郭 艷 于 磊 趙曉蘭

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腎內(nèi)科,呼和浩特,010010)

百令膠囊對糖尿病腎病胰島素抵抗及VEGF的影響

郭 艷 于 磊 趙曉蘭

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腎內(nèi)科,呼和浩特,010010)

目的：觀察早期糖尿病腎病胰島素抵抗情況、VEGF表達(dá)水平以及百令膠囊的干預(yù)治療效應(yīng)。方法:選取2014年12月至2016年12月內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院收治的早期糖尿病腎病患者80例,隨機(jī)分為對照組和觀察組,每組40例,2組均接受控制血糖、調(diào)脂、控制血壓、抗血小板聚集等綜合治療,觀察組在上述基礎(chǔ)治療上加用百令膠囊,2組患者均以8周為療程,治療前后比較2組患者中醫(yī)證候積分、血糖、血壓、脂代謝、VEGF濃度變化情況。結(jié)果:1)治療后2組患者中醫(yī)證候積分均有所下降,其中觀察組下降的趨勢更為明顯(P<0.05);2)治療前2組脂代謝水平相仿,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),經(jīng)過治療后2組患者TC、TG、LDL-C均較治療前明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),HDL-C水平有明顯提升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中觀察組改善的幅度較對照組明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);3)百令膠囊可明顯改善早期糖尿病腎病患者腎功能指標(biāo)及胰島素抵抗情況,與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);4)與對照組比較,百令膠囊更可明顯下調(diào)早期糖尿病腎病機(jī)體VEGF的水平及足細(xì)胞數(shù)量,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:百令膠囊可明顯糾正糖尿病腎病患者胰島素抵抗現(xiàn)象,并進(jìn)一步改善患者腎功能及脂代謝水平,其作用機(jī)制可能與下調(diào)VEGF有關(guān)。

糖尿病腎病;百令膠囊;胰島素抵抗;脂代謝;VEGF

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是臨床糖尿病主要的慢性并發(fā)癥之一,隨著發(fā)病率的逐年增長,DN已然成為我國終末期腎病的單一病兇。DN并發(fā)復(fù)雜的代謝紊亂,其發(fā)病機(jī)制目前尚無統(tǒng)一定論,但隨著研究的逐漸深入研究人員認(rèn)為患者內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙在DN中占據(jù)重要環(huán)節(jié),因此改善內(nèi)皮細(xì)胞功能可能在調(diào)節(jié)DN及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮核心作用[1-3]。

DN屬于中醫(yī)學(xué)“消渴”“水腫”“虛勞”等范疇,古代醫(yī)者認(rèn)為此病多為先天稟賦不足后天飲食、情志不節(jié),過違其度,病久傷津耗氣,氣損及陰陽,隨后肺主治節(jié)、腎關(guān)開闔失常,終致津液代謝紊亂、水濕內(nèi)聚而出現(xiàn)消渴、水腫、尿濁等臨床癥狀。病位雖在五臟,但主要與肺腎關(guān)系密切。百令膠囊是冬蟲夏草的中成藥提取物,是具有補(bǔ)肺腎,益精氣之功效的補(bǔ)益劑,現(xiàn)代藥理學(xué)亦證實(shí)百令膠囊具有多重藥理活性。本團(tuán)隊(duì)利用百令膠囊對早期DN患者進(jìn)行治療,證實(shí)其對早期DN有理想療效,并且進(jìn)一步對其作用機(jī)制進(jìn)行分析,具體情況報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年12月至2016年12月內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院收治的早期DN患者80例,隨機(jī)分為對照組和觀察組，每組40例。2組患者在年齡、性別、病程和血肌酐等資料方面比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 所有患者診斷符合我國于2000年制定《中國2型糖尿病防治指南》中關(guān)于糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。中醫(yī)證型診斷標(biāo)準(zhǔn):參照中華醫(yī)學(xué)會與2000年頒布的《慢性腎病中醫(yī)辨證分型診斷準(zhǔn)》[4]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 1)根據(jù)Mogensen關(guān)于DN的分期:將UAER波動于20～200 μg/min設(shè)定為DN早期患者;2)近3個(gè)月內(nèi)均無服用百令膠囊史;3)無明顯心、腦、肝臟、胃腸道、血液系統(tǒng)合并病史;4)無其他類型腎病、自身免疫性疾病史;5)知情同意并簽署知情同意書者。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)合并明顯心、腦、肝臟、血液系統(tǒng)等疾病者;2)有明顯感染癥狀者;3)其他原因?qū)е履I功能損害者;4)哺乳期及孕婦;5)不予簽署知情同意書者。

