（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站青海西寧812100）

一例由污染飼料引發(fā)雛雞沙門氏菌病的診治

談明祿

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站青海西寧812100）

目前雞沙門氏菌病是危害現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)最常見的細(xì)菌性、急慢性傳染病之一。該病的病原菌沙門氏菌血清型眾多，地域差別較大，廣泛存在于自然界和人畜腸道內(nèi)，對外界環(huán)境如日光、干燥等有較強(qiáng)的抵抗能力。禽類是其最主要的感染宿主，尤其是2周齡以內(nèi)的雛雞最為易感。臨床上根據(jù)沙門氏菌抗原結(jié)構(gòu)的不同，可將雞沙門氏菌病分為雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒三類。該病可經(jīng)水平傳播，也可經(jīng)種蛋進(jìn)行垂直傳播，因此一旦雞群發(fā)病，傳染性非常高，給養(yǎng)雞場造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)帶菌的雞蛋的流通也會(huì)嚴(yán)重危害人類健康，危害公共衛(wèi)生安全，因此必須加強(qiáng)沙門氏菌病的綜合防治工作。本文針對本地區(qū)某一養(yǎng)雞場內(nèi)一例疑似雞沙門氏菌病開展研究，根據(jù)臨床表現(xiàn)，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷，最終確診為沙門氏菌感染，現(xiàn)簡要匯報(bào)如下，以供參考。

1 發(fā)病情況

某養(yǎng)殖場13日齡雛雞群，突然出現(xiàn)精神萎靡，絨毛蓬松，不愿走動(dòng)，閉眼昏睡，縮頭頸，怕冷打寒顫，聚堆，拉白色稀薄如漿糊狀糞便等癥狀；部分發(fā)病雞迅速死亡；有的病雞因肛門部粘有稀便引起炎癥后疼痛，發(fā)出尖銳叫聲，多因呼吸困難或心力衰竭而死亡；隨著病程的進(jìn)展，病死率逐漸增加，平均每天死亡20~30只。經(jīng)調(diào)查，此次發(fā)病前雞場雞群均正常，但在飼喂新購入的飼料后，逐漸發(fā)病，懷疑飼料污染了沙門氏菌，因此在提取病死雞的同時(shí)，也采集了飼料樣本，一起進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。

2 剖檢

隨機(jī)采取病死雞20只，進(jìn)行剖檢。結(jié)果發(fā)現(xiàn)90%以上病死雞的肝臟、脾臟、腎臟血管出現(xiàn)嚴(yán)重充血，部分有心包炎等漿膜炎和甲狀腺增生癥狀。初步診斷為沙門氏菌感染，無菌條件下采取死雞的肝臟等病變組織器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 試劑及設(shè)備

麥康凱培養(yǎng)基、細(xì)菌DNA提取試劑盒、常規(guī)藥敏片、細(xì)菌生化反應(yīng)管、顯微鏡、接種環(huán)、PCR儀、37℃恒溫箱。

3.2 試驗(yàn)方法

3.2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)和形態(tài)鑒定將送檢肝臟等病料組織及飼料無菌條件下接種到麥康凱培養(yǎng)基上，經(jīng)過37℃環(huán)境中培養(yǎng)24h后，麥康凱培養(yǎng)基上均出現(xiàn)有小米粒大小、淡黃色菌落。將菌落涂片革蘭氏染色后，進(jìn)行鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)，可見革蘭氏陰性菌短小桿菌。

3.2.2 PCR鑒定純化后的病料分離菌落培養(yǎng)后，應(yīng)用細(xì)菌DNA提取試劑盒提取基因組，-20℃保存?zhèn)溆?。根?jù)當(dāng)?shù)厣抽T氏菌的流行株設(shè)計(jì)一對PCR引物：上游引物-CAGGATACCTATAGTGCTGC,下游引物-CGCACCGTCAAAGGAACCGT，目的片段大小為580bp。

PCR反應(yīng)體系：PCRMIX12.5μL，DNA0.5 μL，上下游引物各0.5μL，補(bǔ)H2O至總體積25 μL。

PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。擴(kuò)展結(jié)束后，PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果顯示擴(kuò)增的目的片段與預(yù)期的大小一致（見圖1）。

