劉盼 胡孟芬 趙新聞 柳雯 宋達(dá)琳

硝酸異山梨酯后處理對(duì)大鼠在體心肌缺血/再灌注損傷保護(hù)作用的研究

劉盼 胡孟芬 趙新聞 柳雯 宋達(dá)琳

目的 觀察硝酸異山梨酯后處理對(duì)大鼠在體心肌缺血/再灌注損傷是否具有保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。方法 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，32只，10～12周齡。建立大鼠在體心肌缺血/再灌注模型，隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham組）、缺血/再灌注組（I/R組）、缺血后處理組（IPostC組）和硝酸異山梨酯后處理組（PPostC組）。測(cè)定各組大鼠心肌梗死面積，并用Elisa法測(cè)定大鼠血清肌鈣蛋白I（cTnI）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平。結(jié)果 ①各組大鼠左室質(zhì)量和缺血面積未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IPostC組及PPostC組與I/R組相比，心肌梗死面積減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）［（41.015±1.037）%、（38.129±0.726）%比（52.190±1.216）%］；而IPostC組與PPostC組之間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.057）。②與sham組相比，I/R組、IPostC組和PPostC組血清cTnI的水平顯著升高（P＜0.05）；與I/R組相比，IPostC組和PPostC組的大鼠血清cTnI水平明顯降低（P＜0.05），IPostC組和PPostC組相比未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。③與sham組相比，I/R組、IPostC組及PPostC組血清MDA水平顯著升高，SOD水平顯著降低（P＜0.05）；與I/R組相比，IPostC組及PPostC組血清MDA水平降低，血清SOD水平顯著升高（P均＜0.05）。結(jié)論 ①缺血后處理能夠減輕大鼠在體心肌缺血/再灌注損傷；②硝酸異山梨酯后處理可以產(chǎn)生與缺血后處理相似的心肌保護(hù)效果；③硝酸異山梨酯的心肌保護(hù)作用機(jī)制可能與減少活性氧的產(chǎn)生及提高心肌的抗氧化（應(yīng)激）能力有關(guān)。

缺血-再灌注損傷； 缺血后處理； 心肌保護(hù)； 硝酸異山梨酯

缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）是急性心肌梗死患者經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（percutaneous transluminalcoronary intervention，PCI）術(shù)后面臨的主要問題，臨床表現(xiàn)為梗死面積增加、再灌注心律失常、心肌頓抑等，并可導(dǎo)致最終梗死面積達(dá)50%以上[1,2]，能夠抵消再灌注帶來的所有益處。近年來有學(xué)者提出缺血后處理（IPostC）這一內(nèi)源性的心肌保護(hù)機(jī)制，并證實(shí)可以減輕IRI[3]。2005年，Staat等[4]首次在臨床上證實(shí)了IPostC的心肌保護(hù)性，使其臨床應(yīng)用價(jià)值得到了提高。但I(xiàn)PostC在應(yīng)用時(shí)存在斑塊破裂、血栓栓塞的風(fēng)險(xiǎn)，因此，藥物后處理（PPostC）心肌保護(hù)模式顯得更具有研究意義。硝酸酯是非內(nèi)皮依賴性的外源性一氧化氮（NO）供體，是目前使用最為廣泛的抗心肌缺血藥物之一，臨床上主要用于高血壓、慢性穩(wěn)定型心絞痛、心力衰竭等。針對(duì)硝酸酯對(duì)在體心肌IRI的影響還尚未展開研究。硝酸酯對(duì)在體心肌IRI是否具有保護(hù)作用？若有，其機(jī)制是什么？除了其擴(kuò)張血管平滑肌的作用外，對(duì)心血管系統(tǒng)的其他作用機(jī)制目前還沒有明確的定論。在現(xiàn)代介入及冠脈搭橋術(shù)十分普遍的情況下，越來越多的患者遭受IRI。為了使其在臨床領(lǐng)域中顯示出優(yōu)越性和應(yīng)用價(jià)值，在臨床PCI心肌保護(hù)中發(fā)揮更重要的價(jià)值，結(jié)合目前PPostC的廣闊應(yīng)用前景，本實(shí)驗(yàn)通過建立IRI模型，與經(jīng)典的IPostC相比較，旨在驗(yàn)證硝酸酯后處理對(duì)大鼠心肌IRI是否也有保護(hù)作用，并探討其保護(hù)機(jī)制，從而為實(shí)現(xiàn)硝酸酯后處理心肌保護(hù)新模式的臨床應(yīng)用與推廣提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠32只，10～12 周齡，體質(zhì)量（300±10）g，購自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，合格證號(hào)：SCXK魯20130001。

