陳燕文，王玲娜，梁從蓮，劉謙，李佳，胡晶紅，張永清

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

·中藥農(nóng)業(yè)·

干燥方法對金銀花多糖含量的影響△

陳燕文，王玲娜，梁從蓮，劉謙，李佳，胡晶紅，張永清*

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

比較五種不同干燥方法對金銀花多糖含量的影響。方法：把同一地區(qū)的同一金銀花品種，分別采用硅膠陰干法、烘房烘干法、殺青干燥法、自然曬干法和冷凍干燥方法進(jìn)行干燥，得到硅膠陰干品、烘房烘干品、殺青干燥品、自然曬干品和真空冷凍干燥品。用20倍量的95%乙醇在60 ℃條件下預(yù)處理2次(每次1小時)，棄濾液，殘渣用超聲輔助熱水提取法提取，提取液經(jīng)過sevage法除蛋白精制，苯酚-硫酸法測定金銀花多糖的含量。結(jié)果：殺青干燥品金銀花多糖含量最高，為14.57%，冷凍干燥品金銀花多糖含量次之，為13.31%，硅膠陰干品金銀花多糖含量最低，僅為11.29%。結(jié)論：結(jié)合對金銀花的已有研究，從金銀花多糖含量方面考察，得出殺青干燥法為金銀花的最佳干燥方式。

金銀花，多糖含量，干燥方法

金銀花是中醫(yī)臨床最常應(yīng)用的中藥材之一，系忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花[1]，含有綠原酸、三萜皂苷、黃酮和多糖等多種成分，具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱、抗菌、抗炎解熱、抗氧化和利膽保肝等藥理活性，用于治療外感風(fēng)熱、溫病初起、紅腫熱痛、瘡瘍和便膿血等病癥[2]。多糖作為維持動植物機(jī)體正常生命活動的基礎(chǔ)物質(zhì)之一，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗菌、抗氧化和抗病毒等活性[3]，在金銀花中有著較高含量。在進(jìn)行金銀花藥材質(zhì)量評價時，常以綠原酸、木犀草苷等成分含量作為指標(biāo)。為全面衡量藥材質(zhì)量，考察的成分種類越多越好。雖然多糖屬于重要的活性成分，但至今為止未見將多糖含量作為評價金銀花藥材質(zhì)量指標(biāo)的報道[4-5]。本文研究了干燥方法對金銀花多糖含量的影響。

1 材料、試劑與儀器

1.1材料

金銀花藥材：采自山東省平邑縣鄭城鎮(zhèn)山東雙花制藥有限公司金銀花GAP基地，花期采摘植株上的二白期花蕾，混勻后，分成5份，分別采用硅膠陰干、曬干、烘箱烘干、真空冷凍干燥和殺青干燥等方法進(jìn)行干燥[6-9]。①曬干，將鮮金銀花均勻撒鋪在干燥潔凈的曬筐內(nèi)，厚度為1～2cm，在陽光直射的地方晾曬至干。②硅膠干燥，將鮮金銀花放進(jìn)盛有干燥硅膠的保鮮盒內(nèi)，加蓋密封，至干燥。③烘箱烘干，把鮮金銀花均勻鋪放在不銹鋼托盤內(nèi)，厚度為2～3cm，置于50℃烘箱內(nèi)烘干。④真空冷凍干燥，將鮮金銀花鋪放在不銹鋼托盤內(nèi)，厚度為3～5cm，放于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，打開凍干倉約4h至溫度降至-45.0℃，關(guān)閉凍干倉，打開真空泵，當(dāng)壓強(qiáng)降至200pa以下時，打開循環(huán)泵、電加熱，約8h，至干燥后關(guān)閉凍干機(jī)，出料。⑤殺青干燥，將鮮金銀花放入到殺青干燥機(jī)內(nèi)，用高溫蒸汽滅活3～5min，使酶完全滅活，然后再平鋪到不銹鋼托盤內(nèi)，厚度2～3cm，晾干表面水分，再置入70℃烘箱內(nèi)烘干。將干燥的金銀花密封，置于陰涼干燥處備用。

藥材經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定，確認(rèn)為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾。

1.2試劑

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，無水乙醇，丙酮，氯仿，正丁醇，濃硫酸，苯酚等。均為分析純。

