和 梅,方 丹,王 璇

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科, 黑龍江 佳木斯154003)

а-硫辛酸對(duì)戊四氮致癇大鼠認(rèn)知功能保護(hù)作用①

和 梅,方 丹,王 璇

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科, 黑龍江 佳木斯154003)

目的：通過戊四氮(PTZ)點(diǎn)燃癲癇模型，觀察癲癇發(fā)作后學(xué)習(xí)記憶能力與海馬中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-a)水平影響及藥物а-硫辛酸(ALA)干預(yù)作用，并探討其機(jī)制。方法：選取雄性SPF級(jí)Wistar大鼠18只，分為NS組(生理鹽水組)、PTZ組(癲癇組)和ALA+PTZ組(治療組)，每組6只。每隔(48±2)h腹腔注射藥物：對(duì)照組(生理鹽水1mL/kg)；癲癇組(PTZ35mg/kg)，建立癲癇模型；治療組在PTZ注射前30min給予ALA50mg/kg，共28d。采用Morris水迷宮評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)海馬組織白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-a)及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)水平。 結(jié)果：Morris水迷宮測(cè)試中ALA+PTZ組逃避潛伏期較PTZ組短(P<0.05)；ALA+PTZ組第一象限停留時(shí)間較PTZ組多(P<0.05)。ELISA檢測(cè)NS組和ALA+PTZ組大鼠海馬中BDNF的表達(dá)量高于PTZ組(P<0.05)；IL-6、TNF-a的含量低于PTZ組(P<0.05)。結(jié)論：ALA可以改善癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，ALA能促進(jìn)BDNF表達(dá)，減少海馬組織IL-6、TNF-a促炎性因子表達(dá)，從而改善癲癇大鼠的認(rèn)知障礙。

癲癇；認(rèn)知功能；а-硫辛酸

癲癇是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特點(diǎn)是不可預(yù)知的反復(fù)癇性發(fā)作[1]。大多數(shù)癲癇患者患一個(gè)或多個(gè)精神病并存的情況，以及行為障礙和認(rèn)知功能障礙。除了癲癇，這些合并癥的綜合治療是一個(gè)挑戰(zhàn)，由于它們其中復(fù)雜病理生理關(guān)系。臨床研究表明在控制癲癇發(fā)作的同時(shí)改善認(rèn)知功能是目前治療癲癇的熱點(diǎn)以及難點(diǎn)之一[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)與癲癇及癲癇后認(rèn)知損害密切相關(guān)，抗炎治療可能是一個(gè)新的突破點(diǎn)。а-硫辛酸(ALA)是一種強(qiáng)效氧化劑，但是在最新的研究指出具有抗炎作用，同時(shí)對(duì)認(rèn)知功能也有保護(hù)作用。戊四氮是GABA受體拮抗劑，在一個(gè)特定的時(shí)間段給予亞驚厥劑量(反復(fù))，可緩慢導(dǎo)致慢性癲癇模型的點(diǎn)燃。因此，本研究旨在討論戊四氮致癇后認(rèn)知功能與海馬中BDNF、IL-6、TNF-a的相關(guān)性及藥物ALA干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和造模

健康成年雄性SPF級(jí)Wistar大鼠18只，體重250～290g，購(gòu)于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。將其隨機(jī)分為NS組(生理鹽水組)、PTZ組(癲癇組)和ALA+PTZ組(治療組)，每組6只。實(shí)驗(yàn)于上午8～10點(diǎn)進(jìn)行，每隔(48±2)h腹腔注射。NS組給予生理鹽水1mL/kg，PTZ組大鼠給予PTZ35mg/kg，ALA+PTZ組大鼠注射PTZ前30min給予ALA50mg/kg，PTZ組給予等量生理鹽水。共28d。

1.2 癲癇行為觀察

每次注射后，動(dòng)物被放置在隔離的透明有機(jī)玻璃籠子里，并觀察它們的行為1h。行為學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)驚厥程度分級(jí)(Racine分級(jí))，將大鼠行為分為5級(jí)。0級(jí)：無任何反應(yīng)，呈正常的行為狀態(tài)；1級(jí)：多動(dòng)、躁動(dòng)和觸須抽搐；2級(jí)：點(diǎn)頭，頭陣攣；3級(jí)：?jiǎn)蝹?cè)肢體陣攣；4級(jí)：雙側(cè)肢體陣攣；5級(jí)：全身陣攣，失去平衡，跌倒。連續(xù)5次達(dá)到3級(jí)或3級(jí)以上為完全點(diǎn)燃。

1.3Morris水迷宮 (MWM)試驗(yàn)

在第29天行Morris水迷宮訓(xùn)練。①定位航行試驗(yàn)：大鼠按固定的位點(diǎn)放入水中，記錄大鼠爬上平臺(tái)平均花費(fèi)時(shí)間，記錄為逃避潛伏期。若大鼠未能在60s內(nèi)找到平臺(tái)，將其引至平臺(tái)并停留20s，則潛伏期記為60s。②空間探索實(shí)驗(yàn)：完成①試驗(yàn)后，去掉平臺(tái)，記錄大鼠60s內(nèi)停留在平臺(tái)所在象限的時(shí)間。

1.4 取材檢測(cè)