1.2 主要試劑 Evans blue（美國sigma公司），2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）（美國 sigma公司），硝酸異山梨酯（異舒吉）（珠海許瓦茲制藥有限公司），Elisa試劑盒（南京建成生物工程研究所），PBS緩沖液（南京建成生物工程研究所），10%水合氯醛（青島大學(xué)附屬醫(yī)院）。

1.3 主要儀器 小動(dòng)物呼吸機(jī)HX-101E（成都泰盟科技有限公司），高速離心機(jī)M-802（上海手術(shù)器械廠），恒溫水浴箱SHH-W21-600（北京靖衛(wèi)科學(xué)儀器廠），超低溫冰箱BCD-172HDA（海爾公司），電子天平（日本島津ELB-300）（上海志榮電子科技有限公司），超凈工作臺(tái)JHT-DD（濟(jì)南市空氣凈化消毒設(shè)備廠）。

1.4 心肌缺血再灌注模型的建立 大鼠10%水合氯醛腹腔麻醉，固定后連接心電圖機(jī)。分離氣管，接呼吸機(jī)輔助呼吸，開胸，暴露心臟，將心臟拉出胸腔，在左前降支下穿線，線的兩頭共同穿過一長約2 cm的硬管。提起雙線頭，向下壓硬管，心臟表面呈暗紫色，心電圖出現(xiàn)ST段抬高證實(shí)結(jié)扎成功。再灌注時(shí)松開硬管，缺血心肌迅速充血變紅。見結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支前后心電圖改變圖（圖1）。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組 將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組。①假手術(shù)組（sham組，n=8）：只在左前降支下穿線，但不結(jié)扎，曠置220 min。②缺血/再灌注組（I/R組，n=8）：開胸結(jié)扎左前降支，造成缺血40 min；松開結(jié)扎線再灌注180 min。③缺血后處理組（IPostC組）：缺血40 min后，在恢復(fù)再灌注1 min內(nèi)給予3個(gè)循環(huán)的30 s/30 s的缺血/再灌注，隨后完全松開結(jié)扎線，持續(xù)再灌注180 min。④硝酸異山梨酯（異舒吉）后處理組（PPostC組）：再灌注前5 min開始，經(jīng)頸動(dòng)脈給予異舒吉 4 μg·kg-1·h-1，持續(xù)給藥 20 min，再灌注180 min。其余三組在相同時(shí)間給予相同量的生理鹽水作為對(duì)照。見實(shí)驗(yàn)流程圖（圖2）。

1.6 心肌梗死面積測(cè)定 缺血后原位結(jié)扎左前降支，從右頸動(dòng)脈注入2 ml 2%Evans blue，待鼠唇藍(lán)染后，取下心臟，生理鹽水沖洗，剔除血管及左右心房、右心室，將左室（left ventricle，LV）以濾紙吸干后稱重，然后置于-20℃冰箱冷凍30 min，沿心室長軸從心尖到心底部切成2 mm左右的薄片，置于1%TTC磷酸緩沖液中（pH7.4），37℃避光孵育15～20 min。孵育過程中不斷搖動(dòng)染液，使之與心肌組織充分接觸。染色后，用生理鹽水沖掉多余染液，將心臟薄片置入10%甲醛溶液固定24 h。梗死區(qū)（infarct size，IS）心肌呈灰白色，危險(xiǎn)區(qū)（area at risk，AAR）心肌呈深紅色[5]。顯微鏡下分離梗死區(qū)和危險(xiǎn)區(qū)，分別置于電子天平上稱重。缺血區(qū)面積=（AAR/LV）×100%。梗死區(qū)面積=（IS/AAR）×100%。見心肌染色圖（圖3）。

1.7 血清cTnI、SOD、MDA檢測(cè) 采用 Elisa方法檢測(cè)大鼠血清cTnI、SOD、MDA的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)以±s表示，多組均數(shù)及組間兩兩比較分別采用單因素方差分析和最小顯著差異法（LSD法）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同處理方式對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響Sham組只穿線不結(jié)扎，故心肌梗死面積為0；IPostC組和PPostC組缺血區(qū)面積與I/R組相比［（45.388±6.758）%、（43.498±4.327）%比 （47.117±1.821）%］，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明造模手法穩(wěn)定，因而在此基礎(chǔ)上所得梗死面積結(jié)果具有可比性。IPostC組及PPostC組與I/R組相比，心肌梗 死 面 積 減 小 ［（41.015±1.037）% 、（38.129±0.726）%比（52.190±1.216）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而IPostC組與PPostC組之間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.057）。見表1。