1.3儀器

HH6數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司)，LE204E/02電子天平(梅特勒-托利多公司)，KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，GLF-500型恒溫干燥箱(天津市萊博特瑞儀器設(shè)備有限公司)，TDZ4-WS臺式提速離心機(jī)(長沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水真空泵(鞏義市英峪高科儀器廠)，UV5100B型紫外分光光度計(上海元析儀器有限公司)，真空冷凍干燥機(jī)(日照市凱良食品設(shè)備有限公司)。

2 金銀花多糖含量測定方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精確稱取在105℃條件下干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品500mg，溶解到盛有一定量的蒸餾水的小燒杯中，然后轉(zhuǎn)移到100mL的容量瓶中定容至刻度，配成5.0mg·mL-1的葡萄糖溶液，隨后吸取1.0mL轉(zhuǎn)移至另一100mL的容量瓶中加蒸餾水定容，配制成0.05mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2.2多糖提取與精制

采用超聲輔助熱水提取法提取金銀花多糖。具體步驟為[10-12]：取上述5種方法干燥的金銀花，粉碎，過40目篩，分別準(zhǔn)確稱取1.0g，裝入圓底燒瓶中，加入20倍量95%乙醇，60℃水浴提取1h，抽濾，濾渣按上述方法再提取1次[13]，最后用無水乙醇和丙酮分別洗滌3次，所得預(yù)處理后的金銀花粉中加入50倍量蒸餾水，50℃超聲振蕩20min，后在90℃水浴加熱浸提3h，趁熱用真空泵抽濾除去不溶性雜質(zhì)，然后在濾液中加入1/5體積氯仿和氯仿1/5體積的正丁醇，充分震蕩3～5min，在4000r·min-1轉(zhuǎn)速下離心，除去有機(jī)層，上清液加入上述體積的氯仿和正丁醇重復(fù)5次操作。然后把上清液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，然后分別吸取1.0mL加入50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，放置備用。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 用移液槍精確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL分別加入5只干燥潔凈的試管中，再用移液槍移取1.6、1.2、0.8、0.4、0mL的蒸餾水加入對應(yīng)的試管中，搖勻。準(zhǔn)確移取1.0mL5.0%的苯酚溶液加入每只試管中，搖勻后迅速加入5.0mL濃硫酸，搖勻，在50℃的水浴鍋中保溫反應(yīng)10～15min。另取一只潔凈干燥的試管加入2.0mL的蒸餾水，按上述步驟分別加入1.0mL1.0%的苯酚和5.0mL濃硫酸做空白組。在490nm波長的紫外分光光度計下測吸光度，作標(biāo)準(zhǔn)曲線[14-15]，得出回歸方程：y=65.4x+0.057 7，R2=0.998 89，r=0.999 44說明在0.002 5～0.012 5 mg·mL-1的濃度范圍內(nèi)葡萄糖標(biāo)液的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖1。

2.3.2 重復(fù)性檢驗(yàn) 精確量取2.3項(xiàng)中提取所得烘干品溶液2.0 mL分別置于6只具塞試管中，余下操作按2.4.1項(xiàng)下進(jìn)行，最后于490 nm波長的紫外分光光度計下分別測定其吸光度。結(jié)果分別為0.463，0.459，0.446，0.453，0.471，0.461，求得RSD=1.87%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.3.3 精密度檢驗(yàn) 精確量取2.3項(xiàng)中提取所得烘干品溶液2.0 mL置于具塞試管中，余下操作按2.3.1項(xiàng)下進(jìn)行，最后于490 nm波長的紫外分光光度計下連續(xù)測定6次吸光度。結(jié)果分別為0.472，0.467，0.469，0.471，0.469，0.473，求得RSD=0.47%，說明該方法精密度良好。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精確量取2.3項(xiàng)下提取所得烘干法干燥品溶液2.0 mL置于一具塞試管中，余下操作按2.3.1項(xiàng)下進(jìn)行。于60 min內(nèi)每10 min測1次吸光度，測定過程中待測溶液始終置于50 ℃的水浴鍋內(nèi)保溫。結(jié)果分別為：0.462，0.467，0.461，0.465，0.463，0.464，求得RSD=0.46%，說明該方法穩(wěn)定性良好。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 精確吸取已知含量的2.3項(xiàng)中所得烘干法的干燥品溶液1.0 mL分別置于6只具塞試管中，再精確量取濃度為0.05 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL依次加入上述6只試管中，余下操作按2.3.1項(xiàng)下進(jìn)行，最后于490 nm波長的紫外分光光度計下測定吸光度，結(jié)果如表1。

