羅輝泰+黃曉蘭 吳惠勤+張秋炎+朱志鑫+黃芳+林曉珊

摘要建立了QuEChERS同位素稀釋液相色譜四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜同時(shí)快速篩查化妝品中86種糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoids， GCs）的高通量方法。樣品經(jīng)乙腈提取，改進(jìn)的QuEChERS法凈化，待測(cè)物選用具有多重色譜保留機(jī)理的新型色譜柱Poroshell 120 PFP （100 mm×2.1 mm，2.7 μm），以0.2% （V/V）乙酸和乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫分離，在電噴霧離子源的正離子模式下建立了一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)及二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品即可完成化妝品中86種GCs的全面篩查與確證。所有待測(cè)物在2～200 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99， 3個(gè)添加水平的平均回收率為66.2%～112.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.6%～13.9%，檢出限（LOD，S/N≥3） 為0.006～0.015 mg/kg，定量限（LOQ，S/N≥10）為0.02～0.05 mg/kg。本方法簡(jiǎn)便高效、定性可靠、定量準(zhǔn)確，適用于化妝品中非法添加GCs的高通量篩查。

關(guān)鍵詞QuEChERS； 同位素稀釋； 高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜； 化妝品； 糖皮質(zhì)激素； 高通量篩查

1引 言

糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoids， GCs）是一類具有消炎及免疫抑制等藥理作用的甾體激素，是臨床上用于治療過(guò)敏性及炎癥性疾病的最常見(jiàn)藥物[1]。但長(zhǎng)期使用該類激素會(huì)導(dǎo)致皮膚血管擴(kuò)張、激素依賴性皮炎及不可逆轉(zhuǎn)的皮膚萎縮等局部副作用，甚至可引起骨質(zhì)疏松癥、高血壓及糖尿病等嚴(yán)重系統(tǒng)性損傷[2]。我國(guó)現(xiàn)行《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版） [3]及歐盟化妝品指令76/768/EEC[4]等法規(guī)明確規(guī)定，禁止在化妝品中添加GCs。然而，仍有廠家非法將其添加到化妝品中，使皮膚達(dá)到速效祛痘美白的作用，由此造成的化妝品安全事故頻繁發(fā)生，引起社會(huì)廣泛關(guān)注。更為嚴(yán)重的是，為規(guī)避政府監(jiān)管，添加不在法定檢驗(yàn)方法[5]監(jiān)測(cè)范圍的其它GCs的現(xiàn)象日益普遍。因此，建立種類更齊全、方法更簡(jiǎn)便高效的高通量篩查方法顯得非常迫切，對(duì)化妝品行業(yè)監(jiān)管及保障消費(fèi)者安全具有重要意義。

目前，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LCMS/MS）法[5～11]因具有高選擇性、高靈敏度等特點(diǎn)而成為GCs分析的主要方法。但通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式實(shí)現(xiàn)化合物同時(shí)定性與定量分析的LCMS/MS法只適用于已有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的已知目標(biāo)物，且檢測(cè)通量受四極桿掃描速度的限制，使得能同時(shí)檢測(cè)的目標(biāo)物數(shù)量有限，而無(wú)法真正實(shí)現(xiàn)高通量篩查。同時(shí)，在分析復(fù)雜基質(zhì)樣品時(shí)，低分辨的四極桿質(zhì)量分析器無(wú)法有效區(qū)分質(zhì)荷比相近的干擾物，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。近年來(lái)，諸如飛行時(shí)間質(zhì)譜儀、靜電軌道阱組合式質(zhì)譜儀等高分辨質(zhì)譜以其高質(zhì)量精度、高通量、高掃描速度及寬質(zhì)量范圍等優(yōu)勢(shì)開(kāi)始在殘留分析領(lǐng)域得到應(yīng)用[12，13]，配合化合物數(shù)據(jù)庫(kù)及譜庫(kù)檢索功能就可實(shí)現(xiàn)無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品的大量化合物高通量篩查和確證[14]。有研究者也在化妝品中少數(shù)幾種GCs的測(cè)定中進(jìn)行了簡(jiǎn)單的嘗試[15～17]，然而這些嘗試僅涉及少數(shù)化合物， 達(dá)不到高通量篩查要求，也不能有效區(qū)分GCs中存在的大量同分異構(gòu)體，無(wú)法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定性與定量分析。

