宋 倫， 吳 景， 宋永剛， 劉衛(wèi)東， 楊國軍

1．遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院， 遼寧省海洋生物資源與生態(tài)學(xué)重點實驗室， 遼寧 大連 116023 2．大連海洋大學(xué)， 遼寧 大連 116023

褐潮致災(zāi)種抑食金球藻在遼東灣的分布

宋 倫1， 吳 景1， 宋永剛1， 劉衛(wèi)東1， 楊國軍2

1．遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院， 遼寧省海洋生物資源與生態(tài)學(xué)重點實驗室， 遼寧 大連 116023 2．大連海洋大學(xué)， 遼寧 大連 116023

抑食金球藻可產(chǎn)生一種抑制雙殼類動物攝食的胞外多糖，導(dǎo)致貝類大量死亡．由于抑食金球藻個體微小、形態(tài)學(xué)鑒定困難，故在遼東灣海域鮮見其分布報道，而高通量測序技術(shù)的發(fā)展極大地推動了微型微微型浮游植物的鑒定研究．以18S rDNA V4區(qū)作為目標(biāo)基因，結(jié)合高通量測序技術(shù)，設(shè)計了微型微微型浮游植物鑒定引物V4(FR)，并對遼東灣2014年四季海水中微型和微微型浮游植物多樣性進行了檢測．結(jié)果表明，遼東灣抑食金球藻春季密度(7．743×103L-1)最高，夏季(2．094×103L-1)、秋季(0．392×103L-1)、冬季(0．053×103L-1)密度逐漸下降，水溫是影響該藻暴發(fā)的主要因素，也驗證了渤海褐潮多暴發(fā)在春季的原因．抑食金球藻密度高值區(qū)主要分布在與河北秦皇島交界的綏中海域，該地區(qū)與實際暴發(fā)褐潮海域相鄰，驗證了檢測結(jié)果的可靠性．春季抑食金球藻在西南海域優(yōu)勢度(平均40%)最高，其密度最高達78．128×103L-1，雖未達到警戒標(biāo)準(zhǔn)，但分布擴散較廣，致災(zāi)風(fēng)險較高，應(yīng)引起足夠的重視．

抑食金球藻； 褐潮； 微微型浮游植物； 高通量測序； 遼東灣

褐潮作為我國新型海洋生態(tài)災(zāi)害，2009年起開始入侵渤海，我國也是繼美國和南非之后，第三個暴發(fā)褐潮的國家，其中河北秦皇島海域貝類養(yǎng)殖受災(zāi)最為嚴(yán)重[1- 2]．渤海褐潮致災(zāi)種主要為抑食金球藻(Aureococcusanophagefferens)，屬棕鞭藻門(原歸類金藻門)、海金藻綱，球形或橢球形、金褐色、無細胞壁、單個葉綠體、細胞無鞭毛、不能運動且生命周期簡單[3]．由于其個體微小(2～3 μm)，依據(jù)形態(tài)學(xué)等常規(guī)鑒定較為困難．隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，微型藻類的分子檢測手段也在不斷進步和完善[4- 9]，相關(guān)的基因文庫也在逐步更新和擴充．近幾年高通量測序技術(shù)的發(fā)展極大地推動了微型藻類的高效檢測研究[10- 11]，該技術(shù)具有簡單快速、測序通量高、錯誤率低和成本低等特點，為微型藻類的高效檢測提供了新思路[12]．核糖體小亞基基因18S rDNA存在于所有真核生物中，是同時具有信息和功能兩種作用的核糖體編碼基因[13]，其數(shù)據(jù)庫豐富、基因序列種類廣泛，對引物設(shè)計、構(gòu)建物種親緣關(guān)系等方面都具有不可替代的優(yōu)勢．18S rDNA由保守區(qū)和可變區(qū)交替排列組成，具有9個可變區(qū)[14]，可作為種屬鑒定的分子標(biāo)記．V4區(qū)和V9區(qū)是目前廣泛應(yīng)用于真核生物多樣性研究的目標(biāo)基因[8，15- 16]．

