孫 樂，賀震旦，楊潤梅，高南南，許利嘉，金 文

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室，北京 100193；2. 深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，廣東 深圳 518060)

粗壯女貞總苷降脂作用及其基于AMPK通路的降脂作用機制研究

孫 樂1，賀震旦2，楊潤梅1，高南南1，許利嘉1，金 文1

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室，北京 100193；2. 深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，廣東 深圳 518060)

目的 探討粗壯女貞總苷(total phenylpropanoid glycoside from CN, CNTG)降脂作用及其基于AMPK通路的降脂作用機制。方法 Syrian金黃地鼠隨機分為正常組、高脂模型組、陽性藥非諾貝特組及CNTG高、中、低劑量組。除正常組外，其余各組地鼠應(yīng)用高脂飼料誘導(dǎo)建立混合型高脂血癥模型。造模1周后取血，檢測血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C含量，確定模型形成。之后連續(xù)給藥4周，在給藥2周、3周及4周后分別取血，檢測血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C的含量。在給藥4周后剖取肝臟，進行肝臟TG、TC含量測定和肝臟病理學(xué)檢測。并應(yīng)用實時定量PCR檢測CNTG對肝臟中AMPK、CD36、CPT1、ACC的mRNA表達的影響；用Western blot法檢測AMPK和其上游調(diào)控蛋白LKB1的磷酸化蛋白和總蛋白水平，并檢測HMG-CoA還原酶的蛋白表達量。結(jié)果 給藥2周、3周、4周后，與模型組相比，CNTG高劑量組血清中的TC、TG、LDL-C含量均明顯降低(P<0.05，P<0.01)；肝臟中TC、TG含量明顯降低(P<0.01)；并可明顯減輕肝細胞病變。實時定量PCR結(jié)果顯示，與模型組相比，CNTG可以明顯升高AMPK的相對表達量(P<0.01)，但CD36、ACC和CPT1的相對表達量無明顯變化。Western blot結(jié)果顯示，與模型組相比，CNTG高劑量組肝臟中的LKB1、phospho-LKB1及phospho-AMPKα的相對表達量均提高(P<0.05)，差異具有顯著性。結(jié)論 CNTG能有效降低高脂血癥金黃地鼠的血脂和肝脂水平，其機制可能是CNTG促進肝臟中LKB1磷酸化以激活A(yù)MPK,從而調(diào)控機體脂質(zhì)代謝。

粗壯女貞總苷；高脂血癥；降脂； AMPK；LKB1；磷酸化

隨著經(jīng)濟的迅猛發(fā)展和人們生活方式的改變，心腦血管疾病已成為影響身體健康的頭號殺手。2015年衛(wèi)計委公布的《中國心血管病報告》顯示，2014年中國心血管疾病死亡率居首位，超過腫瘤成為對人們健康最具威脅性的病種[1]。大量研究資料表明，高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死等心腦血管疾病獨立而重要的危險因素，因此降低血脂、改善血脂異常的臨床治療是降低心腦血管病發(fā)生率和死亡率的至關(guān)重要的措施[2]。近年來，從天然產(chǎn)物中尋找具有降血脂潛能的新化合物已經(jīng)成為研究的熱點。粗壯女貞[Ligustrumrobustum(Roxb.) Blume，CN]是我國西南地區(qū)苦丁茶的主要基源植物之一，在我國擁有悠久的飲用歷史，以茶劑的形式廣泛用于高血壓、高血脂和肥胖人群。粗壯女貞總苷(total phenylpropanoid glycoside from CN, CNTG)是從粗壯女貞老葉中提取制備的以阿克苷為主要成分的水溶性苯丙素苷類成分，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CNTG對高脂飲食誘導(dǎo)的C57BL/6J肥胖小鼠有明顯的減肥降脂作用，其機制可能與CNTG上調(diào)瘦素基因有關(guān)[3]。但目前對于CNTG降血脂的機制研究報道較少，因此本實驗應(yīng)用較好模擬人類高脂血癥發(fā)病過程的金黃地鼠高脂血癥模型，在科學(xué)評價CNTG降脂作用的基礎(chǔ)上，深入探討其基于腺苷酸(AMP)活化的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)信號通路的降脂作用機制，為其治療高脂血癥的作用特點和優(yōu)勢提供科學(xué)的實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Syrian金黃地鼠，♂，6～8周齡，體質(zhì)量90～110 g，購自北京維通利華實驗動物中心，許可證號： SCXK(京)2012-0001。金黃地鼠常規(guī)飼料和高脂飼料，均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證：SCXK(京)2014-0008。常規(guī)飼料可以滿足金黃地鼠所有的營養(yǎng)需求。金黃地鼠在SPF級環(huán)境中飼養(yǎng)[許可證號SYXK(京)2013-0023]，溫度(22.0±2.0)℃，濕度50%～70%，10只/籠，12 h晝夜交替，定量給予常規(guī)飼料或高脂飼料，自由飲水。