1.5 脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn) 1)正在參加其他臨床試驗(yàn)的患者;2)取得隨機(jī)號,但未接受全部療程治療的患者;3)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)被誤入的患者;4)研究過程中出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥或出現(xiàn)病情惡化,需采取緊急措施者。

1.6 治療方法 2組患者均接受DN內(nèi)科常規(guī)治療,主要有:均進(jìn)行糖尿病飲食,根據(jù)體重及活動量計(jì)算碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)的攝入量,并維持電解質(zhì)平衡。使用口服或者胰島素皮下注射進(jìn)行血糖控制,監(jiān)測血壓發(fā)現(xiàn)合并高血壓者根據(jù)患者自身情況選用ACI、ARB或者鈣離子拮抗劑進(jìn)行控制血壓。選用阿托伐他汀鈣(Pfizer Ireland Pharmaceuticals生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字2J1005200)進(jìn)行血脂調(diào)控,20 mg/片,1片/次,1次/d。使用阿司匹林腸溶膠囊(Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.生產(chǎn),批準(zhǔn)文號13019202)100 mg/片,1片/次,1次/d,或者硫酸氫氯吡格雷片(深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字H520120035)75 mg/片,1片/次,1次/d,進(jìn)行抗血小板聚集。觀察組在上述內(nèi)科基礎(chǔ)治療上加用百令膠囊(杭州中美東華制藥有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字Z10910036),3粒/次,3次/d。2組均以8周為1個(gè)療程。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 觀察2組中醫(yī)證候積分變化 每一癥候得分是將診斷這一證候的各項(xiàng)所得最高分相加而成。滿分均為30分。輕度7～14分;中度15～22分;重度≥23分。

1.7.2 觀察2組腎功能、血脂代謝及血糖指標(biāo)的變化 檢測治療前后血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿蛋白排泄率(UAER)、糖基化血紅蛋白(HbAlc)、餐后2 h血糖(FPG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、三酰甘油(TG)的水平。

1.7.3 Western blotting血VEGF水平 2組患者都需采集10 mL空腹外周肘靜脈血進(jìn)行分析。靜置患者的外周靜脈血0.5 h后放置在離心機(jī)中離心,速度為3 000 r/min,時(shí)間為10 min,最后分離血清。加入Ficoll人淋巴細(xì)胞分離液分離出單核細(xì)胞,隨后進(jìn)行細(xì)胞裂解,并再次將裂解液放置在離心機(jī)中離心,速度為3 000 r/min,時(shí)間為10 min,摒棄上清液后利用碧云天BCA試劑盒進(jìn)行蛋白濃度測定,并計(jì)算上樣量。隨后用電泳進(jìn)行蛋白跑膠,轉(zhuǎn)膜,封閉等程序后加入1∶500稀釋的一抗(VEGF)及內(nèi)參抗體(β-acting,1∶3 000)室溫孵育2 h,后加入辣根過氧化酶HRP-二抗,最后進(jìn)行顯影、拍照、統(tǒng)計(jì)分析。

表1 2組患者一般資料比較

表2 2組腎功能、血脂代謝及血糖指標(biāo)的變化的比較

注:與治療前對照組比較*P<0.05,與對照組治療后比較△P<0.05

1.7.4 檢測尿足細(xì)胞數(shù)的變化 收集2組患者晨尿中段尿50 mL,利用免疫組化法進(jìn)行足細(xì)胞蛋白PCx的測定,將待染玻片用PBS沖洗后浸泡于1%Tritonx-100 5 min,隨后用1%牛血清白蛋白進(jìn)行封閉,室溫條件下靜置30 min,后加入1∶100稀釋的一抗(PCx)及內(nèi)參抗體(β-acting,1∶3 000)室溫孵育過夜,后加入標(biāo)記的二抗,最后顯微鏡下進(jìn)行拍照,棕色顯影為陽性組細(xì)胞,每張玻片隨機(jī)拍照5個(gè)視野,記錄完整玻片內(nèi)的足細(xì)胞數(shù)。

