周 茜，楊 林，張文靜，肖 娜

薯蕷皂苷元對(duì)少弱精子癥小鼠精子質(zhì)量和生殖系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷的影響

周 茜，楊 林，張文靜，肖 娜?

（湖北文理學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，湖北 襄陽(yáng) 441053）

目的：研究薯蕷皂苷元對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的少弱精子癥模型小鼠精液質(zhì)量及生殖系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷的影響．方法：50只小鼠隨機(jī)分為5組：正常組，模型對(duì)照組，薯蕷低劑量組，薯蕷中劑量組，薯蕷高劑量組，每組10只．除正常組外的各組小鼠以環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)少弱精子癥模型，觀察薯蕷皂苷元對(duì)模型小鼠精子質(zhì)量，臟器系數(shù)以及睪丸組織中SOD、MDA、T－AOC、ROS含量的影響．結(jié)果：與模型對(duì)照組比較，薯蕷中、高劑量組小鼠的睪丸、附睪臟器系數(shù)顯著提高（P＜0．05）；同時(shí)薯蕷三個(gè)劑量組小鼠的精子質(zhì)量和睪丸中SOD活力及T－AOC含量均提高，MDA、ROS含量均降低（P＜0．05）．結(jié)論：薯蕷皂苷元能改善少弱精子癥模型小鼠的精子質(zhì)量，提高臟器系數(shù)，減輕睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷．

薯蕷皂苷元；小鼠；少弱精子癥；生殖系統(tǒng)；氧化應(yīng)激

少弱精子癥是造成男性不育的最常見(jiàn)原因，且發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，但目前仍缺乏有效的治療手段［1－2］，而中藥具有毒副作用小的優(yōu)勢(shì)，且獲得了較為滿意的療效．本研究選擇的是山藥提取物薯蕷皂苷元．由于山藥有平補(bǔ)脾腎之功效，從中提取的薯蕷皂苷元與體內(nèi)甾體激素分子結(jié)構(gòu)相似，被人體吸收后，可促進(jìn)性激素、皮質(zhì)激素等甾體類激素的生物合成［3］．本實(shí)驗(yàn)采用環(huán)磷酰胺制備少弱精子癥小鼠模型，并觀察薯蕷皂苷元對(duì)模型小鼠的精子質(zhì)量、臟器系數(shù)及睪丸組織氧化應(yīng)激損傷的影響．

1 儀器與材料

1．1 儀器

倒置顯微鏡（BDS200）：重慶奧特；電子天平（BSA124S）：賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（756PC）：上海舜宇恒平．

1．2 藥品

薯蕷皂苷元（TYG160905）：西安天一生物技術(shù)有限公司；注射用環(huán)磷酰胺：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T－AOC）、活性氧（ROS）測(cè)定試劑盒均購(gòu)買于南京建成生物工程研究所．

1．3 動(dòng)物

選健康SPF級(jí)7周齡雄性昆明種小鼠50只，體質(zhì)量18～22g，由湖北省疾控中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行政許可證號(hào)：SYXK（鄂）2012－0068．實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境3d．

2 方法

2．1 動(dòng)物分組及造模

將50只雄小鼠按體重隨機(jī)分為正常組，模型對(duì)照組，薯蕷低劑量組，薯蕷中劑量組，薯蕷高劑量組．除正常組（注射等量生理鹽水）外，各組小鼠均每日腹腔注射環(huán)磷酰胺60mg／kg，連續(xù)注射5d［4］，制備少弱精子癥小鼠模型．于第6天，分別給予薯蕷三個(gè)劑量組小鼠灌胃薯蕷皂苷元（500mg／kg，1000mg／kg，2000mg／kg）連續(xù)14d，同時(shí)正常組和模型對(duì)照組給予等量的生理鹽水．

2．2 臟器系數(shù)

末次給藥2h后，稱取小鼠體重，脫頸法處死小鼠后，取出附睪及睪丸，并精確稱重，計(jì)算臟器系數(shù)．臟器系數(shù)（mg／10g）＝小鼠臟器質(zhì)量（mg）／小鼠末次體重（10g）

2．3 精液質(zhì)量檢測(cè)