1.1.2 藥物與試劑 CNTG是從苦丁茶基源植物粗壯女貞的干燥樹葉中提取的水溶性總苯丙素苷，由深圳大學(xué)賀震旦教授課題組制備提供。非諾貝特膠囊由法國利博福尼制藥公司生產(chǎn)，批號23378。血清總膽固醇(total cholesterol, TC)批號141281、甘油三酯 (triglyceride, TG)批號150821、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)批號150781、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)批號150691、肝臟TC批號151841、肝臟TG批號157201，以上測定試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT Reagent Kit、實時定量PCR試劑盒SYBR PrimeScript Ex TaqⅡ，均購自TaKaRa寶生物工程有限公司。組織總蛋白抽提試劑盒、BCA法蛋白定量試劑盒、ECL高靈敏度化學(xué)發(fā)光試劑盒，均購自北京康為世紀生物科技有限公司。磷酸化腺苷酸AMP活化的蛋白激酶α(phospho-AMP-activated protein kinase α，phospho-AMPKα)抗體、AMPKα抗體、肝激酶B1(liver kinase B1，LKB1)抗體、磷酸化肝激酶B1(phospho-liver kinase B1，phospho-LKB1)抗體、β-肌動蛋白(β-actin)抗體均購自美國Cell Signaling Technology公司；羥甲基戊二酸單酰輔酶A(hydroxy methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶抗體購自美國ABclonal公司。山羊抗鼠IgG、山羊抗兔IgG均購自北京康為世紀生物科技有限公司。

1.1.3 儀器 貝克曼AU480全自動生化分析系統(tǒng)；美國FLUKO F6/10超細勻漿器；美國Bio-TEK微孔板掃描分光光度計(MQX200)；上海安亭TGL-16G型臺式高速離心機；CFX96熒光定量PCR儀、Chemi Doc凝膠成像系統(tǒng)、電泳儀、半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，均為美國Bio-Rad公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 動物及處理 60只Syrian金黃地鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。第2周起，根據(jù)體質(zhì)量隨機分為6組：正常對照組、模型組、陽性對照組(非諾貝特fenofibrate, 150 mg·kg-1)、CNTG低劑量(300 mg·kg-1)、中劑量(600 mg·kg-1)和高劑量組(1 200 mg·kg-1)，每組10只。正常對照組喂飼基礎(chǔ)飼料，其他各組喂飼高脂飼料。1周后，測定各組金黃地鼠的血脂水平(TC、TG、LDL-C、HDL-C)，確定模型成立。各造模組根據(jù)血脂結(jié)果進行組間調(diào)整，使模型組和各給藥組地鼠血脂水平無組間差異。陽性藥對照組和實驗組各組分別灌胃一定劑量的非諾貝特和相應(yīng)劑量的CNTG(10 mL·kg-1)，連續(xù)給藥4周。正常對照組和模型組分別灌胃等體積的蒸餾水。每周測體重。末次給藥后禁食不禁水12 h，麻醉眼眶取血，分離血清(15 min, 3 500 r·min-1, 4℃)，測定生化指標(TC、TG、LDL-C、HDL-C)；取部分肝臟組織制備肝勻漿，測定肝臟脂質(zhì)(TC、TG)含量；另取部分肝臟組織以10%甲醛固定，供病理學(xué)檢測。將余下的肝臟組織迅速投入液氮中，保存于-80℃冰箱，待測。

