劉 博王 婧

（1.陜西省咸陽市中心醫(yī)院，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽712000）

·研究報告·

活血通絡(luò)化痰方對急性腦梗死模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿膽紅素及氧化低密度脂蛋白水平的影響*

劉 博1王 婧2

（1.陜西省咸陽市中心醫(yī)院，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽712000）

目的 觀察活血通絡(luò)化痰方（HTH）對急性腦梗死模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿膽紅素及氧化低密度脂蛋白水平的影響。方法 將30只健康SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和實驗組，各10只，采用自身栓子法制備急性腦梗死大鼠模型大鼠，對照組和模型組0.9%氯化鈉注射液灌胃，實驗組給予活血通絡(luò)化痰方煎煮液灌胃，第5、10日觀察各組大鼠的腦組織病理，比較血液流變學(xué)指標(biāo)（血漿黏度、全血黏度高切、紅細(xì)胞聚集指數(shù)）、血漿膽紅素及氧化低密度脂蛋白水平。結(jié)果 與對照組比較，模型組大鼠腦組織神經(jīng)元腫脹，梗死灶內(nèi)細(xì)胞和血管壞死，結(jié)構(gòu)模糊，間質(zhì)水腫；與模型組比較，實驗組大鼠少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞死亡，細(xì)胞質(zhì)疏松及腫脹明顯減輕，腦組織水腫有減輕。第5、10日，模型組大鼠血漿黏度、全血黏度高切、全血黏度低切明顯高于對照組，而實驗組大鼠血漿黏度、全血黏度高切、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯低于模型組（P<0.05）。模型組大鼠血漿膽紅素明顯低于對照組，而實驗組血漿膽紅素明顯高于模型組（P<0.05）。模型組大鼠氧化低密度脂蛋白水平明顯高于對照組，而實驗組大鼠氧化低密度脂蛋白水平明顯低于模型組（P<0.05）。結(jié)論 活血通絡(luò)化痰方可改善急性腦梗死模型大鼠損傷腦組織、降低血液流變學(xué)指標(biāo)氧化低密度脂蛋白、升高血漿膽紅素。

活血通絡(luò)化痰方 急性腦梗死 血液流變學(xué) 血漿膽紅素 氧化低密度脂蛋白

急性腦梗死是腦動脈發(fā)生病變所導(dǎo)致的疾病，腦細(xì)胞缺血缺氧，發(fā)病率高、致死率高，可由顱腦損傷引起，造成腦組織缺血缺氧發(fā)生壞死，導(dǎo)致系列神經(jīng)癥狀，嚴(yán)重威脅人體健康［1-2］。急性腦梗死發(fā)病復(fù)雜，與血脂水平和動脈粥樣硬化病變密切相關(guān)［3-4］。活血通絡(luò)化痰方由川芎、生大黃、水蛭、赤芍、丹參、瓜蔞、姜半夏、桔梗、銀杏葉組成，具有活血化瘀、通絡(luò)化痰功效，為筆者所在醫(yī)院治療急性腦梗死的院內(nèi)協(xié)定處方，具有較好的臨床療效，但其作用機(jī)制不清［5］。本研究通過建立急性腦梗死模型大鼠，比較大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿膽紅素及氧化低密度脂蛋白水平的影響，探討活血通絡(luò)化痰方治療急性腦梗死的作用機(jī)制?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 30只健康清潔級SD大鼠，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供 ［SCXK（京）2011-0011］，雌雄各半，體質(zhì)量（250±20）g。自然光線下，以標(biāo)準(zhǔn)飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

1.2 試藥與儀器 水合氯醛（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公），活血通絡(luò)化痰方：川芎10 g，生大黃10 g，水蛭10 g，赤芍15 g，丹參15 g，瓜蔞10 g，姜半夏6 g，桔梗10 g，銀杏葉10 g；藥材均由本院中藥房提供，并制成1 g/mL的煎煮液。氧化低密度脂蛋白試劑盒（上海生工技術(shù)有限公司）。NI500顯微鏡 （日本尼康公司），Biotek aQuant型酶標(biāo)儀 （上海坤肯生物化工有限公司），RM2125切片機(jī)和TPIIZO全自動封閉式組織脫水機(jī)（德國徠卡公司），Y6-6LF生物組織包埋機(jī)（湖北亞光易用電子技術(shù)有限公司），13R離心機(jī) （力康集團(tuán)力新儀器（上海）有限公司）。