2結(jié)果

2.1 2組中醫(yī)證候積分比較 經(jīng)過為期8周的治療,2組患者的中醫(yī)證候積分均較治療前有所下降,對照組:治療前(32.34±2.1)分,治療后(16.24±1.5)分,組內(nèi)比較t=3.27,P=0.034。觀察組:治療前(31.83±1.9)分,治療后(11.33±1.1)分,組內(nèi)比較t=2.91,P=0.028。治療后2組比較t=2.37，P=0.011。

2.2 2組治療后腎功能、血脂代謝及血糖指標(biāo)的變化 治療前2組脂代謝水平相仿,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),經(jīng)過治療后2組患者TC、TG、LDL-C均較治療前明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),HDL-C水平有明顯提升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中觀察組改善的幅度較對照組明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外,百令膠囊可明顯改善早期DN患者腎功能指標(biāo)及胰島素抵抗情況,與對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 2組治療前后VEGF濃度變化比較 與對照組比較,百令膠囊更可明顯下調(diào)早期DN機(jī)體VEGF水平及足細(xì)胞數(shù)量,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、表3。

圖1 2組治療前后VEGF濃度變化比較

圖2 2組PCx蛋白的免疫組化結(jié)果

組別VEGF/內(nèi)參IOD比值對照組(n=40) 治療前228±014 治療后072±002?觀察組(n=40) 治療前257±011 治療后033±009?△

注:與治療前比較*P<0.05；與對照組比較△P<0.05

3討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為先天稟賦不足,后天飲食、情志不節(jié)或勞欲過度是DN的主要發(fā)病病因,本虛標(biāo)實(shí)是本病病性,所謂的本虛乃氣血陰陽之虛,而標(biāo)實(shí)則體現(xiàn)為痰濁、水濕等病理產(chǎn)物。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為氣陰兩虛貫穿DN及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的全過程,其他均為氣陰兩虛變證轉(zhuǎn)變而來。正如隋代醫(yī)者巢元方在其著作《諸病源候論》一書中指出:“消渴其久病變,或發(fā)癰疽,或成水疾”,宋朝趙佶在《圣濟(jì)總錄》一書中提出“消腎”之病名,“消渴病久,腎氣受傷,腎主水,腎氣虛衰,氣化失常,開闔不利,能為水腫”。故我們有理由相信DN是糖尿病病久所致,中醫(yī)認(rèn)為“久病入絡(luò)”,而腎臟是絡(luò)脈叢集之處,腎臟是DN的主要病位,因此治療DN的關(guān)鍵是補(bǔ)腎。五行學(xué)說中指出肺屬金,腎屬水,肺腎乃母子關(guān)系,故有金水相生之說,不論是在生理還是病理方面兩臟均相互影響。肺主治節(jié),是水上之源,腎主水,是水之下源,因此肺腎兩臟是參與津液水液代謝的主要臟腑?！额愖C治裁》一書中描述到:“肺為氣之主,腎為氣之根,肺主出氣,腎主納氣,陰陽相交,呼吸乃和”,因此古代即有“肺腎同源”一說,諸多疾病則應(yīng)肺腎同治[5-11]。故我們認(rèn)為補(bǔ)肺益腎的角度治療DN將是可行的,基于此,本團(tuán)隊(duì)利用百令膠囊對DN患者進(jìn)行治療,結(jié)果顯示百令膠囊對DN有理想的療效,其不但可以改善DN患者的中醫(yī)證候積分,還可明顯糾正DN患者胰島素抵抗現(xiàn)象,并進(jìn)一步改善患者腎功能及脂代謝水平,因此我們有理由相信肺腎兩臟是DN的主要病位所在,而百令膠囊則是治療DN的有效手段。冬蟲夏草是我國廣泛運(yùn)用的中藥,其性味甘平,可保肺腎,補(bǔ)精髓,對于肺腎兩虛及精血不足的病癥有理想的治療作用。而百令膠囊是由冬蟲夏草菌種經(jīng)低溫發(fā)酵制成,因此百令膠囊具有明顯補(bǔ)肺腎,益精氣之功效[12-15]。

