陳鵬典 黎杰運 楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊 寧艷 劉芳

·實驗研究·

加味聚精食療方結合電針督脈對少弱精子癥大鼠附睪GPx和MDA的影響

陳鵬典 黎杰運 楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊 寧艷 劉芳

目的探討加味聚精食療方結合電針督脈對少弱精子癥大鼠附睪谷胱甘肽過氧化酶(GPx)和丙二醛(MDA)的影響。方法80只健康SD雄性大鼠, 隨機分為G1組(正常組)、G2組(模型組)、G3組(加味聚精食療方組)和G4組(加味聚精食療方聯合電針督脈組), 每組20只。除G1組常規(guī)飲食外, 其他組均采用雷公藤多甙片懸混液連續(xù)給予大鼠灌胃26 d造成少弱精子癥模型。G3組采用加味聚精食療方灌胃, G4組采用加味聚精食療方灌胃聯合電針督脈。觀察四組GPx活性降低及MDA水平。結果與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低, MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01) ；與G2組比較, G3組與G4組附睪GPx活性升高, MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。結論少弱精子癥大鼠附睪GPx活性降低, MDA 水平升高。加味聚精食療方聯合電針督脈可一定程度提高其附睪GPx 活性, 降低MDA水平,從而改善附睪微環(huán)境和調控效應, 加快精子成熟, 提高生育力。

少弱精子癥；加味聚精食療方；督脈

不育癥是男科常見疾病, 也是影響男女雙方身心健康世界性難題。據世界衛(wèi)生組織(WHO)調查表明, 從20世紀中期開始男性精子質量逐年呈下降趨勢。近年來的諸多研究表明, 中醫(yī)藥可通過調節(jié)細胞凋亡和途徑、促進精子能量代謝以及清除氧自由基等途徑改善精子質量［1］。也有研究認為,附睪精子氧化/抗氧化系統(tǒng)在生精細胞凋亡中起著重要的影響。本實驗通過測定出少弱精子癥大鼠附睪中GPx活性和MDA水平, 以附睪氧化/抗氧化系統(tǒng)作為切入點, 探討加味聚精食療方聯合電針督脈對少弱精子癥的作用機制, 現報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物健康SPF級SD大鼠 80只, 體重約200 g, 飲用自來水, 以標準飼料喂養(yǎng)。將其隨機分為G1組(正常組)、G2組(模型組)、G3組(加味聚精食療方組)和G4組(加味聚精食療方聯合電針督脈組), 每組20只。

1.2 模型制備雷公藤多甙片加雙蒸水配成5 mg/ml的懸混液。除G1組常規(guī)飲食外, 其他組均以懸混液20 mg/kg連續(xù)給予大鼠灌胃26 d制備少弱精子癥模型。G3組給予加味聚精食療方(深圳市中醫(yī)院制劑室制備)6.3 g/kg連續(xù)灌胃干預26 d, 1次/d。G4組給予加味聚精食療方6.3 g/kg連續(xù)灌胃聯合督脈電針干預26 d, 1次/d。穴位選取督脈穴位命門、腰陽關以及十七椎。采用電針儀疏密波刺激(疏波30 Hz, 密波100 Hz), 強度6～15 V, 以身體相應部位出現輕微顫動為準, 持續(xù)20 min。

1.3 指標測定受試大鼠在干預治療26 d后, 以5%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉, 剖開腹腔, 在無菌條件下快速取出大鼠雙側附睪組織, 加入冷生理鹽水, 采用眼科剪小心剪碎后放于組織勻漿器里, 待冰上勻漿15 min后, 3500 rpm/min離心15 min。取上清液制成10%的附睪勻漿液, 分光光度計比色法測算GPx和 MDA水平。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低,MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01) ；與G2組比較,G3組與G4組附睪GPx活性升高, MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。見表1。

表1 四組大鼠附睪中GPx活性和MDA水平比較

表1 四組大鼠附睪中GPx活性和MDA水平比較

注：與G1組比較,aP＜0.01；與G2組比較,bP＜0.01；與G3組比較,cP＜0.01

組別 只數 GPx(U/mg)MDA(nmol/mg)G1組 20 103.66±8.67 10.90±1.47 G2組 20 64.00±3.63a23.18±3.13aG3組 20 70.92±3.35ab18.16±1.57abG4組 20 80.79±5.72abc14.46±2.36abc

