解春花　丑凱平　劉洋　金宏偉

[摘要]目的觀察毛果蕓香堿對(duì)動(dòng)物心律失常模型的作用。方法分別以烏頭堿和氯化鋇制造動(dòng)物心律失常模型，觀察毛果蕓香堿（0 2mg/kg）對(duì)心律失常的影響。結(jié)果毛果蕓香堿可明顯延遲烏頭堿引起的大鼠室性心律失常的出現(xiàn)（P<0.05）；延長(zhǎng)大鼠出現(xiàn)心律失常后的存活時(shí)間（P<0.05）；毛果蕓香堿可明顯延遲氯化鋇引起的大鼠雙向室性心律失常的出現(xiàn)（P<0.05）、縮短大鼠心律失常的持續(xù)時(shí)間（P<0.05）。4-DAMP可完全拮抗毛果蕓香堿誘導(dǎo)的心律失常。結(jié)論毛果蕓香堿通過(guò)激動(dòng)大鼠心肌M，受體而產(chǎn)生對(duì)抗烏頭堿和氯化鋇誘發(fā)大鼠心律失常的作用。

[關(guān)鍵詞]毛果蕓香堿；心肌M3受體；心律失常

[中圖分類(lèi)號(hào)]R96

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2017）03-38-04

目前，通過(guò)分子生物技術(shù)已經(jīng)克隆出哺乳動(dòng)物M受體的五個(gè)亞型，即M₁、M₂、M₃、M₄、M₅亞型，這些結(jié)構(gòu)上有顯著區(qū)別的亞型有獨(dú)特的分布、不同的藥理學(xué)特性和不同的生理功能。研究表明，心肌細(xì)胞存在M₃受體，毛果蕓香堿是心臟M，受體特異的激動(dòng)劑，可調(diào)節(jié)心臟細(xì)胞的電生理特性，產(chǎn)生負(fù)性肌力和負(fù)性頻率的作用。本研究選擇陽(yáng)性對(duì)照藥胺碘酮在動(dòng)物整體水平上觀察毛果蕓香堿對(duì)藥物誘發(fā)的動(dòng)物心律失常的影響，同時(shí)選用M，受體特異阻斷劑4-DAMP對(duì)心律失常作用的觀察，驗(yàn)證毛果蕓香堿產(chǎn)生抗心律失常作用的機(jī)理。

1.材料與方法

1.1動(dòng)物

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供Wistar大鼠，均經(jīng)心電圖篩選健康、體重200～250g，雌雄兼用，共64只。

1.2材料

戊巴比妥鈉，北京普博斯生物科技有限公司。烏頭堿，毛果蕓香堿，M₃受體特異阻斷劑4-二苯乙酰氧-N-甲基哌啶甲碘化物（4-DAMP）均出自美國(guó)sigma公司，氯化鋇，南京建成生物工程研究所。

1.3儀器

生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)BL-420E，成都泰盟軟件有限公司。恒流泵HL-2型，上海精科實(shí)業(yè)有限公司。

1.4動(dòng)物分組與處理

1.4.1毛果蕓香堿對(duì)烏頭堿誘發(fā)W1star大鼠心律失常的作用Wistar大鼠32只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、毛果蕓香堿組（G1組）、4-DAMP組（G2組）和胺碘酮組4組（G3組），每組8只，各組動(dòng)物均以1%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，記錄正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖，然后自舌下靜脈分別注射相應(yīng)的制劑。（1）烏頭堿模型對(duì)照組：經(jīng)舌下靜脈恒速注射烏頭堿0.09ug/min誘發(fā)心律失常。（2）毛果蕓香堿組：經(jīng)舌下靜脈一次注射毛果蕓香堿0.2mg/kg，15min后同徑路恒速注射烏頭堿0.09ug/rain。（3）4-DAMP組：經(jīng)舌下靜脈注射4-DAMP 0.12ug/kg，5 min后同徑路注射毛果蕓香堿0.2mg/kg，再過(guò)15min后同徑路恒速注射烏頭堿0.09ug，min。（4）胺碘酮組：經(jīng)舌下靜脈注射胺碘酮5mg，kg，30min后同徑路恒速注射烏頭堿0.09ug/min。

