安 碩， 黃麗珍， 李蘇穎

(河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)教研室，鄭州 451191)

中醫(yī)藥學(xué)

正交設(shè)計(jì)優(yōu)化西青果中沒(méi)食子酸的提取工藝

安 碩， 黃麗珍， 李蘇穎

(河南醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)教研室，鄭州 451191)

目的 建立西青果沒(méi)食子酸的最佳提取工藝。方法 以西青果提取液中沒(méi)食子酸含量為考察指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳提取條件。結(jié)果 最佳工藝為加水10倍量，提取3次，每次2 h。結(jié)論 該提取工藝穩(wěn)定合理、快速簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本較低。

西青果；沒(méi)食子酸；正交設(shè)計(jì)

西青果又名藏青果，為使君子科植物訶子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果[1]。本品有降火利咽開(kāi)音功能，用于急、慢性咽炎或慢性喉炎、扁桃體炎等[2]，臨床用藥有藏青果沖劑[3]、藏青果喉片[4]等，也是西青果口含片[5]的主要原料藥之一。其主要含沒(méi)食子酸等酚酸類成分[6-7]。高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定西青果沒(méi)食子酸的含量已有報(bào)道[8-10]，但未見(jiàn)西青果提取工藝優(yōu)化的相關(guān)文獻(xiàn)。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用西青果資源，筆者采用正交設(shè)計(jì)研究西青果的提取工藝，通過(guò)HPLC法測(cè)定西青果中沒(méi)食子酸的含量以控制其質(zhì)量，報(bào)道如下。

1 儀器與方法

1.1 儀器與試藥 Waters高效液相色譜儀(包括Waters e2695分離單元，Waters e2998 PDA檢測(cè)器)；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；YUPINGFA2004b型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；METTLERAE240型十萬(wàn)分之一分析天平。

西青果(廣西永福產(chǎn)，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院董誠(chéng)明教授鑒定為使君子科植物訶子TerminaliachebulaRetz.的干燥幼果)；沒(méi)食子酸對(duì)照品(由成都曼斯特生物科技有限公司提供，批號(hào)0831-9501，經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定含量達(dá)98%以上)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素初篩試驗(yàn)結(jié)果，確定提取次數(shù)、加水倍數(shù)、提取時(shí)間3個(gè)因素，取3個(gè)因素水平。見(jiàn)表1。

1.2.2 色譜條件 色譜柱: HypersilODS2(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動(dòng)相:甲醇-0.2 %磷酸(5∶95)；流速:0.8 ml/min；柱溫:30°；檢測(cè)波長(zhǎng):274 nm；進(jìn)樣量:10 μl；理論塔板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。在此色譜條件下，沒(méi)食子酸與其他組分能達(dá)到基線分離。

表1 西青果水提取工藝條件正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成0.02 g/L的溶液，即為對(duì)照品溶液。

1.2.4 供試品溶液制備 準(zhǔn)確稱取7.5 g西青果，按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，溶液濾液移入250 ml容量瓶中，水定容至刻度，精密吸取1 ml藥液定容至25 ml量瓶，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即為供試品溶液。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液1、3、5、7、9 μl進(jìn)樣(n=2)，按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程和相關(guān)系數(shù)，Y=4.8×106x-5296 6，r=0.999 9。結(jié)果表明沒(méi)食子酸在進(jìn)樣量0.021 6～0.194 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定，RSD=0.6%。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μl，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，RSD=2.75%。表明至少24 h內(nèi)供試品溶液在常溫下仍保持穩(wěn)定。

1.2.8 水提取工藝條件 正交試驗(yàn)結(jié)果將1～9號(hào)供試品溶液分別進(jìn)樣10 μl，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算沒(méi)食子酸含量。沒(méi)食子酸含量及方差分析結(jié)果見(jiàn)表2-3。

由正交試驗(yàn)結(jié)果可知，所考察的3個(gè)因素對(duì)沒(méi)食子酸含量的影響，顯著性大小為B>D>C，即提取次數(shù)>提取時(shí)間>加水倍數(shù)，提取次數(shù)視為主要的影響因素；表3方差分析結(jié)果表明：B、D因素影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而C因素影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，以B3C2D3為最佳方案，即提取條件為提取次數(shù)3次，用10倍量水，提取時(shí)間2 h。

1.2.9 優(yōu)選提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 為了進(jìn)一步考察上述工藝的穩(wěn)定性和合理性，按所篩選出的最佳工藝條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)3次，分別測(cè)定沒(méi)食子酸的含量。見(jiàn)表4。

表2 西青果正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果

表3 沒(méi)食子酸含量方差分析表

注：F0.05(2,2)=6.94。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

沒(méi)食子酸的平均含量為2.451 1%，因此，所選的提取條件為最佳工藝。

2 討論

通過(guò)正交試驗(yàn)，確定了西青果中沒(méi)食子酸的最佳提取工藝。極差和方差分析表明，最佳條件為提取次數(shù)3次，用10倍量水，提取時(shí)間2 h。試驗(yàn)結(jié)果表明，該提取工藝穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單，成本較低，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用西青果提供了理論基礎(chǔ)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2015年版：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 王本詳.現(xiàn)代中藥藥理與臨床[M].天津:天津科技翻譯出版公司,2004:785.

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[4] 劉元,宋志釗,李星宇,等.藏青果喉片藥效學(xué)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2009,15(1):61.

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[9] 袁銘,熊曄,向陽(yáng),等.高效液相色譜法測(cè)定藏青果中沒(méi)食子酸的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,28(7):916.

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[責(zé)任編輯：馬香芹]

Study on Extraction Technology for Gallic Acid from Terminalia Chebula by Orthogonal Design

AN Shuo, HUANG Li-zhen, LI Su-ying

(HenanMedicalCollege,ZhengzhouHenan451191,China)

Objective The research aims at studying the optimum extraction technology of gallic acid from Terminalia Chebula. Methods The best extraction condition was screened by orthogonal experiment according to the content of gallic acid. Results The optimum was 10 times the amount of water, extracted three times, each time 2 h. Conclusion The extraction process is stable， reasonable, fast and simple with low cost of production.

Terminalia Chebula; gallic acid; orthogonal design

2016-12-30

安碩(1989-)，女，河南省南陽(yáng)市人，碩士，助教，從事藥學(xué)專業(yè)教學(xué)與科研工作。

R 284.2

A

1008-9276(2017)05-0500-03