表1 各組大鼠心肌缺血面積和梗死面積比較（±s）

表1 各組大鼠心肌缺血面積和梗死面積比較（±s）

注：LV：左室；AAR/LV：缺血區(qū)面積；IS/AAR：梗死區(qū)面積。與 I/R組相比，aP＜0.05

組別 LV（g） AAR/LV（%） IS/AAR（%）I/R 組 0.815±0.022 47.117±1.821 52.190±1.216 IPostC 組 0.794±0.061 45.388±6.758 41.015±1.037aPPostC 組 0.814±0.011 43.498±4.327 38.129±0.726a

2.2 不同處理方式對(duì)大鼠血清MDA、SOD、cTnI的影響 再灌注末，I/R組、IPostC組及PPostC組血清MDA水平與sham組相比顯著升高［（1.81±0.03）nmol/L、（1.62 ±0.03）nmol/L、（1.59 ±0.03）nmol/L比 （1.31±0.04）nmol/L。與 I/R 組相比，IPostC 和PPostC組MDA水平有效降低（P＜0.05）。與sham組相比，I/R組、IPostC組及PPostC組血清SOD水平顯著降低（P＜0.05）；但與I/R組相比，IPostC及PPostC組血清SOD水平顯著升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血清SOD、MDA 和 cTnI水平比較（±s）

表2 各組大鼠血清SOD、MDA 和 cTnI水平比較（±s）

注：SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；cTnI：肌鈣蛋白I。與sham組相比，aP＜0.05；與 I/R 組相比，bP＜0.05

組別SOD（U/L）MDA（nmol/L）cTnI（ng/L）Sham 組 1.816±0.028 1.31±0.04 1.992 558±0.000250 I/R 組 1.794±0.019a 1.81±0.03a 1.996 793±0.000142aIPostC 組 1.811±0.001ab 1.62±0.03ab 1.995 089±0.000102abPPostC 組 1.813±0.014ab 1.59±0.03ab 1.995 252±0.000143ab

3 討論

急性心肌梗死（AMI）是缺血性心臟病中最兇險(xiǎn)的一種，發(fā)病率高、致死致殘率高、預(yù)后差，是缺血性心臟病死亡的主要原因[6]。雖然靜脈溶栓、PCI、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)（coronary artery bypass grafting，CABG）等方法對(duì)恢復(fù)心肌供血、挽救心肌起到了重要的作用，但同時(shí)也使心肌遭受IRI，減弱了再灌注治療帶來的療效，因此，防治IRI是近年來心臟病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。在再灌注開始的前幾分鐘內(nèi)，活性氧自由基（reactive oxide species，ROS）的生成過多是缺血/再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。Yang等[7]觀察到，再灌注開始1 min內(nèi)即有大量ROS的爆發(fā)產(chǎn)生，4～5 min達(dá)到高峰。Zhao等[3]和Kloner等[8]證實(shí)，缺血的心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞在長達(dá)3 h的再灌注中ROS增多。另外，炎癥反應(yīng)、微循環(huán)障礙等在再灌注損傷中也扮演著重要的角色，但ROS是最主要的始動(dòng)因素。因此，把握再灌注開始幾分鐘內(nèi)的有效時(shí)間窗、清除再灌注時(shí)生成的大量自由基、減輕ROS的細(xì)胞毒性損傷對(duì)再灌注心肌保護(hù)具有重要意義[9,10]。

IPostC的提出為防治IRI開辟了一條新的道路。大部分臨床試驗(yàn)證實(shí)，在急性心肌梗死患者行PCI手術(shù)時(shí)實(shí)施IPostC可以減輕再灌注損傷，改善預(yù)后[11-13]。但I(xiàn)PostC也是一項(xiàng)有創(chuàng)性操作，還存在潛在危險(xiǎn)，比如氣囊的反復(fù)充、放氣，可能引起冠狀動(dòng)脈斑塊破裂，以致發(fā)生再狹窄或血栓栓塞事件，也限制了其在臨床上的推廣與應(yīng)用。PPostC是在心肌IPostC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，通過藥物激發(fā)或模擬機(jī)體自身的內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)或直接激活相關(guān)信號(hào)通路而呈現(xiàn)的心肌保護(hù)作用，它以藥物替代反復(fù)缺血刺激，克服了手術(shù)缺血損傷的弊端，為心肌保護(hù)開創(chuàng)了廣闊的前景。相比之下，PPostC可能為更具實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的最適策略，它可避免與心臟、血管操作有關(guān)的不良后果，從而為心臟手術(shù)和介入治療提供更為簡(jiǎn)單、可行的心臟保護(hù)。