1.2.2 實時定量PCR 取金黃地鼠正常組、模型組和CNTG高劑量組的肝臟組織樣品，用TRIzol法提取總RNA，用Nano Drop測定總RNA的濃度和純度。反轉(zhuǎn)錄按照試劑盒Prime Script RT Reagent Kit說明設(shè)置20 μL反應(yīng)體系：4 μL 5×Prime Script buffer，1 μL Prime Script RT Enzyme Mix，50 pmol Oligo dT Primer，100 pmol Random 6 mers，1 000 ng 總RNA，11.5 μL RNase Free dH2O。反轉(zhuǎn)錄流程為：37 ℃反應(yīng)15 min，85 ℃滅活5 s，所得產(chǎn)物保存于-20 ℃?zhèn)溆谩崟r定量PCR參照試劑盒SYBR Prime Script Ex TaqⅡ說明設(shè)置20 μL反應(yīng)體系：10 μL SYBR Prime Script Ex TaqⅡ，1.2 μL目的基因引物，2 μL cDNA模板，加入滅菌蒸餾水至20 μL。PCR反應(yīng)條件如下：95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，使用REST 2009軟件計算各目的基因的相對表達量，檢測的目的基因及引物序列見Tab 1[4-7]。

Tab1 Primer sequences for target genes

1.2.3 Western blot法檢測肝臟中蛋白的表達 稱取(0.10±0.02) g肝臟組織，加入1 mL組織蛋白抽提液，10 000 r·min-1勻漿處理；冰上孵育20 min，10 000×g離心20 min，收集上清；按照試劑盒說明書，利用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度。將50 μg蛋白樣品于10%的SDS-PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至PVDF膜。PVDF膜放入5%的脫脂牛奶中，于室溫搖床封閉2 h。分別加入一抗phospho-AMPKα(1 ∶1 000)、AMPKα(1 ∶1 000)、phospho-LKB1(1 ∶1 000)、LKB1(1 ∶1 000)、HMG-CoA還原酶(1 ∶1 000)、β-actin(1 ∶4 000)4 ℃過夜。TBST洗3次，辣根過氧化酶HRP標記的二抗孵育，室溫1 h，TBST洗3次。采用ECL試劑盒進行顯色反應(yīng)，并利用Bio-Rad圖像分析軟件進行分析。

2 結(jié)果

2.1 金黃地鼠體質(zhì)量 高脂飼料誘導(dǎo)期間，各組金黃地鼠活動正常。給藥期間，與正常組相比，模型組體重明顯升高。給藥2周、3周、4周后，與模型組相比，陽性組和CNTG高劑量組體重明顯降低。給藥期間各組金黃地鼠體重見Tab 2。

2.2 CNTG對高脂血癥金黃地鼠血脂的影響

2.2.1 給藥前金黃地鼠血脂水平變化 1周后，各造模組地鼠與正常對照組比較， 血清TC、TG、LDL-C均明顯升高(P<0.01)，差異有顯著性，表明高脂血癥金黃地鼠模型成功。見Tab 3。

2.2.2 給藥2周后金黃地鼠血脂水平變化 給藥2周后，與正常組相比，模型組金黃地鼠血清中TC、TG、LDL-C均明顯升高，差異有顯著性。與模型組相比，CNTG高劑量可明顯降低高脂誘導(dǎo)的金黃地鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量(P<0.05，P<0.01)。見Tab 4。