2.5多糖含量測定

取2.3項(xiàng)中提取的各干燥品的金銀花多糖溶液2.0mL，按照2.4.1項(xiàng)中制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法依次加入1.0mL5.0%的苯酚和5.0mL濃硫酸在490nm波長的紫外燈下測吸光度，把測得的吸光度代入回

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

歸方程中，求出各樣品的濃度，再根據(jù)濃度計算各樣品中多糖的百分含量，結(jié)果如表2。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，殺青干燥法所得的金銀花多糖含量最高，為14.57%，冷凍干燥法所得金銀花含糖量次之，為13.31%，曬干品和烘干品含量較低分別為12.52%和12.30%，而硅膠陰干法所得金銀花多糖含量最低，為11.29%。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

研究表明，金銀花多糖具有抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖血脂等藥理活性。文獻(xiàn)報道不同干燥方法獲得的金銀花中的綠原酸、黃酮類和皂苷類化合物的含量差異較大[4-5]，然而很少有研究者考察從多糖方面來考察金銀花的質(zhì)量控制。本文基于對金銀花多糖的已有研究，通過考察不同干燥方法對金銀花多糖含量的影響，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)金銀花多糖的強(qiáng)極性，利用相似相容性原理采用超聲輔助熱水提取法提取金銀花多糖，實(shí)驗(yàn)過程中為了提高多糖的提取率，采取增加溶劑水的倍數(shù)和延長提取時間的方法提取多糖成份，利用Sevage法除去多糖中的蛋白質(zhì)，苯酚-硫酸法測定多糖含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出殺青干燥法所得金銀花多糖含量最高，達(dá)到了14.57%，冷凍干燥法所得金銀花多糖含量次之，為13.31%，而硅膠陰干法多糖含量最低僅為11.29%。2015版國家藥典規(guī)定，金銀花的質(zhì)量控制主要考察黃酮和綠原酸的含量，為增強(qiáng)本論文結(jié)論的說服力，參考已有研究宋健等[9]以綠原酸、木犀草苷的含量為指標(biāo)，考察了金銀花最佳產(chǎn)地加工方法，得出殺青干燥法金銀花干燥品中二者的含量分別比鮮品曬干高12.8%、24.9%，比鮮品陰干高7.8%、54.3%；熊艷等[16]通過HPLC指紋圖譜比較同一采收期同一品種不同干燥技術(shù)對金銀花品質(zhì)的影響，結(jié)果殺青干燥法金銀花綠原酸含量最高，達(dá)6.90%；汪冶等[17]以綠原酸含量和金銀花藥材外觀綜合考察湘蕾金銀花的最佳干燥方式，結(jié)果顯示殺青干燥法為金銀花的最佳干燥方法；本實(shí)驗(yàn)通過考察干燥方式對金銀花多糖含量的影響也得出殺青干燥法為金銀花最佳干燥方式。得出這樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可能原因?yàn)椋瑲⑶喔稍锓ń?jīng)過快速升溫階段達(dá)到高溫，高溫對金銀花中多種酶進(jìn)行滅活，使在以后干燥過程中減少酶解對多糖、綠原酸和木犀草苷等的降解。真空冷凍干燥法整個干燥過程大多數(shù)時間都是較低的溫度下進(jìn)行的，而低溫條件不利于酶的降解活動，所以真空冷凍干燥法所得金銀花多糖含量較高。陰干法是在較溫和的條件下干燥，此條件有利于酶降解多糖，所以多糖含量最低。結(jié)合對金銀花的已有研究，從金銀花多糖含量考察金銀花質(zhì)量，結(jié)果得出殺青干燥法為金銀花最佳干燥方式。

金銀花多糖的開發(fā)研究尚處于起步階段，本研究僅考察不同干燥方式對金銀花多糖的含量的影響，今后的課題方向?qū)⒅攸c(diǎn)研究金銀花多糖的純化及藥理活性，闡明其活性機(jī)理，為金銀花的深入研究和綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

[1] 宋亞玲，王紅梅，倪付勇，等.金銀花中酚酸類成分及其抗炎活性研究[J].中草藥，2015，46(4)：490-495.

[2] 張志美，郭時金，付石軍，等.金銀花活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].家畜生態(tài)學(xué)報，2013，34(6)：89-91.