本研究采用改進(jìn)的QuEChERS樣品處理方法，結(jié)合具有多重色譜保留機(jī)理的五氟苯基柱，首次建立了QuEChERS同位素稀釋QTOF同時(shí)快速篩查化妝品中86種GCs的方法。本方法在實(shí)現(xiàn)12組同分異構(gòu)體良好分離的基礎(chǔ)上，建立了86種GCs的一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)及二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)，從而實(shí)現(xiàn)了一次進(jìn)樣、無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品即可完成GCs的全面篩查與確證，是目前可同時(shí)測(cè)定GCs種類最多的高通量方法。本方法前處理簡(jiǎn)便高效， 同分異構(gòu)體分離良好，同位素內(nèi)標(biāo)定量準(zhǔn)確可靠，可為化妝品中GCs的高通量分析提供技術(shù)保障，極大地提高化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)控水平，保障化妝品使用安全。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

Agilent 6540液相色譜四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，配有Dual Agilent Jet Stream Electrospray Ionization（Dual AJS ESI） 源及Agilent MassHunter Workstation Software （version B.05.00）及Agilent MassHunter PCDL Manager （B.04.00）等軟件； AS 3120超聲波發(fā)生器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）； H1850離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）； XW80A快速混勻器（海門市麒麟醫(yī)用儀器廠）。

甲醇、乙腈及乙酸（LCMS級(jí)，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）； K4Fe（CN）6·3H2O、二水乙酸鋅、NaCl（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）； 無(wú)水MgSO4（分析純，上海晶純生化科技股份有限公司）； 十八烷基鍵合硅膠（BondesilC18）、N丙基乙二胺 （BondesilPSA） （美國(guó)Agilent公司）； 實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

86種GCs標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)： 純度≥95%，分別購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院、歐洲藥品質(zhì)量管理局、美國(guó)藥典委員會(huì)、加拿大TRC公司、美國(guó)Matrix Scientific公司、德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司及挪威CHIRON公司。10種同位素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（純度≥95%，加拿大TRC公司）。

所有化妝品樣品（包括水劑、乳液、膏霜及粉劑等類型）均為客戶委托送檢樣品。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

以甲醇或乙腈為溶劑，將所有GCs及同位素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)分別配制成1000 mg/L的單標(biāo)儲(chǔ)備液，置于棕色瓶中，于

Symbolm@@ 20℃保存，保存期6個(gè)月； 將10種同位素內(nèi)標(biāo)單標(biāo)儲(chǔ)備液用乙腈稀釋成10 mg/L的混合內(nèi)標(biāo)工作液，置棕色瓶中于4℃保存，保存期1個(gè)月； 適量吸取各單標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度均為50 μg/L。endprint

2.3QuEChERS樣品處理方法[7]

準(zhǔn)確稱取均勻試樣1.0 g（精確至0.01 g）于50 mL聚丙烯離心管中，加入50 μL混合內(nèi)標(biāo)工作液及10 mL水，充分渦旋分散，加入10 mL乙腈，渦旋提取1 min，超聲提取10 min； 取出，加入沉淀劑（0.106 g/mL K4Fe（CN）6 溶液及0.219 g/mL乙酸鋅溶液各0.2 mL），渦旋混勻1 min，加入鹽析劑（1.0 g NaCl及2.0 g MgSO4），振搖1 min，5000 r/min離心10 min； 移取上層清液5 mL至15 mL聚丙烯離心管，加入凈化劑（內(nèi)含0.15 g BondesilC18、0.15 g BondesilPSA及1.0 g MgSO4），渦旋混勻1 min，靜置5 min，5000 r/min 離心5 min，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

2.4色譜質(zhì)譜條件

2.4.1色譜條件色譜柱： 美國(guó)Agilent Poroshell 120 PFP柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）； 流動(dòng)相： A相為0.2% （V/V）乙酸溶液，B相為乙腈； 梯度洗脫程序： 0～4.00 min，18% B； 4.00～8.00 min，18%～22% B； 8.00～18.00 min，22%～32% B； 18.00～25.00 min，32%～42% B； 25.00～30.00 min， 42%～45% B； 30.00～32.00 min，45%～50% B； 32.00～35.00 min，50%～55% B； 35.00～35.01 min，55%～95% B； 35.01～36.50 min，95% B； 36.51～40.0 min，18% B。流速： 0.4 mL/min； 進(jìn)樣量： 5 μL； 柱溫： 35℃。

