黃顯章 康利平 高麗 張元 郭蘭萍 黃璐琦

[摘要]為了評價“海艾”、“蘄艾”、“北艾”、“祁艾”和南陽艾葉品質，利用高效液相色譜法同時測定艾葉中棕矢車菊素和異澤蘭黃素的含量。采用Agilent Eclipse XDBC18色譜柱（46 mm×250 mm， 5 μm），流動相為乙腈02%磷酸溶液（35∶65），流速 10 mL·min-1，檢測波長350 nm，柱溫 25 ℃。棕矢車菊素和異澤蘭黃素分別在0003～0126 g·L-1 （r=0999 9），0005～0200 g·L-1 （r=0999 9）呈良好的線性關系，平均回收率（n=6） 分別為9914% （RSD 12%），9940% （RSD 073%），說明該方法準確可靠、重復性好，是用于艾葉的質量控制的有效方法。結果表明不同產(chǎn)地艾葉中棕矢車菊素含量差異較小，不同產(chǎn)地艾葉中異澤蘭黃素的含量差異較大，淮河以南的浙江寧波、湖北蘄春、湖北襄陽、河南南陽的艾葉和淮河以北湯陰艾葉、安國艾葉中異澤蘭黃素含量相對較高。

[關鍵詞]艾葉； 棕矢車菊素； 異澤蘭黃素； 含量研究

Quantative analysis of eupatilin and jaceosidin in folium of Artemisia argyi from

different areas in China by RPHPLC based on ancient medicine books

HUANG Xianzhang1，2，3， KANG Liping1， GAO Li3， ZHANG Yuan1， GUO Lanping1， HUANG Luqi1*

（1. State Key Laboratory Breeding Base of Daodi Herbs， National Resource Center for Chinese Materia Medica，

China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

2. Postdoctoral Research Station， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

3. Henan Province Key Laboratory of Zhang Zhongjing Formulae and Herbs for Immunoregulation，

Nanyang Institute of Technology， Nanyang 473004， China）

[Abstract]In order to evaluate the quality of Artemisia argyi from Qichun， Ningbo， Anguo and Nanyang， the contents of eupatilin and jaceosidin were determined by RPHPLC The determination was performed on Agilent Eclipse XDBC18 （46 mm×250 mm， 5 μm） with mobile phase consisted of acetonitrile02% phosphoric acid（35∶65） at the flow rate 10 mL·min-1 The detection wavelength was 350 nm and the column temperature was 25 ℃ The results showed that the amount of eupatilin and jaceosidin had a clear linear relationship in the range of 00030126 g·L-1 （r=0999 9） and 00050200 g·L-1 （r=0999 9）， and the average recovery rates for them were 9914% （n=6， RSD 12%） and 9940% （n=6， RSD=073%）， respectively The results showed that RPHPLC can be used for the quantification of eupatilin and jaceosidin in the folium of A argyi With this method， we found there was no significant difference of jaceosidin content within all the samples collected， but the content of eupatilin was significantly higher in samples from Qichun， Ningbo， Xiangyang and Nanyang， located in the south of Huaihe River compared with these from other areas

[Key words]folium of Artemisia argyi； jaceosidin； eupatilin； quantative analysis

艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levl et Vant 的干燥葉，具有溫經(jīng)止血、散寒止痛的作用[1]，為我國常用中藥材。我國現(xiàn)存第一部醫(yī)方書《五十二病方》[2]和《黃帝內(nèi)經(jīng)》中均有使用艾葉治療疾病的記載，但歷代本草對艾葉道地產(chǎn)地的記載不盡相同。宋代蘇頌《本草圖經(jīng)》載：“艾葉、舊不著所出州土，但云生田野，今處處有之，以復道（及四明）者為佳”[3] 。明代劉文泰等撰寫的《本草品匯精要》中有艾葉“道地：蘄州、明州”的記載[4]。明代李時珍則對艾葉的道地產(chǎn)地作了詳細描述：“（艾葉）宋時以湯陰復道者為佳，四明者圖形。近代惟湯陰者謂之北艾，四明者謂之海艾”[5]。《中國道地藥材》把產(chǎn)自河北安國（古稱祁州）的艾葉稱為“祁艾”，并提出了“河北安國的祁艾和湖北蘄春的蘄艾道地特性有待比較”的觀點[6]。時至今日，歷代本草文獻明確提出的艾葉道地產(chǎn)地有“四明”、“復道”、“蘄州”、“祁州”等地，即現(xiàn)在的浙江寧波、河南湯陰、湖北蘄春和河北安國境內(nèi)，且寧波艾葉被稱為“海艾”，湯陰艾葉被稱為“北艾”，安國艾葉被稱為“祁艾”。endprint

