宋 晨 孫利敏

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院腫瘤二科，遼寧 大連 116021)

1 腫瘤科

老年乳腺癌組織雌激素受體、孕激素受體與富集AT序列的特異性結(jié)合蛋白1及人表皮生長(zhǎng)因子受體-2表達(dá)的相關(guān)性

宋 晨 孫利敏1

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院腫瘤二科，遼寧 大連 116021)

目的 探討老年乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)與富集AT序列的特異性結(jié)合蛋白(SATB)1及人表皮生長(zhǎng)因子受體(CerbB)2表達(dá)的相關(guān)性。方法 回顧性分析原發(fā)性乳腺癌患者172例的臨床資料。以距腫瘤組織超過(guò)5 cm外的癌旁組織為對(duì)照，用免疫組化方法檢測(cè)乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達(dá)及其與臨床病理特征、ER、PR的關(guān)系。結(jié)果 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織(P<0.05)。組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率最高，其次為Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；臨床分期為Ⅲ期的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER、PR表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(rER=-0.387，-0.372，rPR=-0.296，-0.329，均P<0.05)。結(jié)論 SATB1、CerbB2在老年乳腺癌組織中呈高表達(dá)，且與ER及PR表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。

乳腺癌；雌激素受體；孕激素受體；人表皮生長(zhǎng)因子受體-2；富集AT序列的特異性結(jié)合蛋白1

乳腺癌的發(fā)生與遺傳密切相關(guān)，發(fā)生發(fā)展與腫瘤細(xì)胞凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制涉及諸多基因的異常表達(dá)。富集AT序列的特異性結(jié)合蛋白(SATB)1是一種組織特異性表達(dá)的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白，參與T細(xì)胞的發(fā)育及成熟。近年來(lái)研究顯示SATB1可能為基因組的組織者，參與了核基質(zhì)結(jié)合區(qū)的特異性結(jié)合，參與腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖、侵襲以及轉(zhuǎn)移過(guò)程，提示其有可能成為乳腺癌早期診斷的指標(biāo)之一〔1～3〕。乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)受多種因子調(diào)控，包括雌激素、孕激素等。乳腺癌被認(rèn)為是雌激素依賴性腫瘤，而抗雌激素治療的療效取決于雌激素受體(ER)的表達(dá)情況。目前ER與孕激素受體(PR)水平是臨床上評(píng)估患者預(yù)后，選擇治療方法的重要指標(biāo)〔4〕。人表皮生長(zhǎng)因子受體(CerbB)2參與腫瘤的發(fā)生過(guò)程，與腫瘤組織學(xué)分級(jí)有密切的關(guān)系，惡性程度越高其表達(dá)水平也越高〔5，6〕。本研究擬分析老年乳腺癌組織中ER、PR與CerbB2及SATB1水平的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2010年1月至2015年12月在大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院診斷治療的原發(fā)性乳腺癌患者172例的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥65歲，均為女性，以無(wú)痛性腫塊、乳頭溢液、腋窩腫塊、皮膚潰爛等為初發(fā)癥狀就診，均經(jīng)我院病理科病理切片確診；排除臨床資料不完整者。所有乳腺癌標(biāo)本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片，蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色。172例乳腺癌組織中，浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌125例，浸潤(rùn)性小葉癌47例。組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)61例，Ⅱ級(jí)62例，Ⅲ級(jí)49例。172例患者中有109例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期115例，Ⅲ期57例。以距腫瘤組織超過(guò)5 cm外的癌旁組織為對(duì)照。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器及試劑 海爾冰箱，歐林巴斯光學(xué)顯微鏡，石蠟包埋機(jī)，石蠟切片機(jī)，自動(dòng)脫水機(jī)，電熱恒溫干燥箱。鼠抗人ER、PR單克隆抗體，兔抗人SATB1多克隆抗體，鼠抗人CerbB2單克隆抗體。SP免疫組化試劑盒，磷酸鹽緩沖液(PBS)。

