□ 梁曉婷 廣東嶺南職業(yè)技術學院

云芝糖肽水提醇沉提取工藝

□ 梁曉婷 廣東嶺南職業(yè)技術學院

避免了有毒溶劑使用，本文建立了水提醇沉法提取純化云芝糖肽的技術方法，以期為云芝糖肽無公害生產提供參考。

云芝糖肽；水提醇沉；提取工藝

云芝糖肽系從云芝或培養(yǎng)的菌絲中提取純化的結合蛋白多糖，是良好的生物效應調節(jié)劑，對遷延性肝炎、慢性肝炎有良好的療效，能抑制癌細胞的增生，屬于國家II類新藥。目前，云芝糖肽大多是采用水提醇沉的方式提取，但使用到氯仿和正丁醇等有毒有機溶劑。為了解決這個缺點和不足，本研究采用熱水浸提，無水乙醇沉淀，并優(yōu)化該提取工藝。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

潔凈工作臺、分析天平、電熱恒溫培養(yǎng)箱、分光光度計和高速冷凍離心機。經優(yōu)選LN-CV0707云芝菌株液體發(fā)酵菌絲體[1]。牛血清白蛋白、福林-酚試劑、無水乙醇均為分析純。

1.2 云芝糖肽水提醇沉提取

準確稱取1 g（精度至0.1 mg）凍干的菌絲體粉末，加入蒸餾水50 mL，按一定溫度、時間、料水比，置恒溫水浴鍋中提取2次，然后9 000 r/ min離心20 min，上清液轉入旋轉蒸發(fā)儀中濃縮定容至2 mL，加入6 mL無水乙醇，混勻后4 ℃過夜醇沉后9 000 r/min離心10 min，得到的沉淀真空干燥，即得云芝糖肽。云芝糖肽提取率（%）=云芝糖肽質量/菌粉質量×100%。

1.3 云芝糖肽中肽含量的測定

取0.25 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8 mL和1.0 mL分別置于具塞試管中，加水定容至1.0 mL，加5.0 mL福林-酚試劑甲溶液。搖勻后放置5 min，加0.5 mL福林-試劑乙溶液，混勻后放置20 min，在500 nm波長處測定其吸收度，并建立回歸方程。

2 結果與討論

2.1 不同破碎方式對云芝糖肽提取率的影響

考察了高壓均質和勻漿機勻漿兩種破碎方式對菌絲體內云芝糖肽提取率的影響。試驗結果表明：高壓均質法破碎提取的云芝糖肽提取率（62.3 mg/g）較高，比勻漿機勻漿提取率高（48.7 mg/g）。從提取率大小考慮，應選擇高壓均質法，但由于在小試階段的發(fā)酵液較少，勻漿機勻漿法成本低。因此，選擇勻漿機勻漿作為小試階段云芝糖肽水提醇沉提取方式。

2.2 提取溫度對云芝糖肽提取率的影響

考察了50、60、70、80、90 ℃和100 ℃等不同提取溫度對云芝糖肽提取率的影響（圖1）。從圖1中可知，隨著提取溫度的升高，云芝糖肽提取率逐漸升高；當溫度為40℃時，云芝糖肽提取率僅約為80 ℃的一半；當溫度升至80 ℃以上時，云芝糖肽提取率下降，而且趨于平緩?？紤]溫度過高可引起變性等可能性，采用提取溫度80 ℃為宜。

圖1 提取溫度對云芝糖肽提取率的影響圖

2.3 提取時間對云芝糖肽提取率的影響

考察了不同提取時間對云芝糖肽提取效果的影響。試驗結果表明：提取時間對云芝糖肽提取效果具有顯著的影響，當提取時間在1～2 h，云芝糖肽提取率隨著提取時間的增加而增大，當提取時間為2 h時，提取率最大，約為48.3 mg/g；當繼續(xù)增大時，云芝糖肽提取率卻呈逐漸下降趨勢；當提取時間為5 h時，提取率呈逐漸穩(wěn)定趨勢。為了獲得較高的提取率，并且提高提取效率，本研究選擇提取時間為2 h。

2.4 料水比對云芝糖肽提取率的影響

考察了提取云芝糖肽的過程中，不同料水比對云芝糖肽提取效果的影響。試驗結果表明：當料水比從1︰3遞增至1︰6時，云芝糖肽提取率隨著料水比的增加而增大；當料水比為1︰6時，提取率最高，為48.6 mg/g；當料水比繼續(xù)增大時，云芝糖肽提取率卻呈逐漸下降趨勢。為了獲得較高的提取率，并且降低濃縮工藝，本研究選擇料水比為1︰6。

2.5 提取次數對云芝糖肽提取率的影響

考察了提取次數對云芝糖肽提取率的影響。試驗結果表明：當提取次數為1次時，提取率約占總量的86.0%；當提取次數為2次時，提取率約占總量的96.7%；當提取次數為3次時，提取率約占總量的98.6%。繼續(xù)增加提取次數時，會消耗能源和成本，并增加后續(xù)工藝難度，故選擇提取次數為2次。

3 結論

本文建立了水提醇沉提取純化云芝糖肽的方法，研究發(fā)現：高壓均質法破碎云芝菌絲體比勻漿法處理效果好；水提醇沉提取工藝最佳條件為：料水比1︰6，提取溫度80 ℃，提取時間2 h，提取次數2次。

[1]李巖,周藝,楊鳳瓊,等.一種云芝糖肽的提取及分級提純工藝：CN 104262503A[P].2015-01-07.