3 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)認為, 脾為先天之本, 而腎為后天之本。脾氣健旺是氣血化生之根源, 而腎之陰精是化生精液的物質基礎。因此, 對于稍弱精子癥的治療, 多從脾腎論治。前期研究［2-4］表明, 加味聚精食療方可上調少弱精子癥大鼠睪丸間質細胞表皮生長因子 (EGF)及其受體(EGFR)的表達水平, 改善大鼠曲細精管組織結構的受損狀態(tài), 從而提升其附睪精子密度、a級精子和精子總活率。本方主要由魚鰾、龜板膠、人參、枸杞和瘦豬肉組成, 選藥精煉, 組方嚴謹, 脾腎同治, 藥食聯合, 口感頗佳［5］。督脈為“陽脈之海”, 主統(tǒng)督陽氣, 起于胞中, 下出會陰, 乃生命之所系, 一身元氣之所在［6］。“其絡循陰器, 合篡間, 繞篡后, ……其男子循莖, 下至篡, 與女子等”,故督脈的絡脈循行陰莖。從西醫(yī)生理學以及解剖學角度上看,男性的低級性興奮和射精中樞均位于骶椎, 乃督脈循行, 故男性陰莖的勃起、射精反射均與督脈的功能有關。通過針刺督脈經穴如命門、腰陽關、十七椎等鼓動陽氣, 其陰莖勃起堅挺持久, 前列腺收縮有力, 性高潮時射精有勁, 快感顯著,提高其射精量。

少弱精子癥的病因和發(fā)病機制十分復雜, 近年來, 越來越多的研究表明, 氧自由基(ROS)與精子高活躍性運動獲能和頂體反應等生理功能以及精子活力下降和DNA氧化應激等病理機制密切相關。ROS產生過多是造成男性少弱精子癥的重要病因之一。正常狀態(tài)下, 精漿中存在的對抗活性氧的酶如GPx可清除ROS, 但脂質過氧化物生成的物質如MDA等具有細胞毒性, 可妨礙線粒體功能和諸多酶活性［7］。生理狀態(tài)下, 機體氧化/抗氧化系統(tǒng)基本處于平衡狀態(tài), 但在少弱精子癥狀態(tài)下, 活性氧的調控機制打破, 精子膜活性氧受體上調, 再加上細胞炎性因子的刺激, 導致活性氧生成異常增加。同時酶清除系統(tǒng)效率無相應的增多甚至下降, 導致活性氧損害精子功能, 引起少弱精［8-10］。

本研究結果顯示, 與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低, MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；與G2組比較, G3組與G4組附睪GPx活性升高,MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg,MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg,差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。

綜上所述, 加味聚精食療方聯合電針督脈可一定程度提高其附睪GPx 活性, 降低MDA水平, 從而改善附睪微環(huán)境和調控效應, 加快精子成熟, 提高少弱精子癥大鼠的生育力。

［1］ 陳鵬典, 黎杰運, 楊卓欣, 等.中醫(yī)藥對生精細胞凋亡干預機制研究進展.遼寧中醫(yī)藥大學學報, 2017, 19(3):110-113.

［2］ 陳慰填, 陳德寧, 覃湛, 等.加味聚精食療湯對少精弱精癥大鼠附睪中精子質量影響的實驗研究.新中醫(yī), 2009, 41(4):96-98.

［3］ 陳慰填, 陳德寧, 覃湛, 等.加味聚精食療湯對少精、弱精癥大鼠曲細精管結構改善的實驗研究.遼寧中醫(yī)藥大學學報,2009, 11(9):178-180.

［4］ 陳德寧, 洪志明, 周文彬, 等.加味聚精食療方對少、弱精子癥大鼠EGF、EGFR睪丸內表達的影響.世界中西醫(yī)結合雜志,2011, 6(11):940-943.

［5］ 陳德寧, 覃湛, 馬慶輝, 等.加味聚精食療方對少精子癥患者精子質量的影響.南京中醫(yī)藥大學學報, 2007, 23(3):184-185.

［6］ 陳鵬典, 楊卓欣, 黎杰運, 等.任督脈與孕育的相關性探析.中國民族民間醫(yī)藥, 2016, 25(13):49-53.

［7］ Zhang WD, Zhang Z, Jia LT, et al.Oxygen free radicals and mitochondrial signaling in oligospermia and asthenospermia.Mol Med Rep, 2014, 10(4):1875-1880.

［8］ García-Díaz EC, Gómez-Quiroz LE, Arenas-Ríos E, et al.Oxidative status in testis and epididymal sperm parameters after acute and chronic stress by cold-water immersion in the adult rat.Systems Biology in Reproductive Medicine, 2015, 61(3):150.

［9］ 耿強, 歐陽斌, 郭軍, 等.加味天雄散對少弱精子癥模型大鼠附睪氧化損傷的保護作用.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志, 2016(1):122-124.

［10］ 劉丹, 張子凡, 徐海燕.早期督脈電針干預對慢性腦缺血大鼠MDA、SOD的影響.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志, 2013,11(11):1362-1363.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.18.109

2017-07-24］

深圳市科技計劃基礎研究項目(項目編號：JCYJ20150402090413003)

518028 深圳市婦幼保健院(陳鵬典 寧艷 劉芳)；北京大學深圳醫(yī)院(黎杰運)；廣州中醫(yī)藥大學附屬深圳市中醫(yī)院(楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊)

黎杰運