張國霞 胡春霞 魏學(xué)明 張櫻山 楊世林

1．甘肅省中藥現(xiàn)代制藥工程研究院有限公司，甘肅 蘭州 730000；2．甘肅奇正藏藥有限公司，甘肅 蘭州 730000

阿卡如的質(zhì)量控制研究

張國霞1胡春霞2魏學(xué)明2張櫻山1楊世林1

1．甘肅省中藥現(xiàn)代制藥工程研究院有限公司，甘肅 蘭州 730000；2．甘肅奇正藏藥有限公司，甘肅 蘭州 730000

目的：建立藏藥阿卡如的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)不同產(chǎn)地的阿卡如進(jìn)行鑒別研究；用高效液相色譜法測定開環(huán)異落葉松脂酚的含量，采用菲羅門Synergi TM 4μm Polar-RP(4.6mm×250mm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水(42∶58)，流速1.0mL/min，檢測波長為280nm。結(jié)果：薄層色譜鑒別條件下特征斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性好；開環(huán)異落葉松脂酚在25.96～259.6μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為Y=8.5501x+8.4724(r=0.999 9)，平均回收率為99.75%，RSD為1.57%。結(jié)論:該法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，能有效控制樣品的質(zhì)量。

阿卡如；開環(huán)異落葉松脂酚；薄層色譜法；高效液相色譜法

阿卡如為木犀科丁香屬植物紫丁香SyringaoblataLindl.的枝干、主干或根。生于山坡叢林、山溝溪邊、山谷路旁及灘地水邊，海拔1500～5000m。喜溫暖、濕潤及陽光充足。紫丁香具有抗菌消炎、抗病毒和保肝利膽作用，用于治療脾胃濕寒、呃逆吐瀉、心腹冷痛等[1-2]。阿卡如所含成分開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)心肌細(xì)胞H2O2氧化損傷具有顯著的保護(hù)作用，且呈劑量依賴性[3-4]，并具有抗腫瘤[5-6]、糖尿病[7-8]、骨質(zhì)疏松、抗氧化和自由基清除作用[9-10]，保護(hù)心臟缺血-再灌注損傷等[11-12]。

阿卡如，又名藏沉香、阿嘎如、阿爾加、阿嘎爾，為藏區(qū)慣用藥材,已有幾百年的用藥歷史，用于治療頭痛、健忘、失眠、煩躁、婦女諸癥等癥?！毒е楸静荨?、《藏藥志》中均有記載[13-14]。目前甘肅、四川、青海等地方醫(yī)院制劑中多有使用，但其研究尚屬空白，未收載于藏藥標(biāo)準(zhǔn)中，且無法定藥用標(biāo)準(zhǔn)。本項(xiàng)目對(duì)阿卡如進(jìn)行系統(tǒng)全面的，根據(jù)阿卡如化學(xué)成分前期研究結(jié)果可知，阿卡如含有苯丙素類(包括簡單苯丙素類、木脂素、香豆素類等)、黃酮類、環(huán)烯醚萜類、三萜類等化合物[15]。為了阿卡如的正確使用和安全有效，對(duì)不同產(chǎn)地來源的阿卡如藥材進(jìn)行顯微和薄層鑒別，同時(shí)用HPLC法測定其所含開環(huán)異落葉松脂酚的含量[16-17]，為綜合評(píng)價(jià)阿卡如藥材的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器和材料

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(G1314A紫外可見檢測器，G1315B二極管陣列檢測器，G1314A二元泵，Agilent1100色譜工作站，美國Agilent公司)；梅特勒-托利多分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；SK8200HP超聲波清洗器(功率250W，頻率40kHz，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；艾科浦超純水機(jī)；WFH-201BJ紫外可見透射反射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 試藥 開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)照品(批號(hào)ABS-00019102-010，純度99.4%，美國中草藥(Chromadex)標(biāo)準(zhǔn)品)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

阿卡如采自甘肅省甘南藏族自治州迭部縣，并由鐘國躍教授、晉玲教授、孫學(xué)剛教授、李富銀、秦臨喜鑒定為木犀科植物紫丁香SyringaoblataLindl.。藥材標(biāo)本保存于甘肅省中藥現(xiàn)代制藥工程研究院有限公司。

2 鑒別

2.1 顯微鑒別 本品粉末黃白色或黃棕色。木纖維多角形，直徑20～45μm；纖維成束或單個(gè)散在，有的纖維束周圍細(xì)胞含方晶，形成晶纖維，有的纖維束內(nèi)含棕色樹脂，見圖1。