1.2 分組與造模 30只健康SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、模型組和實驗組，各10只；模型組和實驗組采用自身栓子法制備急性腦梗死大鼠模型大鼠［6］。腹腔內(nèi)注射水合氯醛麻醉，固定于手術(shù)臺，剪開頸部右側(cè)旁正中淺筋膜，暴露右側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)，頓性分離頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈，近心端結(jié)扎近端頸外動脈，微動脈夾夾住頸內(nèi)動脈，0.3 mm尼龍線結(jié)扎固定頸總動脈，阻斷大腦中動脈起始端血流，松開頸內(nèi)動脈，剪除多余尼龍線，并在頸內(nèi)動脈根部固定，防止線栓移動，消毒縫合皮膚，放回籠中，自由喂養(yǎng)。

1.3 給藥方法 造模后第2日，對照組和模型組予3 mL 0.9%氯化鈉注射液灌胃，實驗組給予3 mL活血通絡(luò)化痰方煎煮液灌胃，分別于第5日和第10日處死10只大鼠進(jìn)行觀察。

1.4 標(biāo)本采集與檢測 分別于造模后第5日和第10日，各組處死10只大鼠，4℃迅速斷頭取腦，0.9%氯化鈉注射液清洗后，固定48 h后，二甲苯脫脂，酒精脫水，石蠟包埋，切片，染色，觀察各組大鼠的腦組織病理。眼球取血，3000 r/min離心15 min，分離血清后-80℃保存，OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀檢測血漿黏度、全血黏度高切、全血黏度低切等血液流變學(xué)指標(biāo)，釩酸鹽氧化法測定血漿總膽紅素，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法檢測氧化低密度脂蛋白水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗比較組內(nèi)和組間差異，計數(shù)資料以n（%）表示，應(yīng)用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組腦組織病理學(xué)觀察 見圖1。對照組大鼠腦組織細(xì)胞形態(tài)正常，分布均勾，未見神經(jīng)元腫脹和炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象；模型組大鼠腦組織神經(jīng)元腫脹，梗死灶內(nèi)細(xì)胞和血管壞死，結(jié)構(gòu)模糊，間質(zhì)水腫；實驗組大鼠少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞死亡，細(xì)胞質(zhì)疏松及腫脹明顯減輕，腦組織水腫有減輕。

圖1 各組大鼠腦組織病理學(xué)切片（HE染色，400倍）

2.2 各組血液流變學(xué)指標(biāo)比較 見表1。第5日和第10日，模型組大鼠血漿黏度、全血黏度高切、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯高于對照組，而實驗組大鼠血漿黏度、全血黏度高切、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯低于模型組，且第10日低于第5日（P<0.05）。

表1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（mPa·s，±s）

表1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（mPa·s，±s）

與對照組同時期比較，*P＜0.05；與模型組同時期比較，#P＜0.05；與本組第5日比較，△P＜0.05。下同。

組別 時間 紅細(xì)胞聚集指數(shù)對照組第5日 4.37±0.62（n＝10）第10日 4.45±0.61模型組第5日 8.75±0.76*3.22±0.57*9.64±1.62*實驗組 第5日 2.15±0.47#7.71±1.25#6.97±0.71#（n＝10） 第10日 1.59±0.50#△6.03±1.14#△5.23±0.65#△血漿黏度 全血黏度高切1.37±0.41 5.12±1.03 1.39±0.42 5.18±0.99 3.11±0.54*9.47±1.57*（n＝10）第10日 9.11±0.81*