2.4.2質(zhì)譜條件電噴霧雙噴離子源正離子模式（ESI+）； 毛細(xì)管電壓： 4000 V； 干燥氣（N2）溫度： 325℃； 干燥氣流量： 10 L/min； 鞘流氣（N2）溫度： 325 ℃； 鞘流氣流速： 11 L/min； 霧化氣（氮?dú)猓毫?75.8 kPa； 錐孔電壓： 60 V； 碎裂電壓： 125 V。全掃描范圍： m/z 50～1000，采用參比內(nèi)標(biāo)溶液對(duì)質(zhì)量軸作實(shí)時(shí)校正，參比內(nèi)標(biāo)溶液含嘌呤（m/z 121.0509）和HP0921（m/z 922.0098）。二級(jí)碎片離子數(shù)據(jù)通過(guò)Targeted MS/MS模式在確定的保留時(shí)間、母離子和最佳碰撞能量下獲得，如表1所示（限于篇幅，僅列出12組同分異構(gòu)體化合物）。所有化合物的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)信息詳見(jiàn)電子版文后支持信息的表A.1。

2.5定性篩查與定量測(cè)定

在優(yōu)化的色譜質(zhì)譜條件下，將處理好的待測(cè)樣液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液作一級(jí)全掃描分析。用一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)采集的樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索， 得分高于70分，可初步確定含有可疑目標(biāo)物； 在最佳碰撞能量下，對(duì)可疑化合物的母離子作二級(jí)子離子掃描，將獲得的碎片離子譜圖與二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)

3結(jié)果與討論

3.1色譜條件的優(yōu)化

GCs是在環(huán)戊烷駢多氫菲基本母核基礎(chǔ)上修飾得到的一系列化合物[18]，涉及大量同分異構(gòu)體，尤其是多組差向異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)差異極小，分離難度較大。因此，在前期研究[6，19]的基礎(chǔ)上，本研究選用具有多重保留機(jī)制的Poroshell 120 PFP （100 mm×2.1 mm，2.7 μm）及Poroshell 120 PhenylHexyl（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，在3種不同流動(dòng)相組成條件下，五氟苯基（PFP）柱較苯基己基（PhenylHexyl）柱均表現(xiàn)出更好的選擇性，可實(shí)現(xiàn)地塞米松與倍他米松、22R布地奈德與22S布地奈德等差向異構(gòu)體的良好分離。究其原因，這可能是PFP柱除具有苯基官能團(tuán)的疏水相互作用與ππ相互作用外，還因其具有高電負(fù)性氟官能團(tuán)，增加了其與化合物的偶極偶極及電荷轉(zhuǎn)移作用，從而改善了其對(duì)結(jié)構(gòu)相近化合物的選擇性，而PhenylHexyl柱只有疏水相互作用與ππ相互作用。因此，選擇Poroshell 120 PFP （100 mm×2.1 mm，2.7 μm）色譜柱作為本方法的分析柱，并對(duì)流動(dòng)相和梯度洗脫程序等色譜條件進(jìn)行反復(fù)優(yōu)化，使得86種GCs保留時(shí)間分布較均勻（11.8%在0～10 min，23.5%在10～15 min， 20.0%在15～20 min，17.6%在20～25 min，22.4%在25～30 min，4.7%在30～35 min），并實(shí)現(xiàn)了所有12組共30種同分異構(gòu)體的良好分離。圖1為所有同分異構(gòu)體的色譜分離情況。

3.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化及篩查數(shù)據(jù)庫(kù)的建立

3.2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化在電噴霧雙噴離子源的正離子模式和負(fù)離子模式下，對(duì)濃度為1.0 mg/L的所有化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液分別做不同碎裂電壓下的一級(jí)全掃描及二級(jí)碎片離子掃描。正離子模式的一級(jí)掃描結(jié)果表明，碎裂電壓為125 V時(shí)獲得最佳響應(yīng)，少數(shù)幾個(gè)化合物的基峰離子為加合離子[M+Na]+，其余GCs的基峰離子為準(zhǔn)分子離子[M+H]+，碎裂電壓過(guò)低不利于離子的傳輸，而過(guò)高的碎裂電壓易引起部分化合物的源內(nèi)裂解，生成大量[M+H-H2O]+或[M+H-HF]+等碎片離子； 而負(fù)離子模式的一級(jí)掃描結(jié)果顯示，少數(shù)幾個(gè)化合物的基峰離子為[M-H]