在進(jìn)一步對百令膠囊作用機(jī)制的進(jìn)一步探析中我們對2組患者外周血VEGF及尿足細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示經(jīng)過為期8周的治療2組患者的VEGF濃度即足細(xì)胞數(shù)量均有不同程度的下調(diào),其中加服百令膠囊的觀察組患者較對照組下降幅度更為明顯,因此我們認(rèn)為百令膠囊可有效干預(yù)DN的作用機(jī)制可能與下調(diào)VEGF及足細(xì)胞數(shù)量表達(dá)有關(guān)。VEGF屬于內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,在正常情況下VEGF可以較低的濃度維持機(jī)體血管的完整性,VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞上酪氨酸激酶受體產(chǎn)生酶效應(yīng)后發(fā)揮維持血管細(xì)胞生物活性,但DN發(fā)生時(shí)機(jī)體產(chǎn)生微血管病變,則可刺激VEGF濃度上調(diào),而該因子的過表達(dá)則可導(dǎo)致血管通透性增加,從而出現(xiàn)蛋白尿的出現(xiàn),隨著疾病的進(jìn)展則可能導(dǎo)致腎功能受損,而這一病理患者已在動物模型研究得到證實(shí)[16-17],故降低VEGF的表達(dá)將是改善DN病情的關(guān)鍵。足細(xì)胞的損傷及脫落是早期DN病理變化的特征,足細(xì)胞的受損可導(dǎo)致腎小球基底膜黏附性下降,從而足細(xì)胞大量進(jìn)入原尿,PCx是標(biāo)志足細(xì)胞的蛋白,主要表達(dá)于足突頂膜區(qū),是維持腎小球電荷屏障的關(guān)鍵蛋白因子之一,本研究亦用PCx標(biāo)記足細(xì)胞,在本研究中我們發(fā)現(xiàn)2組DN患者治療前尿中有高表達(dá)的PCx,說明DN尿中存在大量足細(xì)胞,干預(yù)后2組患者尿中足細(xì)胞均減少,其中百令膠囊可進(jìn)一步減少DN患者尿中足細(xì)胞的表達(dá),說明百令膠囊可抑制足細(xì)胞的脫落,減少蛋白分子漏入原尿。

綜上所述,百令膠囊對于治療DN有積極價(jià)值,其作用機(jī)制可能通過下調(diào)VEGF及抑制足細(xì)胞表達(dá)實(shí)現(xiàn),臨床建議推廣運(yùn)用。

[1]林子桐,張超,沈雪梅,等.糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2014,28(5):765-773.

[2]?？∨?戴衛(wèi),辛寧,等.2型糖尿病患者糖尿病腎病與血脂相關(guān)性臨床研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012,18(25):100-101.

[3]李軍輝,程東生,王鋒,等.糖尿病腎病患者血脂異常與尿蛋白關(guān)系[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào),2016,50(3):478-482.

[4]中華中醫(yī)藥學(xué)會腎病分會.糖尿病腎病診斷、辨證分型及療效評定標(biāo)準(zhǔn)(試行方案)[J].上海中醫(yī)藥雜志,2007,41(7):7-8.

[5]呂仁和,趙進(jìn)喜,王越.糖尿病腎病臨床研究述評[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1994,7(2):2.

[6]趙進(jìn)喜,鄧德強(qiáng),李靖.糖尿病腎病相關(guān)中醫(yī)病名考辨[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2005,21(5):288-289.

[7]任愛華,闞方旭.糖尿病腎病三焦辨治[J].山東中醫(yī)雜志,2000,19(6):328-329.

[8]南征.消渴腎病(糖尿病腎病)研究[M].長春:吉林科學(xué)出版社,2001:3.