2.3 各組血漿膽紅素水平比較 見表2。第5日和第10日，模型組大鼠血漿膽紅素水平顯著低于對照組，而實驗組大鼠血漿膽紅素水平顯著高于模型組，且第10日高于第5日（P<0.05）。

表2 各組大鼠血漿膽紅素水平比較（μmol/L，±s）

表2 各組大鼠血漿膽紅素水平比較（μmol/L，±s）

組別 第5日 第10日對照組 17.59±3.21 17.30±3.18 n 治療前10 17.21±3.14模型組 9.61±2.52*9.86±2.73*10 9.43±2.47*實驗組 10 9.51±2.38*#14.11±3.07*#18.02±3.24#△

2.4 各組氧化低密度脂蛋白水平比較 見表3。第5日和第10日，模型組大鼠氧化低密度脂蛋白水平明顯高于對照組，而實驗組大鼠氧化低密度脂蛋白水平明顯低于模型組，且第10日低于第5日（P<0.05）。

表3 各組大鼠血氧化低密度脂蛋白水平水平比較（μmol/L，±s）

表3 各組大鼠血氧化低密度脂蛋白水平水平比較（μmol/L，±s）

組別 第5日 第10日對照組 5.13±1.17 5.24±1.21 n 治療前10 5.01±1.12模型組 8.87±1.29*9.01±1.47*10 8.71±1.33*實驗組 10 9.01±1.42*#7.03±1.34*#5.41±1.26#△

3 討 論

急性腦梗死發(fā)病急驟，病情變化迅速，缺血再灌注導(dǎo)致的腦組織神經(jīng)損傷及腦神經(jīng)細(xì)胞壞死與凋亡是導(dǎo)致其高死亡率的主要原因。急性腦梗死的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與腦微血管結(jié)構(gòu)及功能密切相關(guān)，急性腦梗死模型大鼠腦微血管管周間隙增大，皮層微血管管壁扭曲變形，嚴(yán)重水腫，內(nèi)皮細(xì)胞和緊密連接結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重，大量炎癥細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致大量VEGF生成，血小板釋放炎性介質(zhì)，加重組織的缺血缺氧，引起血流動力學(xué)指標(biāo)變化［7-8］。膽紅素為血紅蛋白分解代謝產(chǎn)物，具有抗氧化性，可減少氧化低密度脂蛋白生成，急性腦梗死自由基清除能力下降，脂類過氧化反應(yīng)能力增加，降低血漿膽紅素水平。低密度脂蛋白與動脈粥樣硬化有關(guān)，低密度脂蛋白可通過促進(jìn)氧化低密度脂蛋白加速動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展，氧化低密度脂蛋白可加速脂質(zhì)沉積，促使血栓形成，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙損傷，從而引起急性腦梗死［9-10］。急性腦梗死屬中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)病”范圍，活血通絡(luò)中藥對急性腦梗死可標(biāo)本兼治，通過活血行氣、疏通經(jīng)絡(luò)、祛瘀生新等發(fā)揮治療作用，是治療中風(fēng)病有效方法，具有較好的臨床療效，但其作用機(jī)制尚不明確。