觀測(cè)各組心律失常的發(fā)生時(shí)間和嚴(yán)重程度，計(jì)算心律失常出現(xiàn)1h后的存活率。

1.4.2毛果蕓香堿對(duì)氯化鋇誘發(fā)Wistar大鼠心律失常的作用

Wistar大鼠32只，隨機(jī)分為氯化鋇模型對(duì)照組、毛果蕓香堿組（G1組）、4-DAMP組（G2組）和胺碘酮組4組（G3組），每組8只，方法同上，以氯化鋇4mg/kg代替烏頭堿一次性給藥，觀測(cè)心律失常的發(fā)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間及其嚴(yán)重程度。

1.5觀察指標(biāo)

以標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)圍心電圖（ECG）指標(biāo)，記錄四組大鼠心電圖的變化，觀察心率失常持續(xù)時(shí)間。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSSl3.0軟件對(duì)本研究記錄所得的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用x²檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1毛果蕓香堿對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的作用

烏頭堿：0.09ug/（min·kg；毛果蕓香堿：0.2mg/kg；4-DAMP：0.12ug/kg；胺碘酮：5mg/kg。烏頭堿模型對(duì)照組恒速注入烏頭堿后，平均（26.44.±5.00）min出現(xiàn)室性心律失常。預(yù)先靜脈注射毛果蕓香堿0.2mg/kg進(jìn)行干預(yù)，與模型對(duì)照組相比，心律失常出現(xiàn)的時(shí)間和心律失常出現(xiàn)1h后的存活率均顯著延長(zhǎng)（P<0.05）。在給予毛果蕓香堿0.2mg/kg進(jìn)行干預(yù)之前，若靜脈注射4-DAMP 0.12ug/kg預(yù)先阻斷心肌的M₃受體，則心律失常出現(xiàn)的時(shí)間和心律失常出現(xiàn)1h后的存活率與模型對(duì)照組相似，與毛果蕓香堿組相比，二者均顯著降低（P<0.05）。胺碘酮5mg/kg組，大鼠室性心律失常的出現(xiàn)時(shí)間、出現(xiàn)心律失常后的存活率，與模型對(duì)照組相比，時(shí)間均顯著延長(zhǎng)（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2毛果蕓香堿對(duì)氯化鋇誘發(fā)大鼠心律失常的作用

氯化鋇0.4mg/kg；毛果蕓香堿0.2mg/kg；4-DAMP0.12ug/kg；胺碘酮5mg/kg。Wistar大鼠氯化鋇模型對(duì)照組經(jīng)舌下靜脈注射氯化鋇的過(guò)程中或注入后立即出現(xiàn)典型的雙相室性心律失常，持續(xù)50min以上。與模型對(duì)照組相比，預(yù)先靜脈注射毛果蕓香堿0.2mg/kg進(jìn)行干預(yù)，則能延遲大鼠雙相室性心律失常的出現(xiàn)、縮短心律失常的持續(xù)時(shí)間（P<0.05）。靜脈注射4-DAMP0.12ug/kg預(yù)先阻斷心肌的M，受體，大鼠心律失常出現(xiàn)的時(shí)間縮短和持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，與模型對(duì)照組相似，即未能延遲心律失常的出現(xiàn)時(shí)間，亦未能縮短其持續(xù)時(shí)間；與毛果蕓香堿組相比，二者均具有顯著性差異（P<0.05）o胺碘酮5mg/kg，能明顯延遲大鼠室性心律失常的出現(xiàn)、縮短心律失常的持續(xù)時(shí)間（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3.討論

心律失常是一種臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，在世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)的生命健康。但是，近年來(lái)開(kāi)發(fā)成功應(yīng)用于臨床的抗心律失常藥物卻微乎其微。大鼠心肌細(xì)胞上有Na+、K+、Ca2+通道。豚鼠心肌細(xì)胞上的外向鉀通道主要是I_k而大鼠則是I_to。烏頭堿和氯化鋇誘發(fā)大鼠室性心律失常均是常用的心律失常模型，其具有操作簡(jiǎn)單、成功率高，重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)周期短，經(jīng)濟(jì)實(shí)用等特點(diǎn)。因此，烏頭堿和氯化鋇誘發(fā)的心律失常模型可用于研究藥物作用機(jī)制和篩選新藥。

