蘇乾蓮　梁家幸　卿珍慧　周英寧　陳忠偉　蔣冬?！”R敬?！±畋蟆≡S松芳　段群棚　趙武

摘要：[目的]檢測桂科育成豬的血常規(guī)指標，明確不同功能細胞（紅細胞、白細胞和血小板）的數(shù)量變化及形態(tài)分布情況，為桂科豬的免疫評估與抗病性能研究提供基礎數(shù)據(jù)。[方法]于49日齡起每周對44頭桂科育成豬（公母各半）采血1次，連續(xù)采樣7周，測定其血常規(guī)指標，并與長白豬和恩施黑豬的血常規(guī)指標進行比較分析。[結果]在桂科育成豬不同日齡的紅細胞類檢測指標中，紅細胞計數(shù)（RBC）和血紅蛋白含量（HGB）均在70日齡達最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的對應值（P<0.05，下同）；平均紅細胞血紅蛋白（MCH）和平均血紅蛋白濃度（MCHC）的變化規(guī)律基本一致，均在70日齡達最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日齡達最高值（16.40 pg和314.30g/L）；紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）和紅細胞體積分布寬度（RDW）的變化相對較穩(wěn)定，不同日齡間均無顯著差異（P>0.05，下同）。在白細胞類檢測指標中，白細胞計數(shù)（WBC）于63日齡達最低值（13.71×10/L）、84日齡達最高值（17.52×10/L），二者差異顯著；中性粒細胞計數(shù)（NEUT）在70日齡時達最低值（3.61×10/L），顯著低于49和56日齡的對應值。淋巴細胞計數(shù)（LYMPH）的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。在血小板類檢測指標中，血小板計數(shù)（PLT）、血小板壓積（PCT）及血小板平均分布寬度（PDW）在不同日齡的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。與35日齡長白豬和5月齡以上恩施黑豬相比，桂科育成豬除HCT、平均血小板體積（MPV）、PCT和PDW等少數(shù)指標表現(xiàn)異常外，其他大部分血常規(guī)指標介于長白豬與恩施黑豬血常規(guī)指標范圍內。[結論]桂科育成豬在血常規(guī)指標方面有一定的獨特性，發(fā)育至49-91日齡時已具備較穩(wěn)定的免疫系統(tǒng)。