2.2.3 給藥3周金黃地鼠血脂水平變化 給藥3周后，與正常組相比，模型組金黃地鼠血清中TC、TG、LDL-C均持續(xù)明顯升高，差異有顯著性。與模型組相比，CNTG高劑量可以明顯降低TC、TG和LDL-C(P<0.01)，但CNTG低、中劑量組對模型組TC、TG和LDL-C的含量沒有明顯影響。見Tab 5。

2.2.4 給藥4周金黃地鼠血脂水平變化 給藥4周后，與正常組相比，模型組金黃地鼠血清中TC、TG、LDL-C均持續(xù)明顯升高，差異有顯著性。與模型組相比，CNTG高劑量可以明顯降低LDL-C、TC(P<0.05)和TG(P<0.01)，但CNTG低、中劑量組對模型組TC、TG和LDL-C的含量沒有明顯影響。見Tab 6。

2.3 各組金黃地鼠肝脂水平 實驗結(jié)束時，模型組金黃地鼠與正常對照組比較，肝臟中TC、TG均明顯升高，差異有顯著性(P<0.01)。給藥4周后，CNTG對模型金黃地鼠肝臟TC和TG有明顯降低作用，差異有顯著性，見Tab 7。

Tab 2 Body weight of Syrian hamster(±s，n=10，g)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

Tab 3 Serum lipid level of hamsters before administration of CNTG(±s，n=10)

**P<0.01vscontrol

Tab 4 Effect of CNTG on serum lipid level of hamsters in the 2nd week(±s，n=10)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

Tab 5 Effect of CNTG on serum lipid level of hamsters in the 3rd week(±s，n=10)

**P<0.01vscontrol;##P<0.01vsmodel

Tab 6 Effect of CNTG on serum lipid level of hamsters in the 4th week(±s，n=10)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

Tab 7 Effect of CNTG on hepatic triglyceride(TG),total cholesterol(TC) concentrations in hyperlipidemic hamsters(±s，n=10)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

2.4 各組金黃地鼠肝臟病理檢測結(jié)果 實驗結(jié)束時，正常組肝臟未見明顯病理改變。模型組肝臟出現(xiàn)9例(9/10)肝細胞腫脹，5例中度病變，4例輕度病變；1例(1/10)少量纖維組織增生。給藥4周后，陽性藥和CNTG對高血脂金黃地鼠肝細胞病變具有明顯的減輕效果。CNTG低劑量組出現(xiàn)9例(9/10)肝細胞腫脹，1例中度病變，8例輕度病變；1例(1/10)卵圓細胞增生；1例(1/10)灶性肝細胞壞死伴炎細胞浸潤。CNTG中劑量組：7例(7/10)肝細胞腫脹，3例中度病變，4例輕度病變；2例(2/10)卵圓細胞增生；1例(1/10)小灶性炎細胞浸潤。CNTG高劑量組出現(xiàn)6例(6/10)肝細胞腫脹，均為輕度病變；1例(1/10)多灶性炎細胞浸潤。見Fig 1。

2.5 CNTG對金黃地鼠肝臟AMPK、ACC、CD36 和CPT1 mRNA表達的影響 實時定量PCR結(jié)果如Fig 2所示，與正常組和模型組相比，CNTG高劑量組AMPK的mRNA相對表達量明顯升高(P<0.01)；與正常組相比，模型組乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase 1, ACC)的mRNA相對表達量明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而CD36和肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(carnitine palmitoyl transterase-1, CPT1)的mRNA相對表達量在各組別中無明顯差異。

Fig 1 Representative photomicrographs of histopathological studies of livers stained with haematoxylin and eosin(HE，×100)

A: Control; B: Model; C: Fenofibrate; D: CNTG 300 mg·kg-1; E: CNTG 600 mg·kg-1; F: CNTG 1 200 mg·kg-1