1.2.2 免疫組化染色 用已知陽(yáng)性對(duì)照為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗為陰性對(duì)照。石蠟標(biāo)本連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精分化，PBS沖洗。加H2O2阻斷液50 μl阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，室溫下孵育10 min，PBS浸泡。SATB1、ER、PR、CerbB2采用檸檬酸修復(fù)液熱修復(fù)：5%山羊血清封閉，室溫下孵育10 min，去血清。滴加一抗工作液50 μl，4℃過(guò)夜。恢復(fù)至室溫，PBS沖洗每次5 min。加生物素標(biāo)記二抗50 μl，37℃孵育20 min，PBS沖洗3次，每次5 min。加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑100 μl顯色5 min，PBS阻斷，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水干燥，透明處理，樹(shù)脂封片，之后在顯微鏡下觀察。

1.3 判讀結(jié)果 每張片隨機(jī)選擇10個(gè)有代表性視野計(jì)數(shù)，取平均值。SATB1陽(yáng)性：標(biāo)記在細(xì)胞核，出現(xiàn)棕黃色顆粒。細(xì)胞陽(yáng)性百分率判定：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞≤50%或強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為“+”，陽(yáng)性細(xì)胞>50%或強(qiáng)染色細(xì)胞>5%為“”。ER、PR陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞核，陽(yáng)性細(xì)胞<10%為陰性，10%～25%為“+”，26%～50%為“”，>50%為“”。CerbB2陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜，陽(yáng)性細(xì)胞<10%為“-”，10%～25%為“+”，26%～50%為“”，>50%為“”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá) SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率(SATB1：-55例，+62例，55例；CerbB2:-35例，+62例，41例，34例)顯著高于癌旁組織(SATB1：-172例；CerB2：-163例，+9例)(χ2=177.30、197.31,P<0.000 1)。

2.2 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系 組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的乳腺癌組織SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率最高，其次為Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；臨床分期為Ⅲ期的的乳腺癌組織SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER、PR表達(dá)的相關(guān)性 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n)

表2 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER、PR表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討 論

在致癌因素的刺激下，乳腺上皮細(xì)胞癌基因激活，抑癌基因失活，正常細(xì)胞的增殖周期被干擾，細(xì)胞凋亡與增殖失衡，發(fā)生非典型增生，進(jìn)而發(fā)展為腫瘤。腫瘤組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞間鏈接松散，腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生侵襲及轉(zhuǎn)移并隨著淋巴系統(tǒng)及血液系統(tǒng)播散，導(dǎo)致遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而這個(gè)過(guò)程涉及多種基因。SATB1是阻止特異性表達(dá)的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白，位于3號(hào)染色體上，由763個(gè)氨基酸組成，可形成二聚體，與核基質(zhì)結(jié)合區(qū)序列具有非常高的親和力。核基質(zhì)結(jié)合區(qū)又稱為核骨架結(jié)合區(qū)，是核基質(zhì)上結(jié)合的特定DNA序列。SATB1識(shí)別核基質(zhì)結(jié)合區(qū)A-T豐富序列結(jié)合于DNA雙螺旋小溝〔7〕。不同的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)均具有富含A-T序列，含高度堿基解配對(duì)傾向區(qū)域，該區(qū)域內(nèi)有A-T豐富序列，混合A、T、C并以G結(jié)尾，稱為ATC序列，其內(nèi)含核心解旋原件。SATB1有一個(gè)核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合結(jié)構(gòu)域與一個(gè)同源結(jié)構(gòu)域，識(shí)別核基質(zhì)結(jié)合區(qū)，啟動(dòng)異源報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄，參與基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)調(diào)控。SATB1在正常組織中一般不表達(dá)，在大多的腫瘤細(xì)胞中有異常表達(dá)。有學(xué)者研究認(rèn)為SATB1是乳腺癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移所必需的，其在非轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)異常，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞活動(dòng)性侵襲〔8〕。體外研究顯示，敲除乳腺癌細(xì)胞中的SATB1基因后腫瘤細(xì)胞顯示正常的腺泡結(jié)構(gòu)，恢復(fù)上皮細(xì)胞正常極性，腫瘤侵襲表型被逆轉(zhuǎn)〔9，10〕。非侵襲性乳腺癌細(xì)胞中SATB1的高表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)類似高度侵襲性乳腺癌基因表達(dá)譜，乳腺癌細(xì)胞增殖加強(qiáng)并發(fā)生轉(zhuǎn)移〔11〕。SATB1被稱為“基因組組織者”，是其他基因異常表達(dá)的總“開(kāi)關(guān)”，可影響1 000多種基因的表達(dá)，改變基因譜包括許多與腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因〔12〕。有學(xué)者測(cè)定預(yù)后不良乳腺癌中，有63中預(yù)后不良基因與SATB1表達(dá)異常有關(guān)，SATB1的異常表達(dá)導(dǎo)致乳腺細(xì)胞基因表達(dá)模式改變。SATB1可上調(diào)多種基因的表達(dá)，包括轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，例如鈣結(jié)合蛋白、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等〔1〕。SATB1還能夠上調(diào)與上皮生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)到有關(guān)的基因，還能抑制抑癌基因的表達(dá)。SATB1表達(dá)下調(diào)浸潤(rùn)性乳腺癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)基因，喪失正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)受多種因子的調(diào)控，包括雌激素、孕激素、雄激素等。乳腺癌被認(rèn)為是雌激素依賴性腫瘤。乳腺組織是雌激素的靶組織，體內(nèi)雌激素水平過(guò)高，雌激素、孕激素平衡失調(diào)，都會(huì)誘發(fā)乳腺癌。乳腺上皮是表達(dá)ERα但少量表達(dá)ERβ〔13〕，ERα能夠激活乳腺上皮，使其受雌激素刺激，ERα表達(dá)增加的同時(shí)ERβ表達(dá)下降。乳腺癌中，ER及PR陽(yáng)性表達(dá)丟失的腫瘤分化程度更低，具有更強(qiáng)的生物活性及侵襲性。實(shí)踐證明，ER、PR是乳腺癌內(nèi)分泌治療的決定性指標(biāo)，并且影響乳腺癌的預(yù)后。ER、PR陽(yáng)性的乳腺癌內(nèi)分泌治療效果更好，并且預(yù)后也更好〔14〕。本研究說(shuō)明SATB1高表達(dá)的患者預(yù)后較差。

