□ 都鵬飛 杭州貝因美母嬰營(yíng)養(yǎng)品有限公司 熊麗娜 貝因美（杭州）食品研究院有限公司 林加建 杭州貝因美母嬰營(yíng)養(yǎng)品有限公司

高效液相色譜法測(cè)定市售堅(jiān)果中苦杏仁苷含量

□ 都鵬飛 杭州貝因美母嬰營(yíng)養(yǎng)品有限公司 熊麗娜 貝因美（杭州）食品研究院有限公司 林加建 杭州貝因美母嬰營(yíng)養(yǎng)品有限公司

本文通過(guò)采用PhenomenexSynergi 4u hydro-RP 80A(250×4.6mm)色譜柱，以甲醇-水（23∶77）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，流速為0.7 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)217 nm，柱溫25 ℃，建立了適用于榛子、核桃、杏仁和腰果中苦杏仁苷檢測(cè)的方法，得到苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=9.518 6x-21.042，在進(jìn)樣質(zhì)量濃度為20～320 μg/mL時(shí)線性關(guān)系良好，R2=0.999 6，平均回收率為97.22%，RSD為4.3%，方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確。結(jié)果發(fā)現(xiàn)杏仁中苦杏仁苷含量最高，達(dá)442.71～814.26 mg/kg；核桃次之，含量為318.35 mg/kg，腰果及榛子中含量相對(duì)較低，分別為47.61～98.36 mg/kg、79.45～125.83mg/kg，苦杏仁苷含量與堅(jiān)果產(chǎn)地密切相關(guān)，研究結(jié)果為堅(jiān)果中有害物質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供理論依據(jù)，

高效液相色譜；堅(jiān)果；苦杏仁苷

榛子、核桃、杏仁和腰果，被稱為“世界四大堅(jiān)果”，也是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)林作物。堅(jiān)果中含有豐富的不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和酚類，目前對(duì)其研究主要集中在營(yíng)養(yǎng)方面，對(duì)于潛在的風(fēng)險(xiǎn)成分分析罕有研究?？嘈尤受諒V泛存在于薔薇科種子，在人體內(nèi)經(jīng)酶的作用發(fā)生水解產(chǎn)生游離的氫氰酸和小分子酮而產(chǎn)生嚴(yán)重危害。以中藥材如苦杏仁等為對(duì)象，其中苦杏仁苷的HPLC分析檢測(cè)文獻(xiàn)報(bào)道較多[1-2]，但對(duì)于堅(jiān)果中定量檢測(cè)報(bào)道較少。堅(jiān)果消費(fèi)量大面廣，對(duì)其中苦杏仁苷含量進(jìn)行分析和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

來(lái)自不同產(chǎn)地的四種市售堅(jiān)果：杏仁：分別產(chǎn)自山東、河北、新疆、四川、遼寧；核桃：產(chǎn)自云南、陜西、山東、新疆；榛子：產(chǎn)自美國(guó)、中國(guó)遼寧；腰果：產(chǎn)自越南、東北；苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度>98%）

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent1100高效液相色譜儀（G1314A VDW檢測(cè)器）；BSA124SCW分析天平；KQ-250B超聲波清洗器；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；DGX-9143B-2鼓風(fēng)干燥箱；A111BS25研磨機(jī)；TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品溶液配制

精密稱取0.010 0 g苦杏仁苷對(duì)照品，以甲醇定容至10 mL，搖勻。

1.3.2 供試樣品溶液制備

樣品于60 ℃條件下干燥至恒重，搗碎，精確稱取2 g，按1∶40料液比用石油醚（沸程60～90 ℃）超聲波輔助脫脂30 min，過(guò)濾，濾渣風(fēng)干后以1∶20料液比用甲醇超聲浸提60 min，過(guò)濾，20 mL甲醇沖洗殘?jiān)?，合并濾液。濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并至10 mL，密封后4 ℃貯藏備用。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：PhenomenexSynergi 4μ hydro-RP 80A(250 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇-水（23∶77，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)為217 nm；柱溫：25 ℃；流速：0.7 mL/min。以標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間定性，外標(biāo)法峰面積定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)確定

苦杏仁苷紫外可見(jiàn)光區(qū)掃描圖見(jiàn)圖2a，通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描，苦杏仁苷在紫外光區(qū)有吸收，最大吸收波長(zhǎng)為217 nm，與文獻(xiàn)報(bào)道的210 nm，215 nm接近[1-2]。