相關(guān)研究表明烏頭堿是I_na激動(dòng)劑，激活心肌細(xì)胞內(nèi)的快Na+通道，是該試劑誘發(fā)心律失常的機(jī)制，其對(duì)I_na有促進(jìn)作用，對(duì)I_ca-l和I_ki亦有明顯的增加作用，促進(jìn)細(xì)胞膜發(fā)生去極化，對(duì)Ito呈現(xiàn)抑制作用，縮短心肌不應(yīng)期，導(dǎo)致心律失常。近年來(lái)，有報(bào)道對(duì)烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常模型陽(yáng)性對(duì)照藥以往選奎尼丁，但奎尼丁使被烏頭堿延長(zhǎng)的APD₉₀進(jìn)一步延長(zhǎng)。也有報(bào)道對(duì)烏頭堿等藥物誘發(fā)的嚴(yán)重心律失常，應(yīng)用胺碘酮治療，療效甚好，但對(duì)心肌細(xì)胞Na+，K+，Ca2+通道均有阻斷作用，所以胺碘酮也作為本實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥。

M₂受體長(zhǎng)期以來(lái)一直被認(rèn)為是心肌M受體的唯一功能性亞性，通過(guò)I_f和I_kacn。來(lái)調(diào)節(jié)心房起搏、房室傳導(dǎo)、直接（在心房）或間接（在心室）調(diào)節(jié)心肌收縮力，擔(dān)負(fù)著副交感神經(jīng)對(duì)心臟的調(diào)節(jié)功能。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，心臟中可能存在非M₂受體，尤其是M₁和M₃受體，出現(xiàn)了“異源M受體表達(dá)”的說(shuō)法。M₁和M₃受體同生理、病生和藥理息息相關(guān)。激活心臟M₃受體，可誘發(fā)出一種新的延遲整流K+電流（命名為I_km3，即M₃受體介導(dǎo)的K+電流）。I_km3，是一種延遲整流鉀電流，具有減慢心率、減弱心肌收縮和超極化膜電位的作用，對(duì)心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。當(dāng)這一新電流受抑時(shí)，可能引起心律失常。因而，M₃受體/I_km3在心律失常的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，可能起著重要的作用；可能是抗心律失常藥物作用的新靶點(diǎn)。

匹魯卡品（中文別名：毛果蕓香堿）是一種M受體激動(dòng)劑，主要用于治療青光眼、口干躁癥等疾病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，匹魯卡品可通過(guò)激活M₃受體來(lái)誘發(fā)I_km3產(chǎn)生負(fù)性肌力和負(fù)性頻率的作用。匹魯卡品不是M，受體的內(nèi)源性激動(dòng)劑，但可以把其作為有效的藥理探針來(lái)研究心肌的M₃受體和新的鉀離子電流。匹魯卡品的上述作用可被選擇性的M₃受體拮抗劑4-DAMP所逆轉(zhuǎn)，卻不能被M₁、M₂、M₄受體拈抗劑抑制。4-DAMP為M₃受體阻斷劑，在一定劑量可顯著抑制M₃受體激動(dòng)劑所產(chǎn)生的作用，但其本身在M₃受體未激動(dòng)時(shí)不產(chǎn)生心臟作用。本研究通過(guò)大鼠心電圖變化的分級(jí)評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，匹魯卡品可明顯推遲室性心律失常的發(fā)生、縮短室性心律失常的持續(xù)時(shí)間、降低室性心律失常的嚴(yán)重程度，并延長(zhǎng)動(dòng)物存活時(shí)間，然而4-DAMP可完全拮抗匹魯卡品誘導(dǎo)的心律失常。

盡管M受體亞型方面的研究已超過(guò)20年，但是，M₃受體還是一個(gè)嶄新的研究領(lǐng)域，眾多問(wèn)題均未被闡明。目前關(guān)于M₃受體與疾病之間的關(guān)系研究很少，關(guān)于M₃受體與心律失常的關(guān)系研究國(guó)內(nèi)外則更鮮有報(bào)道。要最終闡明相關(guān)的作用機(jī)制，還有賴(lài)于利用先進(jìn)的藥理工具對(duì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)一步的研究。