抑食金球藻褐潮1985年首次發(fā)生在美國東北部的納拉干塞特灣、大南灣、長島灣以及巴尼加特灣，此后一直到1995年，幾乎每年長島灣都有褐潮發(fā)生，2000年后，褐潮沿著美國東海岸向南擴張到新澤西州、特拉華州、馬里蘭州以及弗吉尼亞州的海灣．除此之外，1997年南非的薩爾達尼亞灣也開始暴發(fā)了褐潮，文獻記錄持續(xù)到2005年[17]．我國在2009年渤海暴發(fā)褐潮之前鮮有該種的報道[18]，該種褐潮一直持續(xù)到2015年，最大面積達3 400 km2，分布于遼東灣西南側(cè)的河北和遼寧交界海域，褐潮期間養(yǎng)殖貝類滯長、部分死亡，生態(tài)系統(tǒng)遭到破壞，旅游業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟損失巨大[12]．遼東灣為我國最北端半封閉內(nèi)海，航運較為頻繁，加之富營養(yǎng)化嚴(yán)重，發(fā)生外來有害微藻入侵的風(fēng)險較高，危害較大，目前該海域已發(fā)現(xiàn)外來有害微藻抑食金球藻的擴散跡象，因此亟需了解其生態(tài)分布狀況．鑒于此該研究采用高通量測序平臺，結(jié)合生物信息學(xué)方法，以18S rDNA的V4區(qū)為目標(biāo)基因?qū)|東灣海域的微型和微微型浮游植物進行多樣性檢測，以期為外來海洋微藻研究提供參考．

1 材料與方法

1．1 樣品采集

為了解褐潮致災(zāi)種抑食金球藻的分布及擴散情況，在遼東灣海域網(wǎng)格化設(shè)置16個站位(見圖1)，分別于2014年5月(春季)、8月(夏季)、10月(秋季)、12月(冬季)采集表層海水1 L，首先經(jīng)20 μm微孔濾膜過濾去除小型及大型浮游生物，然后經(jīng)0．22 μm微孔濾膜收集微型和微微型浮游生物，最后將濾膜轉(zhuǎn)移至1．5 mL無菌離心管中，置于-20 ℃或-80 ℃冷凍保存、運輸．

圖1 采樣站位分布Fig．1 Sampling station locations

1．2 分析方法

1．2．1 基因組 DNA 的提取

1．2．2 18S rDNA可變區(qū)V4的PCR擴增

1．2．3 引物篩選優(yōu)化

于NCBI數(shù)據(jù)庫中調(diào)取相關(guān)序列，其中包括微微型真核藻類45種、我國近岸赤潮生物71種及常見真核藻類73種，涵蓋8個門、18個綱、179條序列．利用MEGA 4軟件對序列進行多重序列比對，找到對應(yīng)的V4區(qū)，同時結(jié)合Hiseq 2500 PE250測序技術(shù)要求進行引物設(shè)計，片段長度為300～450 bp，為增加測序結(jié)果的準(zhǔn)確性，充分利用測序技術(shù)，以V4區(qū)為核心區(qū)及兩側(cè)的保守區(qū)設(shè)計引物，獲得兩對引物V4(FR)，使用FPCR軟件檢測引物的熔解溫度、GC含量，以及是否會產(chǎn)生二聚體，利用Oligo Calc軟件檢測引物自身的互補性，包括潛在的發(fā)夾結(jié)構(gòu)、3′端的互補性、自身退火位點個數(shù)等基本參數(shù)．根據(jù)核糖體基因數(shù)據(jù)庫采用在線軟件Taxman，以多來源的rDNA為模板，通過多序列全局比對，對引物擴增的生物類群和未擴增的生物類群物種數(shù)量進行預(yù)測統(tǒng)計、比較，進而對3對引物的敏感性、特異性進行評估[19]．

1．2．4 數(shù)據(jù)分析

測序得到的原始數(shù)據(jù)使用FLASH軟件進行拼接，參照Qiime軟件質(zhì)量控制流程將拼接后的序列經(jīng)過截取、過濾得到有效數(shù)據(jù)．利用Uparse軟件對有效數(shù)據(jù)進行OTUs(Operational Taxonomic Units)聚類和物種分類，采用RDP Classifier方法與Silva數(shù)據(jù)庫對OTUs代表序列進行物種注釋，同時對物種注釋在各個分類水平上進行群落結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計分析．鏡檢同期水樣中出現(xiàn)的所有浮游植物，篩選各站位出現(xiàn)頻度最高的角毛藻(Chaetocerossp．)作為基準(zhǔn)種類[20]，通過OTUs比例計算抑食金球藻密度，相關(guān)公式：

式中：NS為某站位抑食金球藻密度，L-1；NC為同一站位水樣中所有角毛藻密度，由鏡檢獲得，L-1；COTU為某站位水樣中所有角毛藻的OTUs數(shù)；SOTU為某站位抑食金球藻的OTUs數(shù)．