Symbolm@@ ，其余GCs的基峰離子為加合離子[M+COOH]

Symbolm@@ ，且該模式下基峰強(qiáng)度大多不及正離子模式。比較二級(jí)碎片離子掃描結(jié)果，負(fù)離子模式的碎片信息明顯少于正離子模式，[M+Na]+的碎片信息明顯少于[M + H]+。因此，選擇在正離子模式下以[M + H]+為母離子建立篩查數(shù)據(jù)庫(kù)。endprint

在二級(jí)質(zhì)譜優(yōu)化過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)GCs在較低碰撞能量（通常小于15 V）下主要發(fā)生脫H2O、脫HF及17位支鏈的不同程度斷裂等裂解方式，生成[M + H-H2O]+、[M + H-2H2O]+、[M + H-HF]+、[M + H-2HF]+、[M + H-H2O-HF]+等碎片離子； 隨著碰撞能量的不斷增加，環(huán)戊烷駢多氫菲母核相繼發(fā)生開(kāi)環(huán)裂解，以地塞米松為例，D環(huán)開(kāi)裂產(chǎn)生m/z 237.1274碎片離子，C環(huán)開(kāi)裂產(chǎn)生m/z 199.1117、185.0961、171.0804及161.0961等碎片離子，B環(huán)開(kāi)裂產(chǎn)生m/z 147.0804、135.0804、121.0648及107.0491等碎片離子，其中某些碎片離子在其它GCs的二級(jí)譜圖中均能發(fā)現(xiàn)，這表明含有相同基本母核的GCs大多遵循類似質(zhì)譜裂解規(guī)律而產(chǎn)生相同的特征碎片離子，與文獻(xiàn)[20，21]報(bào)道一致。以地塞米松為例，GCs可能的裂解途徑及主要特征碎片結(jié)構(gòu)如圖2所示。

3.2.2一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)的建立在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)樣，對(duì)86種GCs作正離子模式下的TOFMS全掃描分析，通過(guò)化合物分子式檢索一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)，當(dāng)精確質(zhì)量數(shù)偏差低于5 ppm，且得分>90的化合物認(rèn)為被識(shí)別，將該色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物名稱、分子式、精確分子量、母離子形式、母離子精確質(zhì)量數(shù)及保留時(shí)間等信息導(dǎo)入PCDL數(shù)據(jù)庫(kù)軟件，得到86種GCs的一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)，用于軟件初步篩查分析。限于篇幅，表1僅列出部分化合物的質(zhì)譜信息。

3.2.3二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)的建立在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)樣，對(duì)已獲得精確質(zhì)量數(shù)的母離子作不同碰撞能量（5～50 eV，以5 eV為間隔）的Targeted MS/MS掃描，采集并分析所有二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖，從中選擇碎片離子信息較為豐富的4個(gè)碰撞能量下的碎片離子質(zhì)譜圖導(dǎo)入PCDL數(shù)據(jù)庫(kù)軟件，與對(duì)應(yīng)化合物關(guān)聯(lián)，得到86種GCs二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)，用于精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)初篩結(jié)果的最終確認(rèn)。另外，將高于基峰響應(yīng)10%的碎片離子作為該化合物的定性點(diǎn)，取定性點(diǎn)最多的碰撞能量作為其確證的最佳條件，列入表1。結(jié)果表明，所有待測(cè)物的定性點(diǎn)均達(dá)到5個(gè)以上，完全滿足歐盟2002/657/EC決議[22]對(duì)質(zhì)譜分析方法的規(guī)定。

3.3樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

3.3.1樣品提取條件的優(yōu)化前期研究[6]發(fā)現(xiàn)，甲醇或乙腈可以作為提取化妝品中GCs的溶劑，考慮到甲醇的鹽析效果較差，不利于后續(xù)采用QuEChERS方式凈化樣液，因此選用乙腈作為提取劑。實(shí)驗(yàn)比較了樣品直接加乙腈與先加水分散樣品再加乙腈的提取效果，結(jié)果表明，對(duì)于化妝水等水劑基質(zhì)，兩者的提取回收率無(wú)顯著差異； 而對(duì)于膏霜、乳液及粉劑等基質(zhì)，后者的提取回收率明顯高于前者。