MWM試驗(yàn)完成后第2天，10%水合氯醛(350mg/kg)將大鼠麻醉。斷頭后快速在冰槽上剝離并取出雙側(cè)海馬組織。將組織勻漿后，以1500r/min4e離心10min后取上清液，-80℃液氮保存。依據(jù)試劑盒說明書檢測(cè)勻漿中IL-6、TNF-a及BDNF的水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用t檢驗(yàn)、單因素方差分析及重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料方差分析處理數(shù)據(jù)。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癇樣發(fā)作情況

癲癇組大鼠在試驗(yàn)第8～12天時(shí)出現(xiàn)眨眼動(dòng)須、點(diǎn)頭樣運(yùn)動(dòng)。隨后癥狀逐漸加重，最終出現(xiàn)大發(fā)作。治療組在第12～14天時(shí)開始出現(xiàn)癲癇發(fā)作，最終全部點(diǎn)燃。對(duì)照組無癲癇發(fā)作。

2.2Mirros水迷宮試驗(yàn)情況

癲癇組與NS組、治療組比較，尋找平臺(tái)潛伏期時(shí)間顯著增加(P<0.05)，目標(biāo)象限停留時(shí)間也顯著縮短(P<0.05)。與NS組比較，治療組尋找平臺(tái)潛伏期時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)，目標(biāo)象限停留時(shí)間縮短(P<0.05)。見表1。

表1 a-硫辛酸對(duì)癲癇大鼠Mirros水迷宮影響

注：PTZ組與NS組、PTZ+ALA組比較:*P<0.05;PTZ+ALA組與NS組比較:#P< 0.05。

2.3 大鼠海馬組織中含量變化

癲癇組較NS組中IL-6、TNF-a的含量明顯升高(P<0.05)，BDNF含量明顯下降(P<0.05)。治療組較癲癇組中IL-6、TNF-a的含量明顯下降(P<0.05)，但仍高于NS組(P<0.05)；BDNF含量明顯升高(P<0.05)，但仍低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠海馬IL-6、TNF-a、BDNF含量

注：PTZ組與NS組比較，*P<0.05；PTZ+ALA組與PTZ組、NS組比較，#P<0.05。

3 討論

本研究結(jié)果提示：在定位航行試驗(yàn)時(shí)，癲癇組(49s)及治療組(19s)逃避潛伏期時(shí)間較對(duì)照組(13s)顯著延長(zhǎng)，表示其學(xué)習(xí)能力下降。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，癲癇組(4s)及治療組(9s)在第一象限停留時(shí)間較對(duì)照組(20s)顯著縮短，表示其空間記憶能力減退。可見а-硫辛酸能改善癲癇大鼠認(rèn)知功能障礙。在大鼠海馬組織中，治療組IL-6、TNF-a含量較癲癇組均顯著降低，同時(shí)BDNF顯著升高，可見а-硫辛酸的應(yīng)用可使大鼠海馬內(nèi)IL-6、TNF-a水平下降，并能夠減輕炎癥因子蓄積造成神經(jīng)損害的擴(kuò)大，同時(shí)BDNF水平的升高可對(duì)海馬組織炎癥反應(yīng)予以抑制，對(duì)海馬組織予以保護(hù)。 筆者選擇IL-6、TNF-a等炎癥因子以及BDNF認(rèn)知保護(hù)作用因子指標(biāo)作為明確а-硫辛酸改善癲癇大鼠認(rèn)知功能障礙可能的作用機(jī)制。臨床研究表明,認(rèn)知缺陷患者腦內(nèi)炎癥因子與抗炎癥因子產(chǎn)生異常,引起神經(jīng)病理損害[3]。過度激活的神經(jīng)炎癥反應(yīng)能夠抑制與認(rèn)知調(diào)節(jié)密切相關(guān)的神經(jīng)可塑性形成及神經(jīng)傳導(dǎo)通路等過程，阻礙膽堿神經(jīng)元的功能，導(dǎo)致認(rèn)知功能下降。Anisman[4]等報(bào)道指出BDNF參與學(xué)習(xí)記憶的調(diào)節(jié)，可通過大腦膽堿能系統(tǒng)發(fā)揮作用。Salinthone[5]等研究表明ALA能夠通過CAMP/PKA、Jak/Stat3等信號(hào)通路減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。同時(shí)，Vlllasana[6]等也指出ALA能提高腦內(nèi)乙酰膽堿水平，從而發(fā)揮保護(hù)認(rèn)知功能。 綜上所述，α-硫辛酸能改善癲癇大鼠的認(rèn)知功能障礙，其可能的作用機(jī)制之一是減輕海馬區(qū)炎癥反應(yīng)，從而減輕海馬損傷最終改善認(rèn)知功能。因此，抗炎治療可能為改善癲癇認(rèn)知損害的途徑之一。

[1]和梅，寇傳玉，和廿，等．左乙拉西坦、托吡酯對(duì)癲癇部分性發(fā)作療效及認(rèn)知功能的影響[J]．黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2016，39(1):11-12

[2]張巖,王海燕,王影,等.左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知功能的影響研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2013，36(2):6-8

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佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：YM2016-029。

和梅(1962～)女，黑龍江佳木斯人， 碩士，教授,碩士研究生導(dǎo)師。

方丹(1990～)女，湖北孝感人，在讀碩士研究生 。E-mail:1402257344@qq.com。

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1008-0104(2017)03-0098-02

2016-09-28)