硝酸酯類藥物是非內(nèi)皮依賴性的血管擴(kuò)張劑，不論內(nèi)皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)是否正常都能發(fā)揮明確的擴(kuò)張血管平滑肌的作用。硝酸酯進(jìn)入血液循環(huán)后，通過特異性的代謝酶轉(zhuǎn)化為活性的NO分子，與血管平滑肌細(xì)胞膜上NO受體結(jié)合后，激活細(xì)胞內(nèi)鳥苷酸環(huán)化酶，使環(huán)磷酸鳥苷濃度增加、Ca2+水平下降，引起血管平滑肌舒張。孫海燕[14]運(yùn)用電化學(xué)微傳感器證實(shí)，持續(xù)長時(shí)間心肌缺血后，冠脈血流中的NO含量較基礎(chǔ)值降低。隨著再灌注時(shí)間的延長，雖然NO含量逐漸上升，但仍低于基礎(chǔ)水平；并且NO下降的幅度與大鼠心功能的抑制程度呈正相關(guān)。補(bǔ)充NO的前體物質(zhì)L-精氨酸對(duì)缺血心肌有正性肌力作用，可增加冠脈血流量并改善左室收縮和舒張功能[15,16]。NO的心肌保護(hù)作用除了與擴(kuò)血管、抗缺血作用有關(guān)之外，可能還通過與黏附分子相互作用減輕缺血再灌注時(shí)中性粒細(xì)胞引起的內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙[17]。NO還可通過抗氧化、抗凋亡、抗炎癥反應(yīng)等作用對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用[18]。

人們從20世紀(jì)70年代開始就認(rèn)識(shí)到心肌梗死面積是影響預(yù)后的重要因素，并且在一些評(píng)估AMI新療法的臨床試驗(yàn)中作為預(yù)測(cè)主要心血管事件的替代終點(diǎn)[19,20]。CTnI是心肌損傷的特異性標(biāo)志物，是較CK和CK-MB更可靠、更敏感的生化檢測(cè)指標(biāo)，是用于鑒別心肌損傷的“金標(biāo)準(zhǔn)”[21]。故本研究將cTnI濃度變化作為觀察心肌損傷的指標(biāo)之一。MDA為脂質(zhì)過氧化過程中的標(biāo)志性產(chǎn)物，因此，檢測(cè)MDA的活性可間接反映機(jī)體內(nèi)細(xì)胞受ROS攻擊、脂質(zhì)過氧化的嚴(yán)重程度[22]。SOD是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化劑，能清除氧自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，因此SOD對(duì)維持機(jī)體的氧化與抗氧化平衡發(fā)揮極其重要的作用，SOD水平的高低反映機(jī)體清除氧自由基的能力[23]。本實(shí)驗(yàn)中，我們采用心肌酶和梗死面積作為評(píng)價(jià)心肌損傷的指標(biāo)，結(jié)果表明，IPostC及PPostC均可使大鼠心肌梗死面積縮小、血清cTnI水平降低。另外，我們檢測(cè)了大鼠血清SOD、MDA的含量，以反映大鼠心肌氧化應(yīng)激的程度。結(jié)果顯示，與I/R相比，IPostC及PPostC可升高大鼠血清SOD含量、降低MDA含量。本實(shí)驗(yàn)中使用的硝酸酯劑量極小，尚不能產(chǎn)生明確的血流動(dòng)力學(xué)效應(yīng)。結(jié)合SOD、MDA檢測(cè)結(jié)果，說明硝酸異山梨酯后處理的心肌保護(hù)性可能是通過減少活性氧的產(chǎn)生、增強(qiáng)心肌抗氧化能力實(shí)現(xiàn)的。以上結(jié)果共同說明，IPostC及PPostC均可減輕心肌再灌注損傷，且兩者的保護(hù)作用相當(dāng)。綜上所述，硝酸異山梨酯后處理可以縮小心肌梗死面積和減少心肌酶的釋放，故硝酸異山梨酯后處理對(duì)心肌IRI具有保護(hù)作用。硝酸異山梨酯的心肌保護(hù)作用機(jī)制可能與減少活性氧的產(chǎn)生及提高心肌的抗氧化能力有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)也存在局限性。首先，何種劑量的硝酸異山梨酯既能產(chǎn)生心肌保護(hù)作用又不至于造成嚴(yán)重的氧化應(yīng)激尚需進(jìn)一步討論。由于本實(shí)驗(yàn)例數(shù)較少，未設(shè)置不同劑量組進(jìn)行比較，不能明確保護(hù)效果最佳的劑量。其次，本實(shí)驗(yàn)選用的大鼠均為成年健康大鼠，硝酸異山梨酯后處理在老年大鼠中的心肌保護(hù)性如何也不清楚。臨床上，大部分的心肌梗死患者為老年人，同時(shí)合并多種疾病，服用多種藥物。疾病狀態(tài)以及其他藥物對(duì)硝酸異山梨酯后處理有無影響也不得而知。再其次，硝酸異山梨酯后處理對(duì)心功能的遠(yuǎn)期影響也待闡明。同時(shí)，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用于臨床，還需考慮不同缺血時(shí)間、側(cè)支循環(huán)、性別等，這些都是非常關(guān)鍵、值得深入研究的內(nèi)容。以后可以就上述幾個(gè)問題進(jìn)一步研究硝酸異山梨酯的心肌保護(hù)作用及其機(jī)制。