采用相對多度(RA)計算抑食金球藻密度在各季節(jié)的比例：

RA=niN

式中：ni為抑食金球藻在i站的密度，L-1；N為統(tǒng)計單元的總密度，L-1．

物種優(yōu)勢度(Y)表示微型微微型浮游植物群落中某一物種所占的優(yōu)勢程度：

式中，nx為第x種微型微微型浮游植物種類的OTUs數(shù)，N為OTUs總數(shù)，fx為第x種微型微微型浮游植物種類在各樣品中出現(xiàn)的頻率．

2 結(jié)果與討論

2．1 分子鑒定引物優(yōu)化

采用在線軟件Taxman對3對引物的敏感性、特異性進行評估，統(tǒng)計數(shù)據(jù)(見表1)顯示，引物V9(FR)的整體擴增效率低于引物V4(FR)和C4(FR)，引物V4(FR)對真菌、后生動物、領(lǐng)鞭毛蟲目類群的擴增特異性低于C4(FR)，對定鞭藻綱、綠藻門等生物類群的擴增特異性高于C4(FR)，說明V4(FR)在擴增真核藻類類群中較有優(yōu)勢．

為了比較3對引物在實際樣品中對真核藻類擴增特異性的差異，對2014年5—8月采集的8、11、12號站位環(huán)境樣品分別進行引物擴增，采用Illumina Hiseq 2500測序平臺PE250測序，解析出在種的水平下每對引物對應(yīng)的平均微型微微型浮游植物OTUs數(shù)．結(jié)果顯示，3對引物在8、11、12號站位鑒定的微型微微型浮游植物OTUs數(shù)按序分別為：V4(68、73、92)、V9(37、46、44)、C4(33、59、81)，平均為78、42、58，引物V4(FR)鑒定出的浮游植物數(shù)量多于V9(FR)和C4(FR)．通過3對引物對優(yōu)勢種Dolichomastixtenuilepis、細小微胞藻(Micromonaspusilla)、金牛微球藻(Ostreococcustauri)、密球藻(Pycnococcusprovasolii)、抑食金球藻(Aureococcusanophagefferens)、赤潮異彎藻(Heterosigmaakashiwo)等微型和微微型浮游植物的鑒定能力比較，顯示引物V4(FR)與C4(FR)相近，二者的鑒定效率強于V9(FR)．綜上，引物V4(FR)在微型微微型浮游植物種類數(shù)鑒定方面優(yōu)于其他兩對引物，故采用引物V4(FR)研究遼東灣海域微型微微型浮游植物的群落多樣性．

表1 引物對擴增SILVA數(shù)據(jù)庫中真核生物類群的特異性統(tǒng)計

注：引物對主要擴增真核類群的頻數(shù)分布，括號內(nèi)的數(shù)字表示擴增該類群的序列數(shù)，括號外的數(shù)字表示擴增序列數(shù)占該類群序列數(shù)的比例．

2．2 抑食金球藻的種屬確定

高通量測序獲得抑食金球藻部分18S rDNA序列的片段長度為380 bp，通過NCBI Blast比對，其在抑食金球藻18S rDNA(KT585674．1)基因序列中對應(yīng)的位置為563～942 bp，與基因庫中抑食金球藻的部分18S rDNA序列相似度為100%，擬合度期望值(E-value)為0．采用鄰接法選擇棕鞭藻門中部分藻類的18S rDNA序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹(見圖2)．建樹結(jié)果顯示，高通量測序獲得的遼東灣抑食金球藻18S rDNA V4區(qū)序列與基因庫中抑食金球藻(KT585674．1)聚在一個分支，其支持率為100%，確定該種為抑食金球藻(Aureococcusanophagefferens)．

注： 節(jié)點上的數(shù)值表示鄰接法的可靠性.圖2 抑食金球藻系統(tǒng)進化樹Fig．2 Aureococcus anophagefferens phylogenetic tree