圖1 PCR鑒定結(jié)果

3.2.3 生化試驗(yàn)將純化好的分離細(xì)菌接種沙門氏菌到常用的細(xì)菌生化反應(yīng)管進(jìn)行鑒定，包括麥芽糖、甘露醇、葡萄糖、吲哚、色氨酸、枸櫞酸銨鹽、尿素、氨基酸對照、硫化氫等生化試驗(yàn)，結(jié)果均符合沙門氏菌的生化特性。

3.2.4 藥敏試驗(yàn)將分離菌株均勻涂布接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，并將常用的7種藥物的藥敏片（包括氨芐西林、粘桿菌素、阿莫西林、環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素、硫酸頭孢噻呋、林可霉素）等距離貼在涂好菌的平板上，后將平板置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明：分離菌對硫酸頭孢噻呋高度敏感，對環(huán)丙沙星、氟苯尼考、氨芐西林、粘桿菌素中敏，其它藥物呈低度敏感或耐藥。

4 治療

根據(jù)臨床癥狀、剖檢結(jié)果及實(shí)驗(yàn)室診斷，最終確診為該雞場感染了沙門氏菌，參考實(shí)驗(yàn)室的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選用中高敏藥物制定有效治療方案：按照氨芐西林1g加入到2L飲用水中的比例，讓雞群自由飲用，同時(shí)配合氟苯尼考1g添加到1.5L飲用水中的比例飲用，連用5~7d。用藥后病情明顯好轉(zhuǎn)，食欲逐漸恢復(fù)，病死率逐漸下降，到第四天沒有病死雞出現(xiàn)，治療結(jié)果明顯。

5 小結(jié)

經(jīng)調(diào)查此次發(fā)生疫病的雞場，發(fā)現(xiàn)該雞場日常管理較為嚴(yán)格，每天都及時(shí)清理污水糞便，養(yǎng)殖場內(nèi)外也經(jīng)常消毒凈化，雛雞和種蛋也從正規(guī)的廠家引進(jìn)，且在發(fā)病前雞群均健康無病。更新飼料后不久陸續(xù)出現(xiàn)了發(fā)病及死亡病例，且疫情逐漸加重，實(shí)驗(yàn)室檢測也從飼料中檢測出了沙門氏菌，因此此次疫情是由于雞群食用了污染沙門氏菌的飼料而引發(fā)的。確診后，相關(guān)獸醫(yī)人員和養(yǎng)殖人員及時(shí)治療，調(diào)整飼料，使疫情得到了有效的控制，現(xiàn)已恢復(fù)正常。因該雞場以往的凈化程度較高，日常飼養(yǎng)管理水平較高及發(fā)病后及時(shí)治療，所以并沒有造成太大的經(jīng)濟(jì)損失。

近年來隨著現(xiàn)代飼養(yǎng)規(guī)模和技術(shù)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖場內(nèi)飼養(yǎng)密度逐漸加大，雞群極易感染各種細(xì)菌，因此現(xiàn)代的養(yǎng)殖模式對雞的飼養(yǎng)環(huán)境和生物安全等方面提出了新的、更高的要求，尤其是目前疫病的混合感染是禽病流行中的主要趨勢，一旦發(fā)病，病死率極高，很容易造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。很多養(yǎng)殖單位在防治疫病的過程中盲目用藥，隨意在治療中或飼料飲水中添加抗菌藥物，由此導(dǎo)致了大量耐藥菌株的出現(xiàn)，尤其是沙門氏菌血清型種類眾多，且不同菌株間不產(chǎn)生交叉保護(hù)作用，因此極易出現(xiàn)對抗生素的耐藥性，且多重耐藥現(xiàn)象極為嚴(yán)重。沙門氏菌是危害畜禽健康養(yǎng)殖的病原菌之一，沙門氏菌病全年均可發(fā)生，同時(shí)該菌因污染人類食品主要包括禽肉類和蛋類等，進(jìn)而導(dǎo)致食源性疾病的問題也是不容小視的，因此加強(qiáng)對沙門氏菌病的綜合防控與流行病學(xué)調(diào)查具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義?！?/p>

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.048

談明祿(1982-)，男，漢族，本科，助理獸醫(yī)師，研究方向：獸醫(yī)臨床。