2015年版《中國藥典》（一部）以桉油精為指標來控制艾葉的質量，但是桉油精的含量受產(chǎn)地、采集時間和儲存時間的影響較大[78]。艾葉中的黃酮類成分棕矢車菊素和異澤蘭黃素有多種生理活性，是艾葉的有效成分[913]。在文獻報道的UPLCQTOFMS圖譜上[14]，以及作者對其水溶性成分研究的LCMS圖譜上，發(fā)現(xiàn)棕矢車菊素和異澤蘭黃素也是艾葉中的主要化學成分，見圖1。為了更為全面地評價艾葉的品質，結合歷代文獻記載艾葉的道地產(chǎn)地和目前艾葉的實際使用情況，本課題組在同一時間（2015年端午節(jié)）[15]按照緯度從南到北分別采集浙江寧波余姚、湖北蘄春、河南南陽、河南湯陰、河北安國、山東臨沂等地的艾葉，采用RPHPLC同時測定不同產(chǎn)地艾葉中黃酮類成分棕矢車菊素和異澤蘭黃素的含量，為更好的評價艾葉藥材的品質及其道地性奠定基礎。

1材料

11儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀；超聲波清洗機（上海早盈精密清洗機械有限公司）；

SA224SCW電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）。

12試藥棕矢車菊素對照品（ jaceosidin，純度為9850%，成都普菲德生物技術有限公司，批號 151010）和異澤蘭黃素對照品（eupatilin，純度為9948%，成都普菲德生物技術有限公司，批號 150120）；乙腈（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲醇（一級色譜純，天津市四友精細化學品有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）；其余試劑均為分析純。

13批艾葉樣品分別采自浙江寧波余姚、湖北蘄春、湖北襄陽市郊、河南南陽市郊、河南西峽、河南桐柏、河南湯陰、河北安國、河北博野和保定市郊。經(jīng)鑒定均為菊科植物艾A argyi的干燥葉。

2方法與結果

21色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse XDBC18（46 mm×250 mm， 5 μm）；流動相：乙腈02%磷酸溶液（35∶65）；檢測波長 350 nm；流速 10 mL·min-1；柱溫 25 ℃；進樣量 20 μL?；旌蠈φ掌泛蜆悠返囊合嗌V圖見圖2。

22對照品溶液的制備精密稱取棕矢車菊素對照品63 mg和異澤蘭黃素對照品100 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備液，置4 ℃冰箱避光保存，備用。

23供試品溶液的制備取艾葉粉末05 g，精密稱定，精密加入甲醇20 mL，稱質量，超聲提取30 min，放涼，再次稱質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，以濾紙濾過，取續(xù)濾液，過045 μm微孔濾膜，即得。

24線性關系考察精密吸取混合對照品貯備液0125，025，05，10，20，30，40，50 mL，分別置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋并定容，搖勻。分別吸取20 μL，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品質量濃度（X，g·L-1）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得棕矢車菊素、異澤蘭黃素的回歸方程分別為Y=79 790X+33585（r=0999 9，n=8）和Y=76 226X+55959（r=0999 9，n=8）。結果表明，棕矢車菊素和異澤蘭黃素的質量濃度分別在0003～0126，0005～0200 g·L-1與各自峰面積積分值呈良好的線性關系。

