□ 姚 瑤 鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心

水產(chǎn)品中副溶血性弧菌計(jì)數(shù)的不確定度評(píng)定

□ 姚 瑤 鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心

目的建立水產(chǎn)品中副溶血性弧菌MPN法計(jì)數(shù)結(jié)果的不確定度評(píng)定方法。方法依據(jù)JJF1059.1-2012測(cè)量不確定度評(píng)定與表示和SN/T4091–2015食品微生物學(xué)測(cè)量不確定度評(píng)估指南，分析檢測(cè)過(guò)程中不確定度主要來(lái)源，計(jì)算合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果顯示樣品制備、遞增稀釋和加樣過(guò)程引起的不確定度所占分量較小，屬于B類不確定度，重復(fù)性試驗(yàn)引起的不確定度屬A類不確定度。計(jì)算得出95%的置信水平的擴(kuò)展不確定度為0.082，檢驗(yàn)結(jié)果為81 MPN/g時(shí)，取值范圍為（81±7） MPN/g。結(jié)論本文采用的評(píng)定方法，可以對(duì)水產(chǎn)品副溶血性弧菌MPN法計(jì)數(shù)結(jié)果的不確定度做出估計(jì)，用于水產(chǎn)品副溶血性弧菌污染的安全性評(píng)估。

水產(chǎn)品；副溶血性弧菌；MPN；不確定度

副溶血性弧菌（VibrioParahemol yticus）是一種嗜鹽性弧菌，存在于近海的海水與海底沉積物、魚類和貝殼等海產(chǎn)品中，食用未煮熟的海產(chǎn)品或污染的鹽腌制品容易引起食物中毒，是我國(guó)沿海地區(qū)食物中毒中最常見(jiàn)的一種[1]。近年，江蘇各地的水產(chǎn)品中均有陽(yáng)性菌的檢出[2-3]。2013年，食品國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的限量要求，所以準(zhǔn)確評(píng)估生制水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染數(shù)量尤為重要。我們參照J(rèn)JF1059.1-2012測(cè)量不確定度評(píng)定與表示[4]和SN/T4091–2015食品微生物學(xué)測(cè)量不確定度評(píng)估指南[5]，以鹽城特產(chǎn)醉螺為對(duì)象，醉螺屬于即食生制水產(chǎn)品，通過(guò)分析其檢驗(yàn)過(guò)程的不確定度分量，計(jì)算合成不確定度和擴(kuò)展不確定度來(lái)描述副溶血性弧菌計(jì)數(shù)結(jié)果的不確定度，建立水產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢測(cè)結(jié)果不確定度的評(píng)定方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

醉螺（鹽城合成昌食品有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

瓶裝醉螺中加入副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC17802菌懸液，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)2 min后，按照《GB4789.7-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)中銅綠假單胞菌檢驗(yàn)》[6]的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，步驟如下：稱取樣品25 g，加入225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水，均質(zhì)2 min后制備成1∶10的樣品勻液，用無(wú)菌吸管吸取1∶10的樣品勻液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，制備1∶100的樣品勻液，同理制備1∶1000的樣品勻液。將這3個(gè)連續(xù)稀釋度接種3支含有9 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1 mL，置（36±1）℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)8～18 h。挑取顯示生長(zhǎng)的增菌液，于TCBS平板或弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離，一支試管劃線一塊平板，于（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h。挑取3個(gè)以上可疑菌落進(jìn)行生化鑒定，查MPN表，報(bào)告結(jié)果。

1.3 不確定度分量的來(lái)源

此檢驗(yàn)過(guò)程由一人在20 ℃標(biāo)準(zhǔn)溫度的環(huán)境下操作，所有操作嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，所以可以忽略人員和環(huán)境造成的不確定度分量，且實(shí)驗(yàn)加入標(biāo)準(zhǔn)菌株，檢出的可疑菌落經(jīng)鑒定符合副溶血性弧菌的生化特性。所以我們僅分析以下幾個(gè)分量：（1）樣品制備過(guò)程中引入的不確定度U(樣品制備)；（2）遞增稀釋引入的不確定度U(遞增稀釋)；（3）向培養(yǎng)基加樣引入的不確定度U(加樣)；（4）重復(fù)檢測(cè)結(jié)果引起的不確定度U(重復(fù)檢測(cè))。

2 各不確定度分量的評(píng)定

2.1 樣品制備過(guò)程中引入的不確定度評(píng)定

樣品制備過(guò)程主要含有兩個(gè)分量：①稱量25 g樣品時(shí)電子天平引入的不確定度。②用250 mL量筒量取225 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水時(shí)量筒引入的不確定度。

用精度為0.1 g的電子天平稱取25 g樣品，天平的最大允差為±0.1 g，所以天平的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

量筒按JJG196-2006常用玻璃量器[7]的容量允差為±2.0 mL，所以量筒的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