關鍵詞：桂科育成豬；長白豬；恩施黑豬；血常規(guī)指標；測定分析

0引言

[研究意義]血常規(guī)指標是免疫學測定的基本指標。因免疫功能易于度量測定，其研究結果也證實免疫指標可作為抗病育種的間接指標，因此通過免疫指標篩選提高動物疾病抗性是一條實際可行的有效途徑（Arosa et al.，2004；vail de Vosse et al.，2009）。血液對保證機體新陳代謝、生理功能調節(jié)及內外環(huán)境平衡起重要作用，一旦機體機能出現(xiàn)問題，首先在血液指標上有所反應；反之，血液中的任何有形成分或指標發(fā)生病理變化，其影響也勢必在全身組織器官有所反映（Beutler，2004；陳少康等，2015）。因此，臨床醫(yī)學上已將血常規(guī)指標檢測作為疾病診斷必不可少的一種輔助手段。[前人研究進展]程澤信等（2007）在長江大學種豬場開展家豬和家野雜交一代及雜交二代的血液指標測定，結果表明，野豬血緣含量越大，血液中紅細胞運輸O2和CO2的能力越強，其運動機能也越強，有利于肉質的提高；白細胞數(shù)及血紅蛋白含量增高，則說明免疫系統(tǒng)有所增強，對疾病具有更強的抵抗力。劉江偉等（2007）探討長白仔豬血常規(guī)指標及其生化指標的正常值，發(fā)現(xiàn)長白仔豬的血常規(guī)指標及生化指標并無性別差異，但與巴馬小型香豬的參考值存在顯著差異，即長白仔豬具有其獨特的生理生化特征。李春燕等（2012）研究了中藥添加劑對豬血常規(guī)指標的影響，結果發(fā)現(xiàn)在基礎日糧中添加不同比例中藥添加劑能顯著提高豬大淋巴細胞、漿細胞和單核細胞含量及IgG和IgM水平，即中藥添加劑對豬具有促進增重、增強免疫的作用。王懷中等（2014）利用全自動血液細胞分析儀和流式細胞儀測定大蒲蓮和長白仔豬的血常規(guī)指標和T淋巴細胞亞群性狀，并對這些性狀進行品種和母豬效應分析，結果表明，大蒲蓮仔豬和長白仔豬在大部分血常規(guī)指標及T淋巴細胞亞群性狀方面存在顯著或極顯著差異。陳少康等（2015）研究表明，病豬群與長白豬的平均紅細胞體積（MCV）、血小板計數(shù)（PLT）和粒細胞百分比（GRN）差異顯著，平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞體積分布寬度（RDW）、平均血小板體積（MPV）、白細胞計數(shù)（WBC）、淋巴細胞計數(shù)（LYMPH）、中值細胞計數(shù)（MID）、中性粒細胞計數(shù)（NEUT）差異極顯著，其他指標差異不顯著，其中白細胞類指標變化在一定程度上反映出豬群的健康情況，可作為一種評價豬群健康程度的輔助方法。向宇等（2015）對比分析了恩施黑豬與其他豬種的血液指標，并對恩施黑豬CX-CR4基因SNP位點進行基因分型，結果證實CXCR4基因SNP位點可用于探究血液指標變化。郭士琪等（2016）研究豬瘟、豬藍耳病免疫程序對豬血液指標的影響，擬從血液指標水平確定最佳免疫程序，最終確定豬瘟弱毒疫苗和豬藍耳病弱毒苗的最佳免疫程序為：首先免疫豬瘟弱毒疫苗，間隔7 d后再免疫豬藍耳病弱毒疫苗，其免疫效果最佳，生長性能最優(yōu)。[本研究切入點]桂科豬是廣西畜牧研究所利用廣西本地品種陸川豬與外來品種豬雜交培育獲得的一個新配套系品種，兼具本地豬肉質鮮美和外來豬生長速度快的雙重優(yōu)點，深受廣大養(yǎng)殖戶的青睞（潘天彪等，2010；謝炳坤等，2012；羅鮮青等，2015），但至今尚無關于桂科豬血常規(guī)指標測定的研究報道。[擬解決的關鍵問題]通過檢測桂科育成豬的血常規(guī)指標，明確不同功能細胞（紅細胞、白細胞和血小板）的數(shù)量變化及形態(tài)分布情況，為桂科豬的免疫評估與抗病性能研究提供基礎數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

7周齡（49日齡）桂科育成豬由廣西畜牧研究所桂科豬育種場提供，共44頭，公母各半，體重35-60kg/頭。

1.2試驗方法

1.2.1血樣采集 采血前禁食12 h，記錄豬只性別和編號。于豬前腔靜脈竇采集血樣3.0 mL，置于含EDTA抗凝劑的離心管中，顛倒混勻，標記相應編號，4-8℃保存并及時送至廣西大學動物醫(yī)院進行血常規(guī)檢測分析。每周采血測定1次，連續(xù)7周。

1.2.2血常規(guī)測定 血常規(guī)指標采用法國優(yōu)德HS Compact數(shù)字化全自動血液分析儀進行測定，共獲得18項指標，主要分為紅細胞、白細胞和血小板三大類。其中，紅細胞類包括紅細胞計數(shù)（RBC，×10/L）、血紅蛋白（HGB，g/L）、紅細胞壓積（HCT，%）、平均紅細胞體積（MCV，fL）、平均紅細胞血紅蛋白（MCH，pg）、平均血紅蛋白濃度（MCHC，g/L）和紅細胞體積分布寬度（RDW，%）等7項指標；白細胞類包括白細胞計數(shù)（WBC，×10/L）、中性粒細胞計數(shù)（NEUT，×10/L）、中性粒細胞百分比（NEUT%）、淋巴細胞計數(shù)（LYMPH，×10/L）、淋巴細胞百分比（LYMPH%）、中值細胞計數(shù)（MID，×10/L）和中值細胞百分比（MID%）等7項指標；血小板類包括血小板計數(shù)（PLT，×10/L）、血小板壓積（PCT，mL/L）、平均血小板體積（MPV，fL）和血小板體積分布寬度（PDW，%）等4項指標。打印相應的檢測報告單，并標記好相應的編號。

1.3統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以Excel 2010進行統(tǒng)計處理，然后采用SPSS 17.0進行單因素方差分析和LDS法多重比較分析。