[9]郝東.糖尿病腎病中醫(yī)證治思路淺析[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2011,25(1):71-72.

[10]樸春麗,王秀閣,楊世忠.龍膽瀉肝湯加減治療Ⅳ期糖尿病腎病30例臨床研究[J].山東中醫(yī)雜志,2004,23(12):714-716.

[11]王秀珍.健脾固腎湯治療早期糖尿病腎病40例[J].浙江中醫(yī)雜志,2004,39(8):332-332.

[12]丁寶金,邱相君.蟲草真菌對機(jī)體的免疫漏節(jié)作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(1):17.

[13]程威英,是俊風(fēng),蔣更加.百令膠囊對慢性腎功能衰竭患者蛋白質(zhì)代謝的影響[J].上海中醫(yī)藥雜志,2009,10(7):39.

[14]王蘇婭,孟雪芹,陳江華,等.人工培養(yǎng)冬蟲夏草(百令膠囊)免疫抑制作用細(xì)胞因子及可溶性細(xì)胞間黏附因子-l調(diào)控機(jī)制探討[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2001,6(21):152-153.

[15]潘慧娟.百令膠囊治療慢性腎衰竭臨床觀察[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2007,23(3):345-346.

[16]徐剛,劉茂林,付珍春,等.血栓通聯(lián)合氨基胍治療對糖尿病大鼠腎組織血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響[J].中華內(nèi)科雜志,2009,48(7):586-588.

[17]萬長春.糖尿病腎病早期診斷的實(shí)驗(yàn)室研究進(jìn)展[J].臨床檢驗(yàn)雜志,1998,16(3)185-186.

(2017-06-28收稿 責(zé)任編輯：王明)

EffectsofBailingCapsuleonInsulinResistanceandtheVEGFofDiabeticNephropathy

Guo Yan, Yu Lei, Zhao Xiaolan

(DepartmentofNephrology,InnerMongoliaAutonomousRegionPeopleHospital,Hohhot010010,China)

Objective: To observe the insulin resistance, VEGF expression level of early diabetic nephropathy and the therapeutic intervention effects of Bailing capsule.Methods: A total of 80 patients with early diabetic nephropathy in our hospital from December 2014 to December 2016 were included in the study. They were randomly divided into control group and observation group, 40 cases in each group. Both of two groups

the comprehensive treatment of blood glucose control, lipid regulation, blood pressure control, antiplatelet aggregation and so on. While patients in the observation group additionally took bailing capsule on the basis of treatment above-mentioned. The two groups of patients both had 8 weeks for a treatment course. The changes of TCM syndrome integral, blood glucose, blood pressure, lipid metabolism and VEGF concentration of two groups were compared before and after the treatment.Results: 1) TCM syndrome integrals decreased both in two groups after treatment, the downward trend in the observation group was more obvious (P<0.05); 2) The lipid metabolism levels of two groups were similar before treatment and there was no statistically significant difference (P>0.05). The TC, TG, LDL-C of two groups significantly decreased after treatment and the differences were statistical significant (P<0.05). The HDL-C level significantly increased and the differences were statistical significant (P<0.05). Besides, the improvement range of the observation group was more obviously than the control group and the differences were statistically significant (P<0.05). 3) Bailing capsule could obviously improve the renal function indexes and insulin resistance of patients with early diabetic nephropathy and there were statistically significant differences compared with the control group (P<0.05). 4) Compared with the control group, Bailing capsule could obviously lower the levels of VEGF and podocyte number in early diabetic nephropathy of the body and the differences were statistically significant (P<0.05).Conclusion: Bailing capsule can obviously correct insulin resistance of diabetic nephropathy patients, and further improve patients′ renal function and lipid metabolism, and its mechanism may associated with the down-regulation of VEGF.

Diabetic nephropathy; Bailing capsule; Insulin resistance; Lipid metabolism; VEGF

內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院院內(nèi)項(xiàng)目(2016064)

R255.4;R256.5

：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.09.011

郭艷(1981.04—),女,碩士,副主任醫(yī)師，研究方向:中西醫(yī)結(jié)合治療腎損傷,E-mail:18047192709@163.com