張濤

摘 要：2012年7月和8月份，我院監(jiān)測(cè)了遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村懷頭鯰養(yǎng)殖戶的5個(gè)患有爛鰓病的池塘和3個(gè)未發(fā)病的池塘的水溫、DO、pH、NH+4-N和NO-2-N含量；并采病魚樣品20尾，正常魚樣品6尾，用以探討水環(huán)境與懷頭鯰組織病理的關(guān)系。結(jié)果表明：當(dāng)氨氮、亞硝酸鹽氮分別超出正常養(yǎng)殖水體指標(biāo)0.5mg/L和0.02mg/L時(shí)，并積累一段時(shí)間后，鰓小片呼吸上皮細(xì)胞增生、腫脹，鰓小片毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血。

關(guān)鍵詞：水環(huán)境；懷頭鯰；爛鰓病；組織病理

懷頭鯰（Silurus soldatovi）別名黑龍江六須鯰、懷子鯰， 在魚類分類上隸屬于鯰形目（Siluriformes）、鯰科（Siluridae）、鯰屬（Silurus），主要分布于我國(guó)的松花江、烏蘇里江、嫩江等江河，是黑龍江地產(chǎn)魚類，適應(yīng)水環(huán)境能力較強(qiáng)。懷頭鯰肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，生長(zhǎng)速度快，起捕率高，容易飼養(yǎng)，因此其市場(chǎng)前景廣闊。

近年來(lái)，由于淡水養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，管理問(wèn)題的難度加大，我國(guó)部分省、市漁業(yè)地區(qū)相繼爆發(fā)了懷頭鯰爛鰓病，給我國(guó)的漁業(yè)生產(chǎn)者帶來(lái)了極大的經(jīng)濟(jì)損失，因此受到水產(chǎn)工作者的密切關(guān)注。2016年7月起，遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村發(fā)生人工養(yǎng)殖懷頭鯰大面積死亡；為查明病因，本文從主要水環(huán)境因子對(duì)魚體各組織功能影響方面進(jìn)行了探究。

1 材料和方法

1.1 材料來(lái)源

2016年7月至2016年8月期間，分別對(duì)遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村懷頭鯰養(yǎng)殖戶的5個(gè)患有爛鰓病的池塘和3個(gè)未發(fā)病的池塘進(jìn)行了魚體采樣與水質(zhì)監(jiān)測(cè)。魚體經(jīng)過(guò)鏡檢，未發(fā)現(xiàn)寄生蟲。

1.2 水質(zhì)分析

氨態(tài)氮采用實(shí)驗(yàn)室Nessler法測(cè)定，亞硝酸態(tài)氮采用對(duì)氨基苯磺酸固體試劑分光光度計(jì)法測(cè)定，溶解氧采用碘量法測(cè)定[1]，pH值采用型號(hào)為梅特勒-托利多的FE20筆形pH計(jì)測(cè)定。

1.3 組織切片與觀察

取發(fā)病池塘中患有爛鰓癥狀的懷頭鯰以及未發(fā)病池塘中養(yǎng)殖健康的懷頭鯰；經(jīng)震蕩其頭部，使魚體處于昏厥狀態(tài)；再用清水沖洗，擦拭干凈后取魚體的鰓部組織塊（1 cm×1 cm×1 cm），用新鮮配制的波恩氏液[2]固定48 h后，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟（55～60 ℃）包埋。

切片厚度6 μm，再進(jìn)行蘇木精-曙紅（H.E）染色、中性樹膠封片，最后用E-CLIPSE E600顯微鏡觀察、拍照[3]。

1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

實(shí)驗(yàn)描述結(jié)果均值用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS17.0在a=0.05水平下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS17.0的一維方差分析中List比較和單一樣本t檢驗(yàn)，進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