（本文圖片見后插二）

［1］Piper HM，Garcia-Dorado D，Ovize M.A fresh look at reperfusion injury.Cardiovasc Res，1998，38：291-300.

［2］Yellon DM，Hausenloy DJ.Myocardial reperfusion injury.N Engl J Med，200，357：1121-1135.

［3］Zhao ZQ，Corvera JS，Halkos ME，et al.Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion：comparison with ischemic preconditioning.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2003，285：H579-588.

［4］Staat P，Rioufol G，Piot C，et al.Postconditioning the human heart.Circulation，2005，112：2143-2148.

［5］Hale SL，Dave RH，Kloner RA.Regional hypothermia reduces myocardial necrosis even when instituted after the onset of ischemia.Basic Res Cardiol，1997，92：351-357.

［6］McGovern PG，Pankow JS，Shahar E，et al.Recent trends in acute coronary heart disease——mortality，morbidity，medical care，and risk factors.The Minnesota Heart Survey Investigators.N Engl J Med，1996，334：884-890.

［7］Yang XM，Proctor JB，Cui L，et al.Multiple，brief coronary occlusions during early reperfusion protect rabbit hearts by targeting cell signaling pathways.J Am Coll Cardiol，2004，44：1103-1110.

［8］Kloner RA，Rezkalla SH.Preconditioning，postconditioning andtheir application to clinical cardiology.Cardiovasc Res，2006，70：297-307.

［9］Griendling KK，Alexander RW.Oxidative stress and cardiovascular disease.Circulation，1997，96：3264-3265.

［10］Vinten-Johansen J，Zhao ZQ，Zatta AJ，et al.Postconditioning——A new link in nature's armor against myocardial ischemia-reperfusion injury.Basic Res Cardiol，2005，100：295-310.

［11］Liu BS，Xu F，Wang JL，et al.The cardioprotection of ischemic postconditioning in patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention.Int J Cardiol，2015，178：181-183.

［12］Khan AR，Binabdulhak AA，Alastal Y，et al.Cardioprotective role of ischemic postconditioning in acute myocardial infarction：a systematic review and meta-analysis.Am Heart J，2014，168：512-521.e4.

［13］Zhou C，Yao Y，Zheng Z，et al.Stenting technique，gender，and ageareassociated with cardioprotection byischaemic postconditioning in primary coronary intervention：a systematic review of 10 randomized trials.Eur Heart J，2012，33：3070-3077.

［14］孫海燕.一氧化氮與心肌缺血再灌注損傷和丙泊酚心肌保護(hù)效應(yīng)關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士論文集.2004.

［15］Sato H，Zhao ZQ，McGee DS，et al.Supplemental L-arginine during cardioplegic arrestand reperfusion avoids regional postischemic injury.J Thorac Cardiovasc Surg，1995，110：302-314.