3.3.2QuECHERS凈化條件的優(yōu)化化妝品基質(zhì)復(fù)雜，盡管經(jīng)K4Fe（CN）6乙酸鋅進(jìn)行物理絮凝后，樣液中的大分子雜質(zhì)（如蠟質(zhì)、硅油等）已基本除去，但仍含少量增溶劑（如蓖麻油及色素等）雜質(zhì)，需進(jìn)一步凈化?，F(xiàn)有方法主要采用固相萃取凈化方式[5，6]，成本高且步驟較多，難以實(shí)現(xiàn)高通量快速篩查。為此，我們采用更簡(jiǎn)便快速的QuEChERS凈化手段[7]。針對(duì)樣液中可能殘存的雜質(zhì)，選用可有效吸附弱極性雜質(zhì)的BondesilC18以及可去除有機(jī)酸、色素及金屬離子的BondesilPSA作為凈化吸附劑。另外，樣液殘留的水分能降低BondesilPSA吸附能力，因此選用無(wú)水MgSO4作為水分吸收劑。最終確定的凈化劑組合為0.15 g BondesilC18、0.15 g BondesilPSA及1.0 g MgSO4。

3.4基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)是質(zhì)譜分析尤其是液相色譜電噴霧質(zhì)譜分析中普遍存在的，共流出干擾物對(duì)目標(biāo)物離子造成的不可預(yù)期的離子抑制（大多數(shù)情形）或增強(qiáng)效應(yīng)[23，24]。本研究采用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法，結(jié)合優(yōu)化良好的樣品凈化手段和色譜分離條件，很好地減少或消除了基質(zhì)效應(yīng)，方法各項(xiàng)性能指標(biāo)良好。

為了驗(yàn)證本篩查方法的可靠性，采用已建立的一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)及二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)添加了86種糖皮質(zhì)激素的膏霜類化妝品樣品（0.1 mg/kg）進(jìn)行自動(dòng)檢索。結(jié)果表明，86種化合物均與一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配良好，質(zhì)量精度<5 ppm，檢索得分均高于75，二級(jí)碎片離子的種類和相對(duì)豐度均與二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)匹配良好。

3.5方法學(xué)考察

3.5.1方法的線性范圍與檢出限對(duì)6個(gè)濃度在2～200 μg/L之間的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定。所有GCs均以其母離子與相應(yīng)同位素內(nèi)標(biāo)母離子峰面積的比值（y）為縱坐標(biāo)，以濃度（x， μg/L）為橫坐標(biāo)做內(nèi)標(biāo)定量工作曲線，各目標(biāo)物在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99。以信噪比（S/N）≥3確定86種目標(biāo)物的檢出限為0.006～0.015 mg/kg，S/N≥10確定定量限為0.02～0.05 mg/kg， 完全滿足現(xiàn)行法規(guī)要求[3，5]。

3.5.2方法的回收率和精密度按前述方法，取基質(zhì)最復(fù)雜的空白膏霜樣品，做3個(gè)添加水平（LOQ、5LOQ、10LOQ）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加水平6次平行測(cè)定，計(jì)算各待測(cè)物的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果表明，方法的平均加標(biāo)回收率在66.2%～112.8%之間，RSD在4.6%～13.9%之間，準(zhǔn)確度和精密度均符合相關(guān)法規(guī)要求。所有化合物的方法學(xué)數(shù)據(jù)詳見(jiàn)電子版文后支持信息的表A.2。

3.6實(shí)際樣品篩查

采用本法對(duì)2016年第4季度客戶送檢的35份化妝品樣品進(jìn)行篩查，其中1份檢出倍他米松戊酸酯（52.8 mg/kg）、1份檢出氟輕松（46.2 mg/kg）、2份檢出地索奈德（76.5和47.1 mg/kg）、2份檢出雙氟拉松（48.6和65.8 mg/kg），除倍他米松戊酸酯外，其余檢出成分均不在GB/T 24800.22009測(cè)定范圍。這表明，非法添加法定檢測(cè)方法之外化合物的現(xiàn)象已相當(dāng)普遍，而使用本方法能準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)并測(cè)定非法添加物，可協(xié)助相關(guān)政府部門提高風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)控水平。endprint