本研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠腦組織神經(jīng)元腫脹，梗死灶內(nèi)細(xì)胞和血管壞死，結(jié)構(gòu)模糊，間質(zhì)水腫，大鼠血漿黏度、全血黏度高切、全血黏度低切明顯升高，血漿膽紅素明顯降低，氧化低密度脂蛋白水平明顯升高，說明采用自身栓子法制備急性腦梗死大鼠模型大鼠的腦組織、血液流變學(xué)、血漿膽紅素和氧化低密度脂蛋白發(fā)生了明顯變化，符合急性腦梗死病理變化，所建立的動物模型可較好地評價藥物的干預(yù)作用和機(jī)制的研究［11］。給予活血通絡(luò)化痰方后發(fā)現(xiàn)大鼠少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞死亡，細(xì)胞質(zhì)疏松及腫脹明顯減輕，腦組織水腫有減輕；漿黏度、全血黏度高切、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯低于模型組，血漿膽紅素明顯高于模型組，氧化低密度脂蛋白水平明顯低于模型組，且第10日低于第5日，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示活血通絡(luò)化痰方可改善急性腦梗死模型大鼠損傷腦組織，改善血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿膽紅素和氧化低密度脂蛋白。川芎所含川芎嗪擴(kuò)張血管和抗血栓，改善腦循環(huán)，抑制自由基，提高耐氧能力和腦血流量，改善其神經(jīng)學(xué)缺損，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化等有關(guān)［12-13］。水蛭具有糾正微循環(huán)，改善腦部缺氧，改善超氧化物歧化酶、丙二酸、內(nèi)皮素及血小板最大聚集率的作用，治療急性期缺血性腦中風(fēng)療效顯著［14］。赤芍、丹參能降低血小板表面活性和血管內(nèi)皮素、擴(kuò)張腦血管、改善腦循環(huán)、清除氧自由基、改善腦血液供應(yīng)，對腦神經(jīng)細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用［15］。銀杏黃酮苷和銀杏內(nèi)酯為強(qiáng)有力自由基清除劑，能改善神經(jīng)功能缺損、減輕缺血后腦水腫和炎癥、改善微循環(huán)、增加腦血流量、改善血液黏度、減少腦梗死面積等作用［16-17］。

綜上所述，活血通絡(luò)化痰方可改善急性腦梗死模型大鼠損傷腦組織，降低血液流變學(xué)指標(biāo)和氧化低密度脂蛋白，升高血漿膽紅素。

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Influence of Huoxue Tongluo Huatan Decoction on Blood Rheology，Plasma Bilirubin and Oxidized Low Density Lipoprotein Level in Acute Cerebral Infarction Rat Model

LIU Bo，WANG Jing.Xianyang Central Hospital of Shanxi Province，Shanxi，Xianyang 712000，China.

Objective：To study the influence of Huoxue Tongluo Huatan Decoction on blood rheology，plasma bilirubin and oxidized low density lipoprotein level in rats with acute cerebral infarction.Methods：60 healthy SD rats were randomly divided into the control group，the model group and the experimental group，20 rats in each group.A rat model of acute cerebral infarction was made by the method of self-embolism.The control group and the model group were treated with normal saline by lavage，and the experimental group was treated with Huoxue Tongluo Huatan Decoction by lavage.On the fifth day and 10th day，brain pathology of rats in each group was observed；blood rheology indexes（plasma viscosity，whole high viscosity，erythrocyte aggregation index）were compared，as well as plasma bilirubin and oxidized low density lipoprotein level.Results：Compared with the control group，the neurons in the brain tissue of the model group were swollen，the necrosis of the cells and vessels in the infarction，the structure was fuzzy，and the stroma showed edema.Compared with the model group，a few nerve cells died in the experimental group，and the porosity and swelling of the experimental group were obviously reduced，and the edema of the brain tissue was alleviated.On fifth days and tenth days，plasma viscosity，whole high viscosity and whole low viscosity in the model group were significantly higher than those of the control group，while plasma viscosity，whole high viscosity，erythrocyte aggregation index of the experimental group was lower than those of the model group.The differences were statistically significant（P<0.05）.The plasma bilirubin in the model group was lower than that in the control group，while the experimental group was significantly higher than the model group；the difference was statistically significant（P<0.05）.The level of oxidized low-density lipoproteinin the model group was significantly higher than that in the control group，but the level of oxidized low density lipoprotein in the experimental group was lower than that in the model group；the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Huoxue Tongluo Huatan Decoction can improve the injury of brain tissue in rats with acute cerebral infarction，reduce hemorheology and oxidized low-density lipoprotein，and increase plasma bilirubin.

Huoxue Tongluo Huatan Decoction；Acute cerebral infarction；Blood rheology；Plasma bilirubin；Oxidized low density lipoprotein cholesterol

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1340-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.008

2017-05-15）

陜西省醫(yī)學(xué)科技研究項目（2015D118）