2.2 薄層鑒別 取本品粉末1g，加甲醇20mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取阿卡如對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖2。

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(42:58) 為流動(dòng)相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按開環(huán)異落葉松脂酚峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。見圖3。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 取開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含259.6μg的溶液，即得。

3.3 樣品溶液的制備 取本品粉末(過二號(hào)篩)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 線性關(guān)系考察 取濃度為259.6μg/mL開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)照品溶液，作為儲(chǔ)備液；精密量取1、2、4、6、8、10mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別配制成25.96、51.92、103.84、155.76、207.68、259.6μg/mL的系列濃度；精密量取10μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。得回歸方程為Y=8.5501x+8.4724，r=0.9999，開環(huán)異落葉松脂酚在25.96～259.60μg/mL范圍內(nèi)峰面積與對(duì)照品的濃度呈良好的線性關(guān)系。

3.4.2 精密度試驗(yàn) 按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”下方法制項(xiàng)下色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果表明，開環(huán)異落葉松脂酚的RSD為1.24%，精密度良好。

3.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”下方法制項(xiàng)下色譜條件測定，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果開環(huán)異落葉松脂酚的RSD為0.93%，表明樣品在12小時(shí)內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

3.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液6份，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算RSD。結(jié)果開環(huán)異落葉松脂酚的RSD為1.42%，表明重復(fù)性較好。

3.4.5 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品(含量為3.3356mg/g)9份，每份約0.5g，精密稱定，置150mL的具塞錐形瓶中，分別精密加入濃度為0.2596mg/mL的開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)照品溶液5.2mL、6.5mL、7.8mL，即按已知含量的80%、100%、120%加入開環(huán)異落葉松脂酚對(duì)照品溶液，按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”下方法制項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算加樣回收率。試驗(yàn)結(jié)果表明，本法回收率好，開環(huán)異落葉松脂酚的RSD為1.57%。見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.4.6 含量測定 按“3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“3.1”下方法制項(xiàng)下色譜條件測定10批樣品的色譜峰峰面積，每批樣品處理2份平行樣，測定，計(jì)算平均值，求得樣品中開環(huán)異落葉松脂酚的含量。見表2。

表2 樣品中開環(huán)異落葉松脂酚的含量測定結(jié)果(n=2)

4 討論

實(shí)驗(yàn)選用的薄層鑒別方法操作簡單，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，Rf值適中，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)；HPLC法測定阿卡如中開環(huán)異落葉松脂酚的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好，可作為阿卡如的質(zhì)量控制方法。

實(shí)驗(yàn)選用甲醇、75%甲醇、50%甲醇、乙醇、75%乙醇、50%乙醇為溶劑進(jìn)行了提取率的比較。結(jié)果檢測成分開環(huán)異落葉松脂酚在甲醇中提取率均高于其他溶劑，故選用甲醇為提取溶劑。色譜條件選擇甲醇和水、乙腈和水、甲醇和磷酸水等度洗脫，結(jié)果選用甲醇和水等度洗脫，色譜峰分離度好，開環(huán)異落葉松脂酚與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。

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Study on Quality Control of Akaru

ZHANG Guoxia1HU Chunxia2WEN Xueming2ZHANG Yingshan1YANG Shilin1

1.Gansu Province Traditional Chinese Medicine Modern Pharmaceutical Engineering Research Institute, Lanzhou 730000, China；2.Gansu Cheezheng Tibetan Medicine Co Ltd., Lanzhou 730000, China

Objective To establish the quality standard of Tibetan medicine as the Akaru.Mehods Use TLC method for the identification study of different producing area Akaru.To develop an HPLC method for the determination of secoisolariciresino, An Phenomenex Synergi TM 4μm Polar-RP column(4.6mm×250mm)was used.The mobile phase was methanol-water(42∶58).Theflow rate was 1.0 mL·min-1. The detection wavelenghth was set at 280 nm. Results Under TLC identification condition, the characteristic spots were clear, and the repeatability was good. The linear range of secoisolariciresino were from 25.96～259.6μg/mL. The regression equation isY=8.5501x+8.4724(r=0.9999),The average recovery was 99.75% withRSD1.57%. Conclusion The method is simple, rapid and accurate, and can effectively control the quality of the sample.

Akaru；Secoisolariciresino；TLC；HPLC

蘭州市人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014-RC-60)。

張國霞(1974-)，女，漢族，高級(jí)工程師，研究方向?yàn)椴厮幮滤幍难邪l(fā)。E-mail: zgx0720@qzh.cn

R284.1

A

1007-8517(2017)15-0050-04

2017-05-19 編輯：梁志慶)