則

2.2 遞增稀釋引入的不確定度評(píng)定

樣品稀釋采用1 mL和10 mL刻度吸管，按照J(rèn)JG196-2006常用玻璃量器規(guī)定，1 mL和10 mL刻度吸管的容量允差分別為±0.008 mL和±0.05 mL，所以1 mL刻度吸管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

10 mL刻度吸管的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

在本實(shí)驗(yàn)中，遞增稀釋兩次，得到1∶100、1∶1000的樣品勻液，所以在此遞增稀釋過(guò)程中的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3 向培養(yǎng)基加樣引入的不確定度評(píng)定

用1 mL刻度吸管吸取樣品勻液，加入到9 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管中。按照J(rèn)JG196-2006常用玻璃量器規(guī)定，1 mL刻度吸管的容量允差分別為±0.008 mL，所以加樣過(guò)程中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

Urel(加樣)=Urel(1mL)=0.00462

2.4 重復(fù)檢測(cè)結(jié)果引起的不確定度評(píng)定

同一樣品重復(fù)檢測(cè)10次，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可以得出：

3 醉螺中副溶血性弧菌計(jì)數(shù)的合成不確定度和擴(kuò)展不確定度

綜合上述幾個(gè)分量的不確定度結(jié)果，樣品中銅綠假單胞菌計(jì)數(shù)的合成不確定度為：

包含因子k=2（大約對(duì)應(yīng)95%的置信水平），擴(kuò)展不確定度為：

所以副溶血性弧菌計(jì)數(shù)結(jié)果平均值為81時(shí)，可以計(jì)算其相應(yīng)的擴(kuò)展不確定度為：

U=81MPN/g×0.082≈7MPN/g

4 結(jié)論

“黑匣子”系統(tǒng)顯示了食品微生物不確定度的主要來(lái)源，包括取樣、稀釋、操作者、時(shí)間、設(shè)備、培養(yǎng)基和試劑等[4]，在本實(shí)驗(yàn)中，都是采用同一批次、經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)基和試劑，且由同一人操作，環(huán)境溫度控制在20℃，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，所以忽略了環(huán)境、操作者、培養(yǎng)基和試劑等不確定度，主要考慮了樣品制備、遞增稀釋、加樣及重復(fù)性檢測(cè)引起的不確定度。其中樣品制備、遞增稀釋和加樣體積引起的不確定度所占分量較小，屬于B類不確定度，以重復(fù)性實(shí)驗(yàn)引起的不確定度占主要部分，屬于A類不確定度。

表1 樣品檢驗(yàn)結(jié)果

食品檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量往往會(huì)直接影響國(guó)家和企業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益，例如，對(duì)食品衛(wèi)生指標(biāo)若測(cè)量不準(zhǔn)，使本來(lái)合格的產(chǎn)品判為不合格，造成企業(yè)的損失，或者使本來(lái)不合格的產(chǎn)品判為合格，會(huì)影響人體的健康，測(cè)量不確定度就是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征[8]，可見(jiàn)食品檢測(cè)中測(cè)量不確定度的重要意義。GB29921-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》[9]中規(guī)定了水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的限量，即同一批次的5份樣品中最多僅能有1份樣品超出可接受水平的限量值，在100～1000 MPN/g之間。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果為邊緣數(shù)據(jù)時(shí)，結(jié)合不確定度評(píng)定才能更加準(zhǔn)確地評(píng)估產(chǎn)品合格與否。以2號(hào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為例，副溶血性弧菌計(jì)數(shù)結(jié)果為93 MPN/g，其相應(yīng)的擴(kuò)展不確定度為8 MPN/g，取值范圍為85～101 MPN/g，此時(shí)判定結(jié)果時(shí)就應(yīng)當(dāng)慎重。所以通過(guò)不確定度的評(píng)定，可以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性。

[1]盤箐,曾雪芳.病原生物與免疫學(xué)[M].長(zhǎng)沙:中南大學(xué)出版社,2015.

[2]王燕梅,唐震,喬昕,等.江蘇省水產(chǎn)及其制品中副溶血性弧菌污染情況調(diào)查[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,26(19):2846-848.

[3]張周建,張衛(wèi)兵,羌校君,等.江蘇省南通市餐飲業(yè)即食生食動(dòng)物性水產(chǎn)品微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2014,20(8):17-19.

[4] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示JJF1059.1—2012 [S].北京:中國(guó)計(jì)量出版社,2012.

[5]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.食品微生物學(xué)測(cè)量不確定度評(píng)估指SN/T4091—2015[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015.

[6]中華人民共和國(guó)國(guó)家和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)GB4789.7-2013[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013.

[7]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.中華人民共和國(guó)計(jì)量檢定規(guī)程常用玻璃量器 JJG196-2006[S].北京:中國(guó)計(jì)量出版社,2007.

[8]王叔淳.食品分析質(zhì)量保證與實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2004.

[9]中華人民共和國(guó)國(guó)家和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量GB29921-2013[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013.

姚瑤（1987-），女，江蘇鹽城人，碩士。研究方向：食品檢驗(yàn)。