CerbB2癌基因又稱為Her-2或者neu，其編碼的跨膜蛋白質(zhì)具有內(nèi)酪氨酸激酶樣活性，參與正常乳腺細(xì)胞的生長(zhǎng)及發(fā)育的調(diào)節(jié)過(guò)程，其可促進(jìn)細(xì)胞分裂，蛋白水解酶分泌，增強(qiáng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力〔15，16〕。病理情況下，CerbB2受體表達(dá)增加，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移〔17〕。CerbB2高表達(dá)提示細(xì)胞增殖旺盛，侵襲力強(qiáng)，癌基因激活，癌變細(xì)胞內(nèi)癌基因數(shù)量性質(zhì)改變，受體結(jié)構(gòu)缺陷，抑制乳腺癌激素依賴的生長(zhǎng)特性〔18〕。CerbB2在胚胎發(fā)育形成及分化中發(fā)揮一定的作用，在上皮細(xì)胞中有廣泛表達(dá)。CerbB2能抑制凋亡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。CerbB2還能夠顯著上調(diào)VEGF/VDF，刺激腫瘤新生血管的生成，促進(jìn)癌癥的發(fā)生及發(fā)展〔19〕。CerbB2能夠下調(diào)整合蛋白的表達(dá)，增加腫瘤細(xì)胞侵襲力，破壞機(jī)體正常反侵襲屏障，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。病理情況下，酪氨酸激酶蛋白活化增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及發(fā)展。本研究說(shuō)明CerbB2參與乳腺癌的發(fā)生，而臨床分期越晚表達(dá)水平越高，組織學(xué)分級(jí)越高表達(dá)水平越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)水平高，這提示CerbB2參與了乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程。本研究結(jié)果也提示CerbB2高表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后相對(duì)較差，并且內(nèi)分泌治療效果欠佳。

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〔2017-02-03修回〕

(編輯 郭 菁/滕欣航)

孫利敏(1972-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事乳腺癌及老年腫瘤學(xué)研究。

宋 晨(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事乳腺癌方向研究。

R73

A

1005-9202(2017)10-2479-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.059