2．3 藻密度平面分布

遼東灣春季檢出抑食金球藻密度最高，分布在0．001×103～78．128×103L-1之間，平均值為7．743×103L-1，最高值出現(xiàn)在10號站位，最低值出現(xiàn)在4號站位，高值區(qū)主要分布在遼東灣的西南、中部、東南海域(3、5、6、8、10、11、13、14、15、16號站位密度均超過103L-1，其中10、11、16號站位密度均超過104L-1)，遼東灣西北部海域密度相對較??；夏季密度分布在0．000 2×103～15．609×103L-1之間，平均值為2．094×103L-1，最高值出現(xiàn)在16號站位，最低值出現(xiàn)在9號站位，高值區(qū)主要分布在遼東灣的東南、西南兩側(cè)海域(10、16號站位密度均超過104L-1)，遼東灣北部海域密度相對較??；秋季密度分布在0．001×103～2．293×103L-1之間，平均值為0．392×103L-1，最高值出現(xiàn)在9號站位，最低值出現(xiàn)在1號站位，高值區(qū)主要分布在遼東灣的西南、中東兩側(cè)海域(9、10號站位密度均超過2×103L-1)，其他區(qū)域密度相對較小；冬季密度分布在0．000 1×103～0．345×103L-1之間，平均值為0．053×103L-1，最高值出現(xiàn)在4號站位，最低值出現(xiàn)在6號站位，高值區(qū)主要分布在遼東灣的中南部海域，冬季密度相對較小，各站位差異不大，分布較為均勻．各站位抑食金球藻密度占比的季節(jié)分布見圖3．

2．4 相對密度季節(jié)變化

統(tǒng)計各站位抑食金球藻季節(jié)相對密度(見圖4)發(fā)現(xiàn)，春季占比最高(平均61．4%)，夏季次之(平均19．3%)，依次為秋季(平均13．1%)，冬季最少(平均6．2%)．說明春季為抑食金球藻主要繁殖季節(jié)，水溫為主要控制因素．

注： 圖中等值線表示抑食金球藻密度占比， %．圖3 抑食金球藻密度占比的季節(jié)分布Fig．3 The horizontal distribution of Aureococcus anophagefferens density ratio in different seasons

圖4 抑食金球藻季節(jié)相對密度分布Fig．4 Relative density of Aureococcus anophagefferens in different seasons

2．5 優(yōu)勢度

春季抑食金球藻優(yōu)勢度在0．004%～62．70%之間，平均值為7．92%，主要在遼東灣西南部占優(yōu)勢，各站位間極差較大，優(yōu)勢度最高值出現(xiàn)在11號站位，其次為10號站位(33．20%)、14號站位(25．20%)，上述3個站位抑食金球藻優(yōu)勢度非常明顯，除4號站位外，其余站位優(yōu)勢度均超過0．2%，其中5、9、10、11、14號站位優(yōu)勢度均超過1%；夏季抑食金球藻優(yōu)勢度在0．003%～0．96%之間，平均值為0．26%，主要在遼東灣中南部占優(yōu)勢，各站位優(yōu)勢度不明顯，優(yōu)勢度最高值出現(xiàn)在14號站位，最低為4號站位，其中10、11、12、14、15、16號站位優(yōu)勢度均超過0．2%，所有站位優(yōu)勢度均未超過1%；秋季抑食金球藻優(yōu)勢度在0．002%～1．98%之間，平均值為0．55%，主要在遼東灣中西、中東、東南部海域占優(yōu)勢，各站位優(yōu)勢度不明顯，優(yōu)勢度最高值出現(xiàn)在9號站位，最低為4號站位，其中7、9、10、11、12、14、15、16號站位優(yōu)勢度均超過0．2%，7、9、12、15號站位優(yōu)勢度均超過1%；冬季抑食金球藻優(yōu)勢度在0．008%～1．05%之間，平均值為0．28%，主要在遼東灣中東、中南部占優(yōu)勢，各站位間極差較大，優(yōu)勢度最高值出現(xiàn)在11號站位，最低為1號站位，其中8、9、11、12、14、15號站位優(yōu)勢度均超過0．2%，僅11號站位優(yōu)勢度超過1%(見圖5、6)．

圖5 抑食金球藻優(yōu)勢度季節(jié)分布Fig．5 Aureococcus anophagefferens dominance in different seasons

2.6 討論

在選定18S rDNA為鑒定真核藻類目標(biāo)基因后，為了驗證V4區(qū)和V9區(qū)對海水環(huán)境樣本中微量真核藻類的高效檢測能力，自行設(shè)計了引物V4(FR)，并選擇引物C4(FR)和V9(FR)作為分析比較對象．3對引物的敏感性、特異性評估結(jié)果顯示，V4(FR)對真核藻類的擴增特異性優(yōu)于C4(FR)，尤其對甲藻、硅藻、綠藻、隱藻、定鞭藻等類群的擴增效率更為高效．18S rDNA的V4區(qū)變異較大、長度較長、均一性好，適用于高通量測序技術(shù)，是真核藻類鑒定的良好目標(biāo)基因．隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，測序通量不斷增大，測序片段長度也可逐漸增長，物種注釋的準(zhǔn)確度也會逐漸提升．18S rDNA V4區(qū)片段長度高于V9區(qū)，并且其測序結(jié)果更接近18S rDNA的全長序列[21]，因此利用18S rDNA V4區(qū)作為目標(biāo)基因，通過宏基因組的高通量測序技術(shù)來鑒定真核藻類更為準(zhǔn)確和高效．引物篩選結(jié)果顯示，該研究自行設(shè)計的引物—V4(FR)在微型微微型浮游植物群落鑒定方面更為高效．