2.6 CNTG對金黃地鼠肝臟AMPKα、LKB1和HMG-CoA還原酶表達水平的影響 Western blot檢測金黃地鼠肝臟中AMPKα、phospho-AMPKα、LKB1、phospho-LKB1和HMG-CoA還原酶(HMG-CoAR)蛋白表達水平。利用Image-J對條帶進行分析，將灰度值量化，以內(nèi)參β-actin校正后得到各目的蛋白表達的相對值。如Fig 3所示，與模型組相比，CNTG高劑量組的phospho-AMPKα、LKB1和 phospho-LKB1的相對表達量明顯升高(P<0.05)；與正常組相比，模型組HMG-CoAR的相對表達量明顯升高(P<0.01)；AMPKα的相對表達量沒有明顯變化。

Fig 2 Effects of CNTG on the hepatic CD36, ACC,CPT1, AMPK mRNA expressions in hamsters(±s, n=10)

*P<0.05vscontrol;##P<0.01vsmodel

Fig 3 Effects of CNTG on hepatic AMPKα,phospho-AMPKα,LKB1, phospho-LKB1 and HMG-CoAR protein levels in hamsters(±s,n=10)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05vsmodel

3 討論

在本研究中，我們應(yīng)用金黃地鼠高脂血癥模型評價了CNTG的降脂活性，并探討了其基于AMPK信號通路的降脂作用機制。金黃地鼠具有和人類相似的血漿脂蛋白構(gòu)成，能夠很好地模擬人類高脂血癥的發(fā)病過程和機制[8-9]。經(jīng)過高脂飼料誘導(dǎo)后，金黃地鼠的血清TC、TG、LDL-C水平明顯升高，肝細胞腫脹病變，形成了具有典型高脂血癥特征的混合型高脂血癥模型。CNTG連續(xù)給藥2～4周可明顯降低高脂血癥金黃地鼠血脂(TG、TC、LDL-C)水平，給藥4周后還可明顯降低肝脂(TG、TC)水平，并減輕地鼠肝細胞病變，進一步機制研究發(fā)現(xiàn)CNTG可激活金黃地鼠肝臟AMPKα和LKB1的表達。

AMPK是一種在真核細胞中高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，能夠調(diào)節(jié)機體的能量代謝，維持能量的平衡，與糖尿病、高脂血癥、肥胖等多種由能量代謝異常引起的疾病相關(guān)。不同物種的AMPK蛋白都是一種異源三聚體復(fù)合物，包括1個α催化亞基，1個β調(diào)節(jié)亞基和1個γ調(diào)節(jié)亞基[10]。AMPK的激活機制多樣，上游激酶對AMPKα亞基活化環(huán)上Thr172進行磷酸化、AMP/ATP或ADP/ATP比值升高以及運動肌肉收縮等生理刺激均可以激活A(yù)MPK。在肝臟中最主要的磷酸化激活A(yù)MPK信號通路是LKB1-AMPK通路[11]。LKB1通過促進AMPK α亞基上Thr172位點的磷酸化，增強AMPK的磷酸化水平，從而激活A(yù)MPK[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，高劑量CNTG上調(diào)了金黃地鼠肝臟AMPK的mRNA表達水平，以及肝臟LKB1、phospho-LKB1和 phospho-AMPKα的蛋白表達水平。表明CNTG通過LKB1-AMPK通路促進AMPK的磷酸化。

AMPK磷酸化后通過多條信號通路對機體脂質(zhì)代謝發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，主要包括：通過促進CD36和LPL的轉(zhuǎn)運，增加脂肪酸攝入；通過磷酸化抑制ACC1，抑制脂肪酸的合成，同時磷酸化抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(sterol regulation element binding protein-1c，SREBP-1c)，在轉(zhuǎn)錄水平抑制脂肪酸和TG合成相關(guān)酶的表達；磷酸化抑制HMG-CoA還原酶，進而抑制膽固醇的合成；通過抑制ACC2，使CPT1活化，從而促進脂肪酸進入線粒體進行β氧化等[13-14]。前期研究已發(fā)現(xiàn)，CNTG能通過磷酸化作用抑制SREBP-1c的活性，在轉(zhuǎn)錄水平抑制其下游的脂肪酸和TG合成酶的表達。而本研究結(jié)果顯示，CNTG對金黃地鼠肝臟CD36、ACC、CPT1以及HMG-CoA 還原酶的表達量都無明顯調(diào)節(jié)作用，表明CNTG激活A(yù)MPK后并不能通過AMPK-CD36、AMPK-ACC、AMPK-HMG-CoA還原酶通路對肝臟脂肪酸攝入、氧化以及膽固醇合成等產(chǎn)生影響。