4結(jié) 論

建立了針對(duì)化妝品中86種GCs的LCQTOF高通量定性篩查和定量方法。本方法引入具有多重色譜保留作用的PFP柱，實(shí)現(xiàn)了12組同分異構(gòu)體的良好分離，建立了迄今為止種類最齊全的GCs色譜高分辨質(zhì)譜篩查數(shù)據(jù)庫(kù)。樣品經(jīng)優(yōu)化的QuEChERS法處理后，采用LCQTOF快速篩查確證，并對(duì)陽(yáng)性化合物按同位素內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確定量分析，方法簡(jiǎn)便高效、定性可靠、定量準(zhǔn)確，適用于水劑、膏霜、乳液、粉劑等常見(jiàn)化妝品基質(zhì)中GCs的高通量篩查。

References

1Burg G， Dummer R G.Strategies for Immunointerventions in Dermatology. Springer Berlin Heidelberg， 1997： 131-146

2Schcke H， Dcke W D， Asadullah K.Pharmacol. Ther.， 2002， 96（1）： 23-43

3China Food and Drug Administration.Safety and Technical Standards for Cosmetics （2015 Edition）. Beijing， 2015： 57-58

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局. 化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）. 北京， 2015： 57-58

4Communities E. The Rules Governing Cosmetic Products in the European Union， Office for Official Publications of the European Communities， 2000： 5

5GB/T 24800.22009，Determination of 41 Glucocorticoids in Cosmetics by LCMSMS and TLC Method. National Standards of the Peoples Republic of China

化妝品中41種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定 液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法和薄層層析法. 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn). GB/T 24800. 22009

6LUO HuiTai， HUANG XiaoLan， WU HuiQin， ZHU ZhiXin， HUANG Fang， LIN XiaoShan， MA YeFen， DENG Xin， ZHOU PeiCai， ZHANG QiuYan， JIAN YanTing. Journal of Instrumental Analysis， 2016， 35（02）： 119-126

羅輝泰， 黃曉蘭， 吳惠勤， 朱志鑫， 黃 芳， 林曉珊， 馬葉芬， 鄧 欣， 周培才， 張秋炎， 簡(jiǎn)艷婷. 分析測(cè)試學(xué)報(bào)， 2016， 35（02）： 119-126

7Zhan J， Ni M L， Zhao H Y， Ge X M， He X Y， Yin J Y， Yu X J， Fan Y M， Huang Z Q. J. Sep. Sci.， 2014， 37（24）： 3684-3690

8Giaccone V， Polizzotto G， Macaluso A， Cammilleri G， Ferrantelli V. Int. J. Anal. Chem.， 2017， 2017： 1-12

9Nam Y S， Kwon I K， Lee Y， Lee K B. Forensic Sci. Int.， 2012， 220（13）： e23-e8

10Golubovic' J B， Otaevic' B M， Protic' A D， Stankovic'A M， Zecˇevic' M L. Rapid Commun. Mass Spectrom.， 2015， 29（24）： 2319-2327

11Fiori J， Andrisano V. J. Pharm. Biomed. Anal.， 2014， 91： 185-192

12LI Qing， LUO HuiTai， HUANG XiaoLan， ZHU ZhiXin， WU HuiQin. Chinese J. Anal. Chem.， 2014， 42（10）： 1478-1485

李 晴， 羅輝泰， 黃曉蘭， 朱志鑫， 吳惠勤. 分析化學(xué)， 2014， 42（10）： 1478-1485

13CHEN DaWei， YIN YiQun， MIAO Hong， ZHAO YunFeng. Chinese J. Anal. Chem.， 2015， 43（4）： 570-575

陳達(dá)煒， 殷軼群， 苗 虹， 趙云峰. 分析化學(xué)， 2015， 43（4）： 570-575

14Meng Z， Shi Z H， Liang S X， Dong X F， Lv Y K， Sun H W. Food Control， 2015， 55： 158-165

15LI ZhaoYong， WANG FengMei， NIU ZengYuan， LUO Xin， ZHANG Gang， CHEN JunHui. Chinese Journal of Chromatography， 2016， 34（5）： 481-489