注： 圖中等值線表示抑食金球藻優(yōu)勢度， %．圖6 抑食金球藻優(yōu)勢度季節(jié)平面分布Fig．6 Aureococcus anophagefferens dominance horizontal distribution in different seasons

關(guān)于抑食金球藻的研究國外開展較早，國內(nèi)自從褐潮暴發(fā)后才逐漸受到關(guān)注，目前已對其生理生化特征、暴發(fā)與消亡原因、生態(tài)危害及預(yù)防措施等方面開展了大量研究[12，17]．抑食金球藻可產(chǎn)生一種抑制雙殼類動物攝食的胞外多糖，通過刺激貝類鰓部肌肉收縮、干涉橫溝和腹溝的纖毛運動來阻止其攝食．研究[22- 23]證實，抑食金球藻可使硬殼蛤(Mercenariamercenaria)、海灣扇貝(Argopectenirradias)、紫貽貝(Mytilusedulis)、文蛤(Meretrixmeretrix)、牡蠣(ConchaOstreae)等纖毛活動受到抑制，進而停止攝食、減緩生長、影響繁殖，最終大量死亡．

抑食金球藻環(huán)境適應(yīng)能力較強，可在較廣的水溫范圍內(nèi)(0～25 ℃)發(fā)生褐潮，最適生長溫度為20 ℃左右，渤海褐潮主要發(fā)生在溫度達到15～20 ℃的5—6月，超過25 ℃的7—8月開始衰退，然而溫度降至20 ℃的秋季也有可能發(fā)生褐潮，并持續(xù)到寒冷的冬季(0 ℃)[24]．抑食金球藻適鹽范圍(10～90)也非常寬泛，在25 ℃下最適生長鹽度為20～70，因此遼東灣任何海域都有可能暴發(fā)褐潮．抑食金球藻能夠適應(yīng)低光照環(huán)境，可能其較小的葉綠體基因組完成光合作用更為高效．抑食金球藻不僅可利用無機營養(yǎng)鹽，還可有效地利用有機營養(yǎng)物質(zhì)，因其含有更多與有機碳、有機氮化合物運輸?shù)南嚓P(guān)基因，這也解釋了大粒徑赤潮生物衰敗分解后隨即暴發(fā)褐潮的原因[25]．

通過對遼東灣四季抑食金球藻的檢測發(fā)現(xiàn)，春季密度最高，夏、秋、冬季密度逐漸下降，說明溫度是影響該藻繁殖的主要因素，也驗證了渤海褐潮多暴發(fā)在春季的原因．抑食金球藻密度高值區(qū)主要分布在與河北秦皇島交界的綏中海域，與實際暴發(fā)褐潮海域相鄰，驗證了檢測結(jié)果的可靠性．春季抑食金球藻在西南海域優(yōu)勢度非常高(平均40%)，其密度最高達78．128×103L-1，雖未達到警戒標(biāo)準(zhǔn)，但分布擴散較廣，致災(zāi)風(fēng)險較高，應(yīng)引起足夠重視．

抑食金球藻在我國海域近幾年才被報道，應(yīng)列為外來有害微藻進行監(jiān)控管理．從目前遼東灣海域的抑食金球藻密度分布來看，該種已成為歸化種，2013年7月在長興島近岸海域曾發(fā)生小范圍抑食金球藻褐潮，密度超過107L-1[26]．因此應(yīng)盡快開展該藻的風(fēng)險監(jiān)測，研究防控措施；跟蹤監(jiān)測各港口海域有毒微型微微型藻類的種群和分布；加強對養(yǎng)殖區(qū)產(chǎn)毒微藻的監(jiān)測和管理，建立貝毒快速預(yù)警技術(shù)，減少對漁業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的危害[27- 30]．

