李煌，馬黃璜，喬麗菲，孫承韜，徐偉，褚克丹

1.福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350122

栝樓桂枝滴丸質(zhì)量標準及體外溶出度研究

李煌1，馬黃璜2，喬麗菲1，孫承韜1，徐偉1，褚克丹1

1.福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350122

目的建立栝樓桂枝滴丸的質(zhì)量標準，并考察其體外溶出度。方法 采用 HPLC測定栝樓桂枝滴丸中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的含量，通過轉(zhuǎn)籃法測定其體外溶出度。結(jié)果 芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的含量分別在0.690～6.900 μg、0.300～2.996 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為101.12%、98.52%，RSD分別為2.24%、1.37%；肉桂酸的含量在0.023～0.348 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.21%，RSD＝2.00%；6-姜酚的含量在0.025～0.382 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.19%，RSD＝2.18%；甘草苷、甘草酸、甘草素的含量分別在0.120～2.498 μg、0.150～2.253 μg、0.010～0.147 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.80%、100.38%、100.62%，RSD分別為2.10%、1.91%、1.66%。滴丸中7種成分在15 min內(nèi)累積溶出率均達到98%以上。結(jié)論 本方法簡便、準確、重復性好，可用于栝樓桂枝滴丸的質(zhì)量控制，體外溶出度符合要求。

栝樓桂枝滴丸；質(zhì)量標準；體外溶出度

栝樓桂枝湯出自《金匱要略》，由栝樓、桂枝、白芍、生姜、大棗、甘草組成，具有解肌祛邪、舒緩筋脈功效[1]。本課題組前期開展了栝樓桂枝湯的動物、細胞水平相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)其具有良好的腦保護作用[2-7]，已申報為福建省第二人民醫(yī)院院內(nèi)制劑（2013S0001），并通過大孔樹脂對其進行精制純化，富集有效成分，制成栝樓桂枝滴丸。為有效控制該制劑的質(zhì)量和療效，本試驗對其進行質(zhì)量標準和體外溶出度研究。

1 儀器與試藥

U-3000型高效液相色譜儀（美國戴安公司），XS105型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），RCZ-6C1型藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器廠）。

栝樓桂枝滴丸，福建中醫(yī)藥大學藥學院中藥學重點實驗室制備；芍藥苷（批號110736-201539）、芍藥內(nèi)酯苷（批號 16021410）、肉桂酸（批號 110786-200503）、甘草苷（批號 111610-201106），中國食品藥品檢定研究院；6-姜酚（純度≥98%，批號PZ9M6R1）、甘草酸（純度≥98%，批號Z30A6B1）、甘草素（純度≥98%，批號ZMO314BD14），上海源葉生物科技有限公司；色譜級乙腈，德國默克公司；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件 DIKMA C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫（見表1），流速0.8 mL/min，柱溫30 ℃，進樣體積10 μL，檢測波長236 nm[8]。色譜圖見圖1。

表1 HPLC梯度洗脫程序（%）

圖1 栝樓桂枝滴丸中7種成分HPLC圖

2.1.2 線性關(guān)系考察 精密稱取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素對照品適量，甲醇溶解，配制成濃度分別為3.450 mg/mL、1.498 mg/mL、116 μg/mL、127 μg/mL、0.999 mg/mL、751 μg/mL、49 μg/mL的對照品貯備液。分別精密量取5 mL對照品貯備液至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，依次吸取2、5、8、10、15、20、25、30 μL對照品溶液注入高效液相色譜儀。以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程，見表2。

表2 7種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

2.1.3 供試品溶液的制備 取滴丸適量，研細，取細粉約0.5 g，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，超聲提?。üβ?00 W，頻率40 kHz）30 min，冷卻后用甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 精密度試驗 分別精密吸取同一對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件，重復進樣6次進行測定，測得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面積RSD分別為0.52%、0.76%、0.44%、0.61%、0.53%、0.57%和0.76%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8、12 h按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，測得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面積 RSD分別為1.16%、1.62%、1.54%、1.61%、1.96%、1.19%和1.75%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復性試驗 取 6個不同批次的滴丸，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，測得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面積RSD分別為1.29%、2.67%、2.38%、1.99%、1.62%、2.25%和1.81%，表明該方法重復性良好。

2.1.7 加樣回收率試驗 取滴丸，研成細粉，共 6份，每份約0.5 g，精密稱定，各精密加入對照品溶液適量，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，并計算加樣回收率，見表3。

表3 7種成分加樣回收率試驗

2.1.8 樣品含量測定 取 3批栝樓桂枝滴丸，分別按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品中7種成分含量測定結(jié)果（mg/丸）