［16］Hiramatsu T，F(xiàn)orbess JM，Miur T，et al.Effects of L-arginine and L-nitro-arginine methyl ester on recovery of neonatal lamb hearts after cold ischemia.Evidence for an important role of endothelial production of nitric oxide.J Thorac Cardiovasc Surg，1995，109：81-86；discussion 87.

［17］Vinten-Johansen J，Zhao ZQ，Nakamura M，et al.Nitric oxide and the vascular endothelium in myocardial ischemiareperfusion injury.Ann N Y Acad Sci，1999，874：354-370.

［18］Rakhit RD，Marber MS.Nitric oxide：an emerging role in cardioprotection?Heart，2001，86：368-372.

［19］Page DL，Caulfield JB，Kastor JA，et al.Myocardial changes associated with cardiogenic shock.N Engl J Med，1971，285：133-137.

［20］Sobel BE，Bresnahan GF，Shell WE，et al.Estimation of infarct size in man and its relation to prognosis.Circulation，1972，46：640-648.

［21］Collinson PO，Gaze DC.Biomarkers of cardiovascular damage.Med Princ Prac，2007，16：247-261.

［22］Liu JX，Li XZ，Ma XB，et al.Cardio-protective effects of Corocalm on acute myocardial ischemia/reperfusion injury in rats.Chin J Integr Med，2006，12：199-202.

［23］吳其夏，余應(yīng)年，盧建，主編.病理生理學(xué).第2版.北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2003：247-296，99-117.

Cardioprotective effect of isosorbide dinitrate postconditioning against rat myocardial ischemia-reperfusion injury in vivo

LIU Pan＊，HU Meng-fen，ZHAO Xin-wen，et al.＊Geriatric Medicine，Dalian Medical University，Qingdao Municipal Hospital，Dalian 116000，China

SONG Da-lin，E-mail：billy_mei@126.com

Objective To investigate the cardioprotective effect of isosorbide dinitrate（ISDN）postconditioning against rat myocardial ischemia-reperfusion injury in vivo and provide a theoretical basis for the application of the new mode of nitrates postconditioning in clinic.Methods A rat of heart ischemia-reperfusion injury was established.32 male Wistar rats，SPF，10-12 weeks，were randomly divided into four groups as follows:the sham group；the ischemia/reperfusion group（I/R group）；ischemic postconditioning group（IPostC group）；ISDN group（PPostC group）.Infarct size was measured at the end of experiment and the levels of serum of cTnI，MDA and SOD were detected by Elisa.Results ⑴There were no significant differences of ischemic sizes between different groups.The myocardial infarct size in IPostC group and PPostC group were significantly decreased compared with I/R group（P＜0.05），（41.015±1.037）%，（38.129±0.726），（52.190±1.216）%respectively；and there was no significant difference between IPostC group and PPostC group（P=0.057）.⑵Compared with sham group，the levels of cTnI in I/R group，IPostC group and PPostC group were significantly increased （P＜0.05）.Compared with I/R group，the levels of cTnI in IPostC group and PPostC group were significantly decreased（P＜0.05）.However，therewas no significant difference between IPostC group and PPostC group.⑶Compared with sham group，the levels of MDA in I/R group，IPostC group and PPostC group were significantly increased；the levels of SOD were significantly decreased（P＜0.05）.Compared with I/R group，IPostC and PPostC could decrease the level of MDA effectively and increase the level of SOD（both P＜0.05）.Conclusion ⑴Ischemic postconditioning can relieve the ischemia-reperfusion injury.⑵ISDN postconditioning can induce the similar cardioprotective effect as IPostC.⑶The potential mechanisms of cardioprotection of ISDN postconditioning may relate to the improvement of myocardial antioxidant capacity and reduction of the generation of reactive oxygen species.

Ischemia/reperfusion injury； Ischemic postconditioning； Cardioprotection； Isosorbide dinitrate

中國醫(yī)師協(xié)會(huì)探索心血管研究基金（項(xiàng)目編號(hào)：DFCMDA201303）

作者單位：116000 遼寧省大連市，大連醫(yī)科大學(xué)；青島市市立醫(yī)院老年內(nèi)科（劉盼、柳雯、宋達(dá)琳），急診科（趙新聞）濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院老年內(nèi)科（胡孟芬）

宋達(dá)琳，E-mail：billy_mei@126.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2017.09.023

Q95-33；R542.2

A

1672-5301（2017）09-0858-05

2017-04-05）