3 結(jié)論

a) 遼東灣抑食金球藻春季密度最高，平均值為7．743×103L-1，高值區(qū)主要分布在遼東灣的西南、中部、東南海域；夏季密度平均值為2．094×103L-1，高值區(qū)主要分布在遼東灣的東南、西南兩側(cè)海域；秋季密度平均值為0．392×103L-1，高值區(qū)主要分布在遼東灣的西南、中東兩側(cè)海域；冬季密度平均值為0．053×103L-1，高值區(qū)主要分布在遼東灣的中南部海域．

b) 抑食金球藻相對密度春季最高(平均61．4%)，夏季次之(平均19．3%)，依次為秋季(平均13．1%)，冬季最少(平均6．2%)．說明春季為抑食金球藻主要繁殖季節(jié)，水溫為主要控制因素．

c) 抑食金球藻春季優(yōu)勢度平均值為7．92%，主要在遼東灣西南部占優(yōu)勢；夏季優(yōu)勢度平均值為0．26%，主要在遼東灣中南部占優(yōu)勢；秋季優(yōu)勢度平均值為0．55%，主要在遼東灣中西、中東、東南部海域占優(yōu)勢；冬季優(yōu)勢度平均值為0．28%，主要在遼東灣中東、中南部占優(yōu)勢．

d) 抑食金球藻雖然在我國海域近幾年才被發(fā)現(xiàn)，但其環(huán)境適應(yīng)能力較強，已在遼東灣海域廣泛分布，隨時都有大面積暴發(fā)的可能，因此應(yīng)加強有效監(jiān)控，研究應(yīng)急處置措施，減少漁業(yè)及生態(tài)損害．

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Distribution of Brown Tide SpeciesAureococcusanophagefferensin Liaodong Bay

SONG Lun1， WU Jing1， SONG Yonggang1， LIU Weidong1， YANG Guojun2

1．Key Laboratory of Marine Biological Resources and Ecology， Liaoning Province， Liaoning Ocean and Fisheries Science Research Institute， Dalian 116023， China 2．Dalian Ocean University， Dalian 116023， China

Aureococcusanophagefferens(Ochrophyta，Pelagophyceae)inhibits bivalve feeding by producing a type of extracellular polysaccharide，and results in high shellfish mortality．Morphological identification ofA．a(chǎn)nophagefferensis difficult because of its small size，which has delayed research progress．In recent years，the development of high-throughput sequencing technologies has promoted research on nanophytoplankton and picophytoplankton．To identifyA．a(chǎn)nophagefferensand determine its distribution in Liaodong Bay，we used the 18S rDNA V4 region as the target gene to design the primer V4(FR)，and employed high-throughput sequencing technique to study nanophytoplankton and picophytoplankton diversity in Liaodong Bay．The results revealed thatA．a(chǎn)nophagefferensdensity was highest in the spring(7．743 × 103L-1)．Temperature was a significant factor inA．a(chǎn)nophagefferensreproduction．A．a(chǎn)nophagefferensdensity was high in Suizhong waters；this area is adjacent to Hebei Qinhuangdao，where the phytoplankton has caused brown tide outbreaks．The previous outbreak history supports our current results．A．a(chǎn)nophagefferenscommunity dominance was high in the southwest，averaging 40%，and its density was as great as 78．128 × 103L-1．In recent years，A．a(chǎn)nophagefferenswas found in the China Sea，where it has caused severe ecological impacts．According to our results，A．a(chǎn)nophagefferenscould be classified as a newly naturalized species based on its distribution in Liaodong Bay．The phytoplankton was responsible for a small-scale brown tide(>1．0 × 107L-1)in Changxingdao in July 2013．We recommend that measures be taken to preventA．a(chǎn)nophagefferensbrown tides rather than acting after the fact．First，we should monitor the types and distribution of toxic nanopicophytoplankton in port waters to supplement the invasive algae database．Second，we should enhance toxic microalgae monitoring and management in aquiculture areas．Finally，a brown tide early warning system should be established to avoid disasters in the fishery ecosystem．

Aureococcusanophagefferens； brown tide； picophytoplankton； high-throughput sequencing； Liaodong Bay

2016- 08- 19

2016- 12- 27

中國海洋發(fā)展研究會重大項目(CAMAZDA201605)；遼寧省自然科學(xué)基金資助項目(2014020182)；遼寧省海洋與漁業(yè)科研項目(201611)

宋倫(1980-)，男，遼寧大連人，副研究員，主要從事海洋生物生態(tài)學(xué)研究，songlun@lnshky．com．

X171．1； Q89； P735

1001- 6929(2017)04- 0537- 08

A

10．13198j．issn．1001- 6929．2017．01．87

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