2.2 體外溶出度測定

參照 2015年版《中華人民共和國藥典》四部通則0931，采用轉(zhuǎn)籃法測定。取滴丸適量，平行6份，以水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度（37±0.5）℃，依法測定，分別于1、2、5、8、10、15、20、25、30 min取樣5 mL（同時補充等量等溫溶出介質(zhì)），0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，按“2.1.1”項下色譜條件測定 7種成分的濃度，計算累積溶出率，繪制時間-累積溶出率曲線，見圖2。結(jié)果表明，栝樓桂枝滴丸7種成分在15 min內(nèi)累積溶出率均達到98%以上。

圖2 栝樓桂枝滴丸中7種成分體外溶出曲線

3 討論

現(xiàn)代藥理研究表明，芍藥苷可能通過改善缺血側(cè)大腦血流供應(yīng)、提高機體消除自由基能力等對缺血大腦產(chǎn)生神經(jīng)保護作用[8-9]；芍藥內(nèi)酯苷可透過血腦屏障進入腦組織，對腦缺血再灌注損傷的大鼠起到神經(jīng)保護作用[2]；肉桂酸為栝樓桂枝湯入血成分，提示其可能與復方在體內(nèi)抗腦卒中后肢體痙攣有一定關(guān)系[10]；6-姜酚可能通過抑制腦組織脂質(zhì)過氧化、抗血小板聚集等起到神經(jīng)保護作用[11-12]；甘草苷可能通過抑制髓過氧化物酶和細胞間黏附因子-1表達等抗腦缺血再灌注損傷[13]；甘草酸的腦保護作用可能是其抗炎、抗氧化、抗細胞凋亡等基本藥理作用的綜合結(jié)果[14]；甘草素較易通過血腦屏障，從而發(fā)揮神經(jīng)保護作用[15]。故本研究選取以上7種成分作為優(yōu)選指標，進行栝樓桂枝滴丸質(zhì)量標準和體外溶出度研究。

在供試品溶液的制備中，主要對提取方法和提取溶劑進行了考察。首先比較了超聲、回流2種提取方法對7種成分提取率的影響，結(jié)果表明，2種方法對7種成分的提取率相差較小，考慮到超聲提取方法簡便的特點，最終確定提取方法為超聲提取法；提取溶劑考察了甲醇和70%乙醇，結(jié)果表明，甲醇對7種成分的提取率高于70%乙醇，故確定提取溶劑為甲醇。

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Study on Quality Standards and Vitro Dissolution of Gualou Guizhi Dropping Pills

LI Huang1, MA Huang-huang2, QIAO Li-fei1, SUN Cheng-tao1, XU Wei1, CHU Ke-dan1(1. College of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China; 2. People’s Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China)

ObjectiveTo establish the quality standards of Gualou Guizhi Dropping Pills; To investigate the vitro dissolution. Methods HPLC was used to determine the contents of paeoniflorin, albiflorin, cinnamic acid, 6-gingerol, liquiritin, glycyrrhizic acid and liquiritigenin in the dropping pills. The vitro dissolution rate of dropping pills was determined by rotating basket method. Results The calibration curves of paeoniflorin and albiflorin were in a good linearity in the range of 0.690–6.900 μg, 0.300–2.996 μg, respectively, and the average recoveries were 101.12% and 98.52%, respectively, with RSD of 2.24%, 1.37%, respectively. Cinnamic acid was linear in the range of 0.023–0.348 μg and the average recovery was 98.21% with RSD of 2.00%. 6-Gingerol was linear in the range of 0.025–0.382 μg, and the average recovery was 99.19% with RSD of 2.18%. The calibration curves of liquiritin, glycyrrhizic acid and liquiritigenin were in a good linearity in the ranges of 0.120–2.498 μg, 0.150–2.253 μg, and 0.010–0.147 μg, respectively, and the average recoveries were 99.80%, 100.38%, and 100.62%, respectively with RSD of 2.10%, 1.91%, 1.66%, respectively. The accumulated dissolution rates of seven kinds of elements in the dropping pills all reached more than 98% in 15 min. Conclusion The method is simple and accurate, with repeatability, which can be applied to the quality control of Gualou Guizhi Dropping Pills. The vitro dissolution rates meet relevant standards.

Gualou Guizhi Dropping Pills; quality standards; vitro dissolution

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.09.020

R284.1

A

1005-5304(2017)09-0080-04

2017-01-04）

（

2017-02-20；編輯：陳靜）

福建省戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)專項（2015Y0067）