25精密度試驗取同一混合對照品溶液20 μL，按21項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結果顯示，棕矢車菊素和異澤蘭黃素峰面積的RSD 分別為071%，070%（n=6），表明儀器精密度良好。

26穩(wěn)定性試驗 取艾葉樣品（編號 Ar9），按23項下方法制備供試品溶液，室溫避光保存，分別于0，2，4，6，8，12，24 h按21項下色譜條件進樣，測定峰面積。結果顯示，棕矢車菊素和異澤蘭黃素峰面積的RSD分別為17%，075%（n=7），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

27重復性試驗取艾葉樣品（編號 Ar9）6 份，每份05 g，精密稱定，分別按23項下方法制備供試品溶液，再按21項下色譜條件進樣，測定峰面積。結果顯示，棕矢車菊素的平均質量分數(shù)為011%，RSD 12%（n=6）；異澤蘭黃素的平均質量分數(shù)為023%，RSD 12%（n=6），表明本方法重復性良好。

28加樣回收率試驗取已知含量的艾葉樣品（編號 Ar9）6 份，各025 g，精密稱定，分別精密加入棕矢車菊素和異澤蘭黃素對照品適量，按23項下方法制備供試品溶液，再按21項下色譜條件進樣，測定峰面積，計算加樣回收率，見表1。

29樣品含量測定取13 批艾葉樣品，分別按23項下方法制備供試品溶液，按21項下色譜條件進樣，記錄峰面積，以峰面積計算樣品含量，見表2。

3結論

本課題組采用RPHPLC對不同產(chǎn)地的13批艾葉中棕矢車菊素和異澤蘭黃素2種有效成分同時進行含量測定。結果表明，從南到北不同產(chǎn)地艾葉中棕矢車菊素含量差異較小，質量分數(shù)在004%～011%；不同產(chǎn)地艾葉中異澤蘭黃素含量差異較大，整體上看，淮河以南的浙江寧波、湖北蘄春、湖北襄陽、河南南陽的艾葉中異澤蘭黃素含量相對穩(wěn)定，質量分數(shù)在019%～024%；淮河以北地區(qū)，文獻記載的湯陰艾葉和安國（古稱祁州）艾葉所含異澤蘭黃素含量相對較高，其他地區(qū)艾葉異澤蘭黃素含量較低。

4討論

2015年版《中國藥典》（一部）以桉油精為指標來控制艾葉的質量，但是桉油精的含量受產(chǎn)地、采集時間和儲存時間的影響較大[78]，而艾葉中的黃酮類成分矢車菊素和異澤蘭黃素有多種生理活性，結構穩(wěn)定，是艾葉的有效成分[915]，因此，本實驗建立了HPLC同時測定艾葉藥材中棕矢車菊素和異澤蘭黃素的方法。研究結果表明，該方法重復性良好，靈敏度高，操作簡便，可以作為艾葉藥材質量控制的方法[1618]。endprint

本論文根據(jù)文獻記載，在同一時間采集了“海艾”（寧波艾葉）[34]、“蘄艾”（蘄春艾葉）[4 5]、“北艾”（湯陰艾葉）[3，5]、“祁艾”（安國艾葉）[6]和南陽艾葉，測定艾葉中棕矢車菊素和異澤蘭黃素的含量。結果表明，不同產(chǎn)地艾葉中棕矢車菊素含量普遍不高，差異較??；不同產(chǎn)地艾葉中異澤蘭黃素含量差異較大，淮河以南地區(qū)的寧波、蘄春、南陽艾葉中異澤蘭黃素含量較高且相對穩(wěn)定，淮河以北地區(qū)艾葉中異澤蘭黃素含量差異較大，文獻記載的湯陰艾葉[3]和祁州艾葉[6]所含異澤蘭黃素含量相對較高，其他地區(qū)艾葉所含異澤蘭黃素含量較低，提示艾葉中異澤蘭黃素含量與分布區(qū)域及區(qū)域的土壤、光照等小環(huán)境有一定的聯(lián)系。

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[責任編輯呂冬梅]endprint