從2016年7月起，遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村養(yǎng)殖戶的懷頭鯰相繼患有爛鰓病。發(fā)病池塘邊可見部分浮于水面的懷頭鯰，病魚具有溜邊、側(cè)翻現(xiàn)象，并且游動(dòng)緩慢。8月份起，發(fā)病池塘邊可見大量浮于水面的懷頭鯰，并見大量死魚。懷頭鯰患病率達(dá)70%以上，死亡率達(dá)20%以上。病魚的最顯著特征表現(xiàn)為鰓組織紅腫、充血，黏液分泌增多，同時(shí)上邊掛滿泥土；活體解剖后發(fā)現(xiàn)腸內(nèi)壁掛有淡黃色積液；病魚體表發(fā)紅，充血；肝臟腫大。

2.2 患病池塘與未患病池塘主要水環(huán)境因子結(jié)果分析

從表1可見7月份未患病池塘養(yǎng)殖水溫26.0 ℃左右，溶解氧均值在8 mg/L左右，pH均值為8.0上下，偏弱堿性，氨氮值小于0.5，亞硝酸鹽值小于0.02，這與淡水養(yǎng)殖水體的水化的指標(biāo)相符。7月份患病池塘溶解氧均值在5 mg/L左右，氨氮經(jīng)SPSS17.0的單一樣本t檢驗(yàn)，以淡水養(yǎng)殖水體正常值0.5為參考值，檢驗(yàn)（P>0.05）呈不顯著性差異。但均值大于正常淡水養(yǎng)殖水體值0.5，超出了正常養(yǎng)殖水體指標(biāo)；患病池塘亞硝酸鹽經(jīng)SPSS17.0的單一樣本t檢驗(yàn)，以淡水養(yǎng)殖水體正常值0.02為參考值，檢驗(yàn)（P>0.05）呈不顯著性差異。但均值大于正常養(yǎng)殖水體值0.02，超出了正常養(yǎng)殖水體指標(biāo)。

8月份未患病池塘養(yǎng)殖水溫30.0℃左右，溶解氧均值在9 mg/L左右，pH均值變化不大，偏弱堿性，氨氮值小于0.5，亞硝酸鹽值小于0.02，這符合淡水養(yǎng)殖水體的水化指標(biāo)。8月份患病池塘溶解氧均值4 mg/L左右，pH值變化不大，患病池塘氨氮、亞硝酸鹽經(jīng)SPSS17.0的單一樣本t檢驗(yàn)，以淡水養(yǎng)殖水體正常值0.5和0.02為參考值，檢驗(yàn)（P<0.05）均呈顯著性差異。其均值分別大于淡水養(yǎng)殖水體正常值0.5和0.02，超出了正常養(yǎng)殖水體指標(biāo)。

7、8月份同一患病池塘的氨氮、亞硝酸鹽分別經(jīng)過(guò)SPSS17.0一維方差分析中List比較，檢驗(yàn)（P<0.05）均呈顯著性差異；溶解氧經(jīng)過(guò)SPSS17.0一維方差分析中List比較，檢驗(yàn)（P>0.05）呈不顯著性差異。未患病池塘測(cè)定的主要水環(huán)境指標(biāo)值符合淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)要求。

2.3 鰓組織顯微病理變化

鰓與對(duì)照組比較（圖1-1），病魚鰓組織呼吸上皮細(xì)胞與相鄰的鰓小片呼吸上皮細(xì)胞形成增生性融合，呈板狀；并有許多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)其中（圖1-2）。部分鰓小片呼吸上皮細(xì)胞腫脹后，與毛細(xì)血管分離形成腔隙（圖1-3）。局部鰓小片末端膨脹成棒球狀，其間毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血（圖1-4）。