將附睪置于2ml生理鹽水（37°C預(yù)熱）中，將附睪組織剪碎，充分搖勻，使精子全部游出附睪．置于恒溫箱中孵育10min，用200目濾網(wǎng)將其過(guò)濾，進(jìn)行精子計(jì)數(shù)及活力測(cè)定．

2．4 睪丸SOD，MDA，ROS，T－AOC檢測(cè)

將睪丸組織用PBS緩沖液清洗后勻漿，后對(duì)勻漿液進(jìn)行離心3000rpm，15min，取上清，用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行SOD，MDA，ROS，T－AOC檢測(cè)．

2．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)結(jié)果以x ±s表示，用SPSS18．0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間比較采用單因素方差分析（One－way ANOVA）檢驗(yàn)．以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

3 結(jié)果

3．1 臟器系數(shù)

由表1可見(jiàn)，與正常組比較，模型對(duì)照組小鼠睪丸和附睪臟器系數(shù)均下降明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）．與模型對(duì)照組比較，薯蕷中劑量組和高劑量組的附睪、睪丸臟器系數(shù)均上升顯著（P＜0．05）．

表1 薯蕷皂苷元對(duì)臟器系數(shù)的影響（mg／10g，n＝10x ±s）

3．2 精液質(zhì)量檢測(cè)

結(jié)果顯示，與正常組比較，模型對(duì)照組小鼠的精子密度降低且精子數(shù)目減少（P＜0．01）．與模型對(duì)照組比較，薯蕷低、中、高三個(gè)劑量組的精子密度、A級(jí)精子數(shù)目及A＋B級(jí)精子數(shù)目均上升明顯（P＜0．05）．

表2 薯蕷皂苷元對(duì)精液質(zhì)量的影響（n＝10x ±s）

3．3 睪丸中SOD、MDA、T－AOC、ROS含量

與正常組比較，模型對(duì)照組的SOD活力和T－AOC含量明顯降低（P＜0．01），MDA及ROS含量顯著升高（P＜0．01）．與模型對(duì)照組比較，薯蕷三個(gè)劑量組睪丸組織中的SOD活力及T－AOC含量明顯恢復(fù)上升（P＜0．05），MDA、ROS含量明顯下降（P＜0．05）．

表3 薯蕷皂苷元對(duì)睪丸中SOD，MDA，ROS，T－AOC的影響（n＝10x±s）

4 討論

受生活方式及環(huán)境污染等因素的影響，人類的生育能力呈明顯下降趨勢(shì)［5］，而少弱精子癥是導(dǎo)致男性不育的最重要的因素．有文獻(xiàn)報(bào)道，薯蕷皂苷元能改善輕度雄性衰老性生殖障礙，提高精子活性［6－7］．薯蕷皂苷元主要由薯蕷科植物提取獲得，是目前合成各種甾體激素類藥物的重要原料．中醫(yī)認(rèn)為薯蕷科植物具有“活血舒筋，消食利水，祛痰截瘧”的功效．董海軍實(shí)驗(yàn)表明，薯蕷皂苷元具有類雌激素樣作用，并能促進(jìn)睪丸支持細(xì)胞增殖［8］．但目前薯蕷皂苷元在生殖方面的作用研究仍然甚少．本研究選用薯蕷皂苷元對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的少弱精子癥模型小鼠進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，探討其對(duì)小鼠精液質(zhì)量及生殖系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷的影響．

為了明確薯蕷皂苷元對(duì)少弱精子癥的治療價(jià)值，我們以環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的昆明種小鼠為研究對(duì)象，建立少弱精子癥動(dòng)物模型．現(xiàn)已知環(huán)磷酰胺是一種細(xì)胞毒烷化劑藥物，它可以導(dǎo)致血清中睪酮水平降低、精子參數(shù)劣化、誘導(dǎo)氧化應(yīng)激等一系列病理變化［9］．試驗(yàn)中我們首先通過(guò)腹腔注射環(huán)磷酰胺的方式建立少弱精子癥動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)精子質(zhì)量的分析可知：模型對(duì)照組小鼠附睪中的精子密度、A級(jí)精子數(shù)目及A＋B級(jí)精子數(shù)目均低于對(duì)照組（P＜0．01）．這說(shuō)明環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的少弱精子癥小鼠造模成功．進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)可知，薯蕷皂苷元干預(yù)后，薯蕷三個(gè)劑量組小鼠的精子密度、A級(jí)精子數(shù)目及A＋B級(jí)精子數(shù)目均高于模型對(duì)照組（P＜0．05）．由此證實(shí)薯蕷皂苷元對(duì)少弱精子癥的精子損傷具有保護(hù)作用．