2結果與分析

2.1桂科育成豬不同日齡血常規(guī)指標分析結果

2.1.1紅細胞類指標檢測分析結果 由表1可知，在桂科育成豬不同日齡的紅細胞類指標中，RBC呈先降低后升高的變化趨勢，于70日齡達最低值（6.85×10/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的RBC（P<0.05，下同）；HGB也在70日齡達最低值（97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的HGB；MCH和MCHC的變化規(guī)律基本一致，均在70日齡達最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日齡達最高值（16.40 pg和314.30 g/L），二者間差異顯著；HCT、MCV和RDW的變化相對較穩(wěn)定，在不同日齡問均無顯著差異（P>0.05，下同）。

2.1.2白細胞類指標檢測分析結果 由表2可知，在桂科育成豬白細胞類指標中，WBC于63日齡達最低值（13.71×10/L）、84日齡達最高值（17.52×10/L），二者差異顯著；NEUT在70日齡時達最低值（3.61×10/L），顯著低于49、56和77日齡的時對應值。LYMPH的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。在MID方面，其數(shù)量在49日齡達最大值（6.48×10/L）、63日齡達最小值（3.05×10/L），二者差異顯著，但其百分比變化并不同步，于56日齡達最大值（40.54%）、77日齡達最小值（19.98%）。

2.1.3血小板類指標檢測分析結果 由表3可知，桂科育成豬PLT、PCT和PDW在不同日齡的變化趨勢相對較穩(wěn)定，即受日齡增長的影響不顯著；而MPV在91日齡達最大值（17.39fL），顯著高于70和77日齡的對應值（15.77和15.84fL）。

2.2桂科育成豬與長白豬、恩施黑豬的血常規(guī)指標比較分析結果

以桂科育成豬與35日齡長白豬（劉江偉等，2007）和5月齡以上恩施黑豬（向宇等，2015）的血常規(guī)指標進行比較分析，結果（表4）發(fā)現(xiàn)，除桂科育成豬的HCT和PDW明顯低于長白豬和恩施黑豬，MPV和PCT明顯高于長白豬和恩施黑豬外，其他血常規(guī)指標與長白豬和恩施黑豬相近或介于二者間的血常規(guī)指標范圍內。

3討論

血常規(guī)指標不僅能反映豬的免疫狀態(tài)和健康狀態(tài)，還是飼養(yǎng)管理與分類選育的重要參考依據(jù)（王懷中等，2014）。本研究于49日齡起每周對桂科育成豬采血1次，連續(xù)采樣7周，測定其血常規(guī)指標，結果表明，不同個體的血常規(guī)指標不同，同一個體不同日齡的血常規(guī)指標也存在差異，但大部分指標在相對穩(wěn)定的范圍內波動。桂科育成豬的RBC和HGB均在70日齡時達最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的對應值；WBC于63日齡達最低值（13.71×10/L），顯著低于49和84日齡時的對應值；MPV在91日齡達最大值（17.39 fL），顯著高于70和77日齡的對應值。這可能與桂科豬群在70-77日齡段進行豬瘟加強免疫有關，但具體原因有待進一步探究。

HCT是指一定量的抗凝全血經(jīng)離心沉淀后，其下沉紅細胞占全血的容積比，是一種間接反映紅細胞數(shù)量和體積的簡單方法（田鵬鵬等，2017）。合理的HCT可提高機體內外氣體的交換，增強新陳代謝，大多數(shù)疾病會消耗紅細胞，其具體表現(xiàn)為HCT降低。本研究對桂科育成豬與長白豬、恩施黑豬的血常規(guī)指標進行比較分析，結果顯示，桂科育成豬的HCT明顯低于長白豬和恩施黑豬，MCV低于長白豬和恩施黑豬，MCHC高于長白豬但低于恩施黑豬，RDW低于長白豬但高于恩施黑豬，RBC和PLT高于長白豬和恩施黑豬，提示桂科育成豬群呈輕微的缺鐵癥狀。此外，雖然桂科育成豬的MID較長白豬有所偏高，但由于WBC未呈明顯的升高趨勢，故不能確定其存在病毒或細菌感染。

本研究對桂科育成豬的血常規(guī)指標進行檢測，其結果可為桂科豬的免疫健康評估及抗病育種體系評價提供基礎數(shù)據(jù)。但下一步還需對桂科豬細胞因子IFN-y、IL-2、IL-4和TL-10等進行檢測，或對MXl基因第14外顯子和第8內含子的多態(tài)性進行分析，綜合免疫指標、抗體效價及分子遺傳標記，為桂科豬的商品化生產(chǎn)及疫病防控提供科學依據(jù)。

4結論

桂科育成豬在血常規(guī)指標方面有一定的獨特性，發(fā)育至49～91日齡時已具備較穩(wěn)定的免疫系統(tǒng)。