綜上所述，CNTG能有效降低高脂血癥金黃地鼠的血脂和肝脂水平，并能明顯改善地鼠肝臟病變。機制研究表明，CNTG能促進地鼠肝臟中LKB1磷酸化從而激活A(yù)MPK，而對下游的AMPK-CD36、AMPK-ACC、AMPK-HMG-CoA還原酶通路無明顯影響。本研究闡明了CNTG磷酸化AMPK的機制，以及其基于AMPK信號通路的降脂作用機制，為其深度開發(fā)和充分利用提供了科學(xué)的實驗數(shù)據(jù)。

(致謝：本實驗在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室完成，感謝實驗室老師和同學(xué)們給予的幫助和指導(dǎo)！)

[1] 隋 輝,陳偉偉,王 文. 《中國心血管病報告2015》要點解讀[J].中國心血管雜志, 2016,21(4):259-61.

[1] Sui H, Chen W W, Wang W. Interpretation of report on cardiovascular diseases in China(2015)[J].ChinJCardiovascMed, 2016, 21(4): 259-61.

[2] Zoungas S, Curtis A J, McNeil J J, et al. Treatment of dyslipidemia and cardiovascular outcomes: the journey so far-is this the end for statins[J]?ClinPharmacolTher, 2014, 96(2): 192-205.

[3] Yang R M, Liu F, He Z D, et al. Anti-obesity effect of total phenylpropanoid glycosides fromLigustrumrobustumBlume in fatty diet-fed mice via up-regulating leptin[J].JEthnopharmacol, 2015, 169: 459-65.

[4] Qin B, Dawson H, Anderson R A. Elevation of tumor necrosis factor-alpha induces the overproduction of postprandial intestinal apolipoprotein B48-containing very low-density lipoprotein particles: evidence for related gene expression of inflammatory, insulin and lipoprotein signaling in enterocytes[J].ExpBiolMed(Maywood), 2010, 235(2): 199-205.

[5] Zabala A, Churruca I, Fernández-Quintela A, et al. Trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid inhibits lipoprotein lipase but increases the activity of lipogenic enzymes in adipose tissue from hamsters fed an atherogenic diet[J].BrJNutr, 2006, 95(6): 1112-9.

[6] Singh V, Rana M, Jain M, et al. Curcuma oil attenuates accelerated atherosclerosis and macrophage foam-cell formation by modulating genes involved in plaque stability, lipid homeostasis and inflammation[J].BrJNutr, 2015, 113(1): 100-13.

[7] Guo F, Huang C, Liao X, et al. Beneficial effects of mangiferin on hyperlipidemia in high-fat-fed hamsters[J].MolNutrFoodRes, 2011, 55(12): 1809-18.

[8] 康卓穎, 初欣欣, 楊潤梅, 等. 金黃地鼠高脂血癥模型膽固醇代謝紊亂的生物標志物的研究[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2014, 30(6): 880-3.

[8] Kang Z Y, Chu X X, Yang R M, et al. Biomarkers of hyperlipidemia cholesterol metabolism in hamster[J].ChinPharmacolBull, 2014, 30(6): 880-3.

[9] 初欣欣, 楊潤梅, 于 瑩, 等. 金黃地鼠高脂血癥模型甘油三酯代謝紊亂的生物標志物的研究[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2014, 30(7): 1012-7.