性腺及性器官的發(fā)育維持著雄性第二性征，也是性功能正常的表現(xiàn)．睪丸、附睪是重要的性器官，如果其萎縮或重量減輕，那么它們所分泌的激素則相應(yīng)減少，從而可導(dǎo)致性功能的異常［10］．本研究表明，與正常組比較，用環(huán)磷酰胺造模的小鼠睪丸、附睪的臟器系數(shù)下降明顯（P＜0．01）；與模型對(duì)照組比較，薯蕷中、高劑量組的附睪、睪丸臟器系數(shù)上升顯著（P＜0．05），說(shuō)明薯蕷皂苷元對(duì)模型小鼠生殖系統(tǒng)的臟器組織有一定的保護(hù)作用．

超氧化物歧化酶（SOD）活力的高低可以反應(yīng)出機(jī)體清除體內(nèi)自由基的能力，組織中T－AOC的含量水平能直接反映出機(jī)體整體的抗氧化能力，而脂質(zhì)過(guò)氧化物（MDA）反應(yīng)出機(jī)體細(xì)胞受到自由基損傷的程度．活性氧簇（ROS）是介導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷的主要介質(zhì)，在男性生殖系統(tǒng)中多種抗氧化酶與ROS處于動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)［11－12］．ROS與精子膜表面多不飽和脂肪酸相互反應(yīng)產(chǎn)生MDA，因此ROS的含量能反應(yīng)精子氧化應(yīng)激損傷的程度［13］．由表3可見(jiàn)，與模型對(duì)照組比較，薯蕷三個(gè)劑量組睪丸組織中的SOD活力及T－AOC含量明顯恢復(fù)上升（P＜0．05），MDA、ROS含量明顯下降（P＜0．05），說(shuō)明薯蕷皂苷元具有很好的抗氧化能力．

綜上所述，薯蕷皂苷元改善了環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的少弱精子癥模型小鼠的精子質(zhì)量，提高了生殖系統(tǒng)的臟器系數(shù)，睪丸組織氧化應(yīng)激損傷減輕，說(shuō)明薯蕷皂苷元對(duì)少弱精子癥的治療具有重要價(jià)值．

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Assessment of Sperm Quality and Oxidative Stress Injury of Reproductive System after Oligoasthenospermia Mice Received Diosgenin

ZHOU Xi，YANG Lin，ZHANG Wenjing，XIAO Na?
（Medical College，Hubei University of Arts and Science，Xiangyang 441053，China）

Objective：To study the effect of diosgenin on sperm quality and oxidative stress injury of reproductive system in oligoasthenospermia（OAS）mice．Methods：Fifty Kunming mice were equally randomized into five groups：normal group，model group，low－dose diosgenin，medium－dose diosgenin，high－dose diosgenin．OAS models were made in the latter four groups of mice by cyclophosphamide．To observe the effects of diosgenin on sperm quality，organ coefficient and SOD，MDA，T－AOC and ROS contents in model mice．Results：Compared with the model group，diosgenin obviously increased the sperm quality，and improved the organ coefficient（P＜0．05）．Furthermore，diosgenin significantly increased the SOD and T－AOC activity，reduced the level of MDA and ROS in testicular tissue when compared with the model group（P＜0．05）．Conclusion：diosgenin can improve the sperm quality，increase organ coefficient，and reduce oxidative stress injury in testes of OAS mice．

diosgenin；mice；oligospermia；reproductive system；oxidative stress

R285．5；R698＋．2

A

2095－4476（2017）05－0085－04

（責(zé)任編輯：徐 杰）

2017－02－28；

2017－03－27

襄陽(yáng)市科技局項(xiàng)目（2016）73號(hào)

周 茜（1987— ），女，湖北襄陽(yáng)人，湖北文理學(xué)院醫(yī)學(xué)院助理實(shí)驗(yàn)師．

?通訊作者