郝晴晴 霍翠梅 商愛國(guó) （山東省濟(jì)寧市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 272100）

胡莉萍* （山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南）

朱瑞良* （山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 泰安）

膠體金免疫層析法與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)布魯氏菌的比較

郝晴晴 霍翠梅 商愛國(guó) （山東省濟(jì)寧市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 272100）

胡莉萍*（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟(jì)南）

朱瑞良*（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 泰安）

采集濟(jì)寧市某縣300個(gè)羊血清，選用2個(gè)廠家生產(chǎn)的布魯氏菌膠體金快速檢測(cè)試劑卡和試管凝集試驗(yàn)分別對(duì)采集的羊血清進(jìn)行檢測(cè)。比較2種布魯氏菌膠體金快速檢測(cè)試劑卡與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)布魯氏菌的陽性率，對(duì)檢測(cè)效果進(jìn)行比較。結(jié)果表明，這2個(gè)膠體金快速檢測(cè)試劑卡檢測(cè)的陽性率與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)的陽性率有所差異，因此，在選用市場(chǎng)上現(xiàn)有的布魯氏菌膠體金快速檢測(cè)試劑卡時(shí)，應(yīng)該與國(guó)標(biāo)試管凝集試驗(yàn)比較確定。

膠體金免疫層析法 試管凝集試驗(yàn) 布魯氏菌

布魯氏菌病(簡(jiǎn)稱布病)，是由布魯氏菌屬細(xì)菌引起的人畜共患的變態(tài)反應(yīng)性傳染病。牛、羊、豬等家畜最易感，對(duì)人有高度感染性和致病性。布病的危害非常嚴(yán)重，可導(dǎo)致多種動(dòng)物、尤其是牛羊豬發(fā)病，懷孕家畜流產(chǎn)、死胎，公畜睪丸炎；人感染之后也可以流產(chǎn)、發(fā)熱、出汗、渾身無力、全身疼痛等，給畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，給人類健康帶來威脅，影響社會(huì)安定。布病的確切診斷是控制布病的前提條件，目前檢測(cè)方法多種多樣，新的方法不斷出現(xiàn)，究竟哪種方法更加可靠，本試驗(yàn)比較了膠體金快速檢測(cè)卡與國(guó)標(biāo)試管凝集試驗(yàn)方法診斷布魯氏菌病的效果，為生產(chǎn)推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 來自濟(jì)寧市某縣6個(gè)規(guī)模化羊場(chǎng)，各場(chǎng)隨機(jī)采集50只羊血清(母羊30只、公羊20只)共采集300份羊血清，4°C保存被檢。

1.1.2 主要試劑及設(shè)備 兩個(gè)公司(A、B公司)生產(chǎn)的羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡、布魯氏菌平板凝集抗原、0.5%石炭酸生理鹽、移液器、試管、吸管。

1.2 檢測(cè)方法

將300只被檢羊血清分別作成1:25、1:50稀釋，分別進(jìn)行如下方法檢測(cè)：

1.2.1 試紙卡法 分別取1:50稀釋的300只被檢羊血清50微升，分別加入A、B公司生產(chǎn)的羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡加樣孔，室溫下放置5-10min判斷結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)A、B公司羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡使用說明，在出現(xiàn)C線結(jié)果的前提條件下，出現(xiàn)T線判為陽性；不出現(xiàn)T線判為陰性。

1.2.2 試管凝集試驗(yàn) 分別取1:25、1:50稀釋的300只被檢羊血清，根據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 18646-2002動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)進(jìn)行。判斷標(biāo)準(zhǔn)：1:50稀釋羊血清，出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，受檢血清判定為陽性，否則判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 試紙卡檢測(cè) A、B兩個(gè)公司生產(chǎn)的羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡檢測(cè)結(jié)果圖(見附圖)。

附圖 羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡檢測(cè)結(jié)果圖

2.2 試紙卡和試管凝集試驗(yàn) 采用A、B兩個(gè)公司生產(chǎn)的羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡和國(guó)標(biāo)試管凝集試驗(yàn)對(duì)6個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)的300份羊血清檢測(cè)結(jié)果見附表。

附表 300份羊血清布魯氏菌抗體檢測(cè)結(jié)果 (%)

3 討論與小結(jié)

（1）對(duì)300份羊血清布魯氏菌抗體檢測(cè)，采用A、B兩個(gè)公司生產(chǎn)的羊布魯氏菌抗體快速檢測(cè)試紙卡的陽性率分別為8.7%和10.0%，而采用試管凝集法檢測(cè)的陽性率為7.7%，并且所有試管凝集法檢測(cè)的陽性血清，采用A、B兩個(gè)公司快速檢測(cè)試紙卡均為陽性，A、B兩個(gè)公司檢測(cè)陽性率高出試管凝集法分別為1.0%和2.3%，A方法檢測(cè)的結(jié)果與試管凝集更接近，可能是試紙卡敏感性增強(qiáng)的原因，也可能存在少數(shù)的假陽性，有待于進(jìn)一步確定。（2）從試驗(yàn)過程看，試紙卡法用時(shí)較短，操作簡(jiǎn)單。而試管凝集方法過程相對(duì)復(fù)雜，對(duì)試驗(yàn)用品和器材有一定要求，且用時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)。但在布病監(jiān)測(cè)時(shí)建議還是先采用試管凝集方法為好。（3）膠體金免疫層析法與試管凝集試驗(yàn)均存在一定的局限性，一般情況下應(yīng)該先選用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行粗篩，然后，采用敏感度和特異性相對(duì)好一些的的診斷方法予以確定。膠體金免疫層析法雖然在方法上更簡(jiǎn)便，但是各個(gè)廠家生產(chǎn)的質(zhì)量不一樣，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在一定程度上的差異，建議在獸醫(yī)一線工作上要對(duì)此甄別。

[1] 孫濤, 趙寶, 冉紅志等. 布魯氏菌病病原學(xué)研究進(jìn)展[J]. 家畜生態(tài)學(xué)報(bào), 2014(1): 85-7.

[2] 劉兆春. 布魯氏菌病的臨床診斷與防制[J]. 現(xiàn)代畜牧獸醫(yī), 2005(5): 31.

[3] 徐紅. 牛布氏桿菌病的防治[J]. 畜禽業(yè), 2017(1): 102, 5.

[4] 谷玉靜, 尹麗華, 郝滿良. 布魯菌病的診斷與防控研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2014, 02: 110-114.

[5] 張改文, 史新濤, 郝衛(wèi)芳等. 布魯氏菌病三種診斷方法的比較[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫, 2013, 10: 38-40.

[6] 武玉香, 路晟, 柳家鵬. 牛布魯氏桿菌病的間接酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)[J]. 中國(guó)奶牛, 2011(5): 43-45.

[7] 王晶鈺, 張三東, 劉紅彥, et al. 布魯菌病多重PCR快速檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010(1): 5-9.

S852.61+4

A

1007-1733(2017)09-0003-02

2017–05–11）

十三五國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0500905)、 山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用創(chuàng)新項(xiàng)目、山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016GGH3115)和山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系羊產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-10-06)。

*通訊作者