[9] Chu X X, Yang R M, Yu Y, et al. Triglyceride disorder biomakers in hyperlipidemic hamsters[J].ChinPharmacolBull, 2014, 30(7): 1012-7.

[10]Hardie D G. AMPK-sensing energy while talking to other signaling pathways[J].CellMetab, 2014, 20(6): 939-52.

[11]Carling D, Sanders M J, Woods A. The regulation of AMP-activated protein kinase by upstream kinases[J].IntJObes(Lond), 2008, 32(Suppl 4): S55-9.

[12]Sanders M J, Grondin P O, Hegarty B D, et al. Investigating the mechanism for AMP activation of the AMP-activated protein kinase cascade[J].BiochemJ, 2007, 403(1): 139-48.

[13]Ruderman N B, Carling D, Prentki M, et al. AMPK, insulin resistance, and the metabolic syndrome[J].JClinInvest, 2013, 123(7): 2764-72.

[14]耿雅娜, 于 濱, 孔維佳. 天麻素通過激活 AMPK 通路減少油酸誘導(dǎo)的 HL-7702 細胞脂肪蓄積[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2015, 31(1): 39-44.

[14]Geng Y N, Yu B, Kong W J. Gastrodin ameliorates oleic acid-induced fat accumulation through activation of AMPK pathway in HL-7702 cells[J].ChinPharmacolBull, 2015, 31(1): 39-44.

Hypolipidemic activity of total phenylpropanoid glycosides fromLigustrumrobustum(Roxb.) Blume and its mechanisms on AMPK pathway

SUN Le1, HE Zhen-dan2, YANG Run-mei1, GAO Nan-nan1, XU Li-jia1, JIN Wen1
(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciences,PekingUnionMedicalCollege,KeyLabofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine,MinistryofEducation,Beijing100193,China；2.DeptofPharmacy,SchoolofMedicine,ShenzhenUniversity,ShenzhenGuangdong518060,China)

Aim To evaluate the hypolipidemic effect of total phenylpropanoid glycoside extracted fromLigustrumrobustum(Roxb.) Blume(CNTG)and its mecha-nisms.Methods The 60 hamsters were randomly divided into six groups, namely the control group, the model group, the positive control group(fenofibrate, 150 mg·kg-1), the high(1 200 mg·kg-1), medium(600 mg·kg-1) and low(300 mg·kg-1) doses of CNTG groups. Only the control group was given control diet and other groups

high-fat diet. The changes of serum lipid were measured and analyzed in 1st week to ensure the successful establishment of the model. The drugs were administered daily for four weeks and the concentrations of lipids were determined in the 2nd week, 3rd week and 4th week respectively. Quantitative real-time PCR and Western blot were used to assay the mRNA and protein expression of related signaling enzymes and proteins.Results Compared with the model group, the concentrations of serum TG, TC, LDL-C(P<0.05,P<0.01) and hepatic TG, TC(P<0.01) were effectively reduced in hamsters in CNTG-treated groups. Mechanism research found that CNTG increased the levels of phospho-AMPKα, LKB1 and phospho-LKB1 in liver(P<0.05).Conclusion CNTG prevents hyperlipidemia via activation of hepatic LKB1-AMPK pathway.

total phenylpropanoid glycoside fromLigustrumrobustum(Roxb.) Blume (CNTG); hyperlipidemia; hypolipidemic; AMPK; LKB1;phosphorylation

2017-04-10,

2017-05-21

協(xié)和青年科研基金資助項目(No 3332015142)；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程經(jīng)費資助(No 2016-I2M-1-012)

孫 樂(1990-)，女，碩士生，研究方向：中藥藥理學(xué)，E-mail：nicolelesun@outlook.com； 楊潤梅(1981-)，女，碩士，副研究員，研究方向：中藥心腦血管藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：rmyang@implad.ac.cn

時間：2017-7-7 11:04 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.016.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.008

A

1001-1978(2017)08-1073-07

R-332；R284.1；R322.47；R589.202.2；R972.6；R977.3