[3] 何余堂，潘孝明.植物多糖的結(jié)構(gòu)與活性研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2010，31(17)：493-496.

[4] 霍文杰，李衛(wèi)民，高英.干燥方法對金銀花中綠原酸、木犀草苷及總黃酮含量的影響[J].廣東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，30(5)：737-741.

[5] 王玲娜，張金，劉紅燕，等.金銀花質(zhì)量影響因素分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，11(25)：159-161，164.

[6] 陳德經(jīng).干燥方法對金銀花的質(zhì)量影響研究[J].食品科學(xué)，2006，27(11)：277-279.

[7] 彭菊艷，龔月樺，王俊儒，等.不同干燥技術(shù)對金銀花藥用品質(zhì)的影響[J].西北植物學(xué)報，2006，26(10)：2044-2050.

[8] 趙金娟，路俊仙，王萌，等.不同加工方法對金銀花質(zhì)量的影響[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，27(5)：6-8，79.

[9] 宋健，張會敏，石俊英.金銀花最佳產(chǎn)地加工方法—?dú)⑶嗪娓筛稍锓╗J].中藥材，2008，31(4)：489-491.

[10]劉光海.金銀花多糖的提取、精制及含量測定[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，29(11)：33-34.

[11]毛淑敏，許家珍，周帥飛，等.苯酚-硫酸法聯(lián)合DNS法測定金銀花不同花期多糖的含量[J].中南藥學(xué)，2015，13(1)：65-67.

[12]謝三都，熊榮華.響應(yīng)面法優(yōu)化金銀花水溶性多糖提取工藝條件[J].農(nóng)產(chǎn)品加 工，2013(1)：38-41.

[13]吳振，李紅，羅揚(yáng)，等.不同干燥方式對銀耳多糖理化特性及抗氧化活性的影響[J].食品科學(xué)，2014，35(13)：93-97.

[14]惠秋沙.蒽酮—硫酸法測定桑葚烏發(fā)粥中粗多糖的含量[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2011(10)：105-107.

[15]孫林芳，馮冰，朱亞珍，等.羅勒多糖含量測定方法研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，39(5)：464-467.

[16]熊艷，高慧敏，王智民，等.金銀花不同干燥技術(shù)HPLC指紋圖譜研究[J].中國中藥雜志，2009，34(8)：1015-1017.

[17]汪冶，肖聰穎，梅樹模，等.湘蕾金銀花最佳采收時間和干燥方法的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(3)：612-613.

Effect of Different Drying Methods on Content of Polysaccharide fromFlosLonicerae

CHEN Yanwen，WANG Lingna，LIANG Conglian，LIU Qian，LI Jia，HU Jinghong，ZHANG Yongqing*

(Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)

Objective：To compare the influence of five different drying methods on Flos Lonicerae polysaccharide content.Methods：The Flos Lonicerae collected from the same area of the same species，using different drying methods for drying including silica drying，room drying，fixing dry，natural sun drying and vacuum freeze-drying.With 20 times the amount of 95% ethanol preteatment 2 times at 60 ℃(1 hour each)，the filtrate was discard，the residue was extracted with ultrasonic assisted hot water method，the polysaccharide was purified through sevage method to eliminate the protein，F(xiàn)los Lonicerae polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method.Result：The fixing dry product Flos Lonicerae polysaccharide content was the highest，reaching 14.57%，freezing dry goods Flos Lonicerae polysaccharide content followed with the content of 13.31%，silicone dry goods Flos Lonicerae polysaccharide was minimum with the content of 11.29%.Conclusion：Combined with the existing research on Flos Lonicerae from the aspect of Flos Lonicerae polysaccharide content，fixing dry method is the best way to dry Flos Lonicerae.

Flos Lonicerae；content of polysaccharide；drying methods

國家科技支撐計劃“金銀花規(guī)范化種植基地優(yōu)化升級及系列產(chǎn)品綜合開發(fā)研究”(2011BAI06B01)課題；山東省科技發(fā)展計劃項(xiàng)目“山東道地藥材資源質(zhì)量控制科技平臺建設(shè)”課題(2008GG2NS02022)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系中草藥產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)項(xiàng)目(2015)

] 張永清，教授，研究方向：中藥資源及其質(zhì)量控制；E-mail：zyq622003@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.018

2016-04-10)

*[