2.1.2 流動(dòng)相比例及流速確定

樣品中苦杏仁苷分離效果圖見(jiàn)圖2b，通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相比例(甲醇與水比例分別為30∶70、25∶75、23∶77、22∶78)，得出在流動(dòng)相為甲醇與水體積比23∶77，流速0.7 mL/min條件下，樣品中苦杏仁吸收峰與其他雜質(zhì)峰均可得到較好的分離。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 線性關(guān)系考察

分別配制20、40、80、160 μg/ mL和320 μg/mL苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣2次，每次10 μL，以濃度與平均峰面積分別為橫縱坐標(biāo)，得回歸方程：y=9.518 6x-21.042，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。

2.2.2 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按1.3.3設(shè)定色譜條件平行進(jìn)樣5次，每次10 μL，經(jīng)HPLC分析得峰面積分別為3 038.4，3 047.5，3 069.7，3 004.4，3 006.9，RSD為0.92%。

2.2.3 重復(fù)性驗(yàn)證

準(zhǔn)確稱取遼寧杏仁5份各2 g，按1.3.2樣品處理方法平行處理，分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得峰面積分別為1 569.1、1 570.4、1 510.9、1 549.5、1 502.9，RSD為2.04%。

2.2.4 加樣回收率驗(yàn)證

取已知苦杏仁苷含量的杏仁5份各2 g，分別加入一定量苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算得回收率分別為94.20%、92.80%、103.50%、96.50%、99.10%，平均回收率為97.22%，RSD為4.3%。

方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示本文采用的提取方法及測(cè)定條件適用于四種堅(jiān)果中苦杏仁苷的定量測(cè)定。

2.3 樣品測(cè)定結(jié)果

各種樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。從表1我們可發(fā)現(xiàn)，杏仁中苦杏仁苷含量明顯高于其他三種堅(jiān)果，產(chǎn)地與品種對(duì)堅(jiān)果中苦杏仁苷含量有很大的影響。從杏仁看，北方產(chǎn)比南方產(chǎn)苦杏仁苷含量高；對(duì)核桃而言，陜西核桃中苦杏仁苷含量318.35 μg/g?？嘈尤受招∈罂诜畲竽褪芰繛?5 mg/kg[3]，而遼寧產(chǎn)杏仁中苦杏仁苷含量高達(dá)814 mg/kg，證明一次性食用過(guò)量杏仁將對(duì)人體產(chǎn)生危害，其他品種堅(jiān)果亦是如此。

3 結(jié)論

通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，市售常見(jiàn)堅(jiān)果中苦杏仁苷含量較高，可達(dá)47.61~814 mg/kg，若食用量大，易導(dǎo)致中毒，因此必須控制堅(jiān)果一次性攝入量。本文所選樣品為未經(jīng)加工的生堅(jiān)果，而在加工過(guò)程中通過(guò)機(jī)械、熱力或微生物作用，堅(jiān)果組織細(xì)胞破壞，苦杏仁苷會(huì)發(fā)生分解而使攝入體內(nèi)的量減少。因此適當(dāng)?shù)募庸だ跍p少危害。但是，劇烈的加工條件易造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失。因此，尋找既不破壞營(yíng)養(yǎng)成分，又能減少有害物質(zhì)的加工方法勢(shì)在必行。同時(shí)，對(duì)于各加工與流通環(huán)節(jié)苦杏仁苷含量的監(jiān)控與風(fēng)險(xiǎn)分析也必不可少。

圖2 a 苦杏仁苷紫外可見(jiàn)光區(qū)掃描圖

圖2 b 樣品中苦杏仁苷分離效果圖

表1 不同種類及產(chǎn)地堅(jiān)果中苦杏仁苷測(cè)定結(jié)果

[1]FATMA A Y ,M. ATILLA A. Variability of amygdalin content in seeds of sweet andbitter apricot cultivars in Turkey[J]. African Journal of Biotechnology, 2010, 9(39):6522-6524.

[2]葉晶晶.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地桃仁中苦杏仁苷的含量[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2011,29(1):206-207.

[3]郭曉莊.有毒中草藥大辭典[M].天津:科技翻譯出版公司,1992:292.

熊麗娜。