李兆永， 王鳳美， 牛增元， 羅 忻， 張 罡， 陳軍輝. 色譜， 2014， 32（5）： 477-484

16Zhang J L， Li Z， Zhou Z G， Bai Y， Liu H W. Rapid Commun. Mass Spectrom.， 2016， 30 Suppl 1（S1）： 133-140endprint

17LI Qiang， ZHANG XiaoGuang， MA JunMei， LI RunYan， FAN SuFang， ZHANG Yan. Journal of Instrumental Analysis， 2016， 35（02）： 179-184

李 強(qiáng)， 張曉光， 馬俊美， 李潤(rùn)巖， 范素芳， 張 巖. 分析測(cè)試學(xué)報(bào)， 2016， 35（2）： 179-184

18BAI DongLu， CHEN KaiXian. Advanced Medicinal Chemistry. Beijing： Chemical Industry Press， 2011： 1091-1101

白東魯， 陳凱先. 高等藥物化學(xué). 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社， 2011： 1091-1101

19LUO HuiTai， HUANG XiaoLan， WU HuiQin， ZHU ZhiXin， HUANG Fang， LIN XiaoShan， ZHANG QiuYan， MA YeFen. Chinese Journal of Chromatography， 2016， 34（5）： 481-489

羅輝泰， 黃曉蘭， 吳惠勤， 朱志鑫， 黃 芳， 林曉珊， 張秋炎， 馬葉芬. 色譜， 2016， 34（5）： 481-489

20Hou S， Hindle M， Byron P R. J. Pharm. Biomed. Anal.， 2005， 39（12）： 196-205

21Arthur K E， Wolff J C， Carrier D J. Rapid Commun. Mass Spectrom.， 2004， 18（6）： 678-684

22Implementing Council Directive 96/23/EC Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results（2002/657/EC）. Off. J. Eur. Communities， 2002， 1221： 8-36

23Antignac J P， de Wasch K， Monteau F， de Brabander H， Le Bizec B. Anal. Chim. Acta， 2005， 529（12）： 129-136

24Taylor P J. Clin. Biochem.， 2005， 38（4）： 328-334

High Throughput Screening of 86 Kinds of Glucocorticoids in Cosmetics

Using QuEChERS and Isotope DilutionLiquid Chromatography

Copuled to High Resolution TimeofFlight Mass Spectrometry

LUO HuiTai， HUANG XiaoLan*， WU HuiQin， ZHANG QiuYan， ZHU ZhiXin， HUANG Fang， LIN XiaoShan

（Guangdong Provincial Key Laboratory of Emergency Test for Dangerous Chemicals，

China National Analytical Center， Guangzhou， Guangzhou 510070， China）

AbstractA high throughput screening method based on QuEChERS purification and stable isotope dilutionliquid chromatography coupled to high resolution timeofflight mass spectrometry was developed for the simultaneous rapid determination of 86 kinds of glucocorticoids （GCs） in cosmetics. The analytes were extracted by acetonitrile， and then the extracts were purified using an improved QuEChERS method. The chromatographic separation was performed on a novel multiple chromatographic retention mechanisms column of Poroshell 120 PFP （100 mm × 2.1 mm， 2.7 μm） with gradient elution using 0.2% （V/V） acetic acid and acetonitrile as mobile phase. The accurate mass database of parent ions and mass spectra library of fragment ions of 86 GCs were established under positive ionization mode with electrospray ionization source. Based on the method described above， the qualitative identifications of the 86 GCs were accomplished without the contrast of standard substances. The results demonstrated that the linear range of this method was from 2 μg/L to 200 μg/L with good correlation coefficients of R2>0.99. The average recoveries of the 86 GCs ranged from 66.2% to 112.8%， and the relative standard deviation （RSDs） was 4.6%-13.9% at three different spiked levels. The limit of detection （LOD） and quantification （LOQ） were 0.006-0.015 mg/kg and 0.02-0.05 mg/kg， respectively. The method is simple， efficient， reliable and accurate， and is suitable for high throughput screening of 86 GCs added illegally in cosmetics.

KeywordsQuEChERS； Isotope dilution； High resolution timeofflight mass spectrometry； Cosmetics； Glucocorticoids； High throughput Screening

（Received 27 March 2017； accepted 20 June 2017）endprint