢測人心肌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)中，正常對照組的細(xì)胞胞漿飽滿，呈橢圓形或梭形，不同濃度紅景天苷處理組以及胰島素處理組的心肌細(xì)胞形態(tài)變化明顯小于缺氧對照組，生長較好，核區(qū)染色均勻；缺氧對照組細(xì)胞核區(qū)體積變小，皺縮明顯，出現(xiàn)較多死細(xì)胞，PI染色后出現(xiàn)強(qiáng)紅色熒光；紅景天苷給藥組隨著藥物濃度的逐漸升高，死亡以及凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)明顯減少趨勢，說明紅景天苷具有減少人心肌細(xì)胞凋亡的作用。

HIF-1作為低氧誘導(dǎo)特異的一個(gè)特異性轉(zhuǎn)錄活化因子可調(diào)節(jié)多種基因如酪氨酸脫氫酶、促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）以及VEGF等在低氧環(huán)境下的表達(dá)，并可影響低氧時(shí)血管形成、血紅蛋白合成和多種代謝過程及生理過程，在細(xì)胞對低氧反應(yīng)的信號傳遞中，具有重要的生物功能[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，缺氧可誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá)，使細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境，正常情況下，HIF-1α較少表達(dá)，表達(dá)主要集中在細(xì)胞胞漿中，紅景天苷10-4mol/L處理后可明顯增加細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)。

本研究在細(xì)胞水平分析人心肌細(xì)胞在紅景天苷作用下發(fā)生的變化，得到結(jié)論紅景天苷能抑制人心肌細(xì)胞LDH、CK和AST的釋放，增加SOD的含量，同時(shí)可提高人心肌細(xì)胞的活性，減少死亡及凋亡的細(xì)胞，對其有保護(hù)作用，其分子機(jī)制可能與誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá)有關(guān)。進(jìn)一步闡明紅景天苷對心肌細(xì)胞可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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Protective effect of salidroside on human myocardial cells during hypoxia injury and possible mechanism

Jun-biao Zhang,Jun-xia Guo
(Department of Cardiology,the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang,Henan 453100,China)

ObjectiveTo investigate the effect of different concentrations of salidroside on LDH,CK,AST and SOD release quantity in supernatant of human myocardial cells,and the changes of human myocardial cells activity,and To find the effect of salidroside on human myocardial cells and discuss the possible molecular mechanisms.MethodsThe hypoxic model in vitro was established and the LDH,CK,AST and SOD release quantity in supernatant of human myocardial cells dealt with different concentrations of salidroside were measured.Cell activity of different treatment groups was analyzed by CCK-8 assay.Apoptotic changes in HCM cells were observed by using Hoechst-PI staining.The expression of HIF-1α was determined by immunofluorescence.ResultsCompared with the hypoxia control group,the concentration of LDH, CK,and AST was significantly decreased and SOD was significantly increased with the dose-dependent dealt by different concentrations of salidroside(1×10-4,10-5and 10-6mol/L).Salidroside significantly increased the activity of human myocardial cells with the dose-dependent.Compared with the hypoxia control group,human myocardial cell death and apoptotic of salidroside treatmentgroups(1×10-4,10-5and 10-6mol/L)showed significant decreased trend.Hypoxia activated the HIF-1α expression.ConclusionsSalidroside could significantlyinhibit the release of LDH,CK and AST,and increase SOD content in human myocardial cells.At the same time,it can improve the activity and reduce apoptosis of human myocardial cells.The molecular mechanism may be related to HIF-1α expression.

salidroside;human myocardial cells;hypoxia;cell activity;HIF-1α

R852.11

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.08.005

1005-8982（2017）08-0021-06

2016-10-05