3 討論

患有爛鰓癥狀的病魚，鰓組織紅腫，黏液增多；從圖Ⅰ-2、3、4觀察可知，病魚鰓小片上皮細(xì)胞腫脹、增生，其間毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血，并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；病魚8月份發(fā)病率和死亡率均高于7月份。從表1數(shù)據(jù)結(jié)果分析：7、8月份患病池塘中的氨氮、亞硝酸鹽指標(biāo)測(cè)定值均大于淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)的正常值，而7、8月份氨氮、亞硝酸鹽指標(biāo)測(cè)定值顯著大于7月份（P<0.05）指標(biāo)測(cè)定值；同時(shí)7月份患病池塘溶解氧的指標(biāo)測(cè)定值在淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)的正常值5 mg/L左右， 8月份患病池塘溶解氧的指標(biāo)測(cè)定值小于淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)的正常值5 mg/L，兩者均小于未患病池塘的溶解氧指標(biāo)測(cè)定值。此外，通過(guò)表1數(shù)據(jù)可知，養(yǎng)殖水體pH值在8上下，呈弱堿性，這時(shí)水體中的氨氮主要以非離子態(tài)NH3-N的形式透過(guò)鰓組織的細(xì)胞膜；通過(guò)鰓細(xì)胞膜的NH3-N又以游離態(tài)NH4+-N進(jìn)入魚體血液中，其血液中的氨氮濃度隨之升高，并在高氨濃度下，魚體的血液輸氧能力大幅下降，此時(shí)魚體內(nèi)多種活性酶受到抑制，又因?yàn)槎嘤嗟膹U氮難以排除，最終導(dǎo)致氧氣和廢物交換不暢，從而破壞了魚類鰓組織。再者，當(dāng)亞硝酸鹽濃度高于淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)的正常值后，亞硝酸氮透過(guò)鰓組織細(xì)胞膜，并在血液中以游離態(tài)形式進(jìn)入魚體各組織細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，阻斷了其遺傳物質(zhì)的正常合成，細(xì)胞外間質(zhì)的遺傳物質(zhì)遭到降解，最終導(dǎo)致細(xì)胞外間質(zhì)消失[4]，進(jìn)一步加劇了魚體的發(fā)病率和死亡率。

病魚腸內(nèi)壁有淡黃色液體。由表1數(shù)據(jù)分析可知，7、8月份氨氮、亞硝酸鹽指標(biāo)測(cè)定值均高于淡水養(yǎng)殖水體指標(biāo)值，這將使魚體血液氨氮和亞硝酸鹽濃度增高，從而導(dǎo)致了腸組織細(xì)胞外間質(zhì)的降解，造成了腸組織上皮細(xì)胞的損壞；受損的組織成為某些細(xì)菌或病毒的營(yíng)養(yǎng)源，進(jìn)一步導(dǎo)致腸組織炎性細(xì)胞分泌增多，腸內(nèi)壁掛有積液，腸組織功能性失調(diào)。氨氮、亞硝酸對(duì)肝臟的影響與對(duì)腸組織作用機(jī)理類似，肝組織受損最終導(dǎo)致肝臟分泌與合成功能受到影響[5-9]。

病魚魚體發(fā)紅、充血。表1可知，患病池塘水溫在26～31 ℃之間，溶解氧均值長(zhǎng)期在5 mg/L左右，致使氨轉(zhuǎn)化為硝酸鹽過(guò)程受阻，亞硝酸鹽在水中聚積；聚積的亞硝酸將血液中的血紅蛋白轉(zhuǎn)化為高鐵血紅蛋白，從而使血液失去了輸送氧氣的能力；進(jìn)一步導(dǎo)致了魚體血紅細(xì)胞產(chǎn)生還原機(jī)制的障礙，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞核破裂與細(xì)胞膜受損導(dǎo)致的溶血、魚體發(fā)紅癥狀。

4 小結(jié)

本文通過(guò)對(duì)患有懷頭鯰爛鰓病池塘中水質(zhì)的監(jiān)測(cè)，來(lái)探討主要水環(huán)境因子對(duì)懷頭鯰爛鰓病的影響，并為懷頭鯰在今后的生產(chǎn)實(shí)踐防病過(guò)程